Name: actin co-sedimentation assay; for the analysis of protein binding to f-actin
Uploaded: 2008-03-28T01:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Actin Co-Sedimentation Assay; for the Analysis of Protein Binding to F-Actin at JoVE.com

Спасибо доктору Praveen Kumar в Wittman лаборатории в UCSF для фильма актина в НаСаТ клеток.

1. Подготовка актина Источником актина, используемые в этом анализе был без мышц тромбоцитов человека (β-актин), полученных из цитоскелета Инк аликвоты акции по 10 мг / мл хранятся в морозильной камере -70 º C. Для анализа, актин разбавляют до 0,4 мг / мл в буфере, содержащем 5 мМ Тр...

<ol>
	<li>Senetar, M. A., Foster, S. J., McCann, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrasteric+inhibition+mediates+the+interaction+of+the+I/LWEQ+module+proteins+Talin1,+Talin2,+Hip1,+and+Hip12+with+actin.">Intrasteric inhibition mediates the interaction of the I/LWEQ module proteins Talin1, Talin2, Hip1, and Hip12 with actin.</a> Biochemistry. 14, 15418-15428 (2004).</li><li>Goldmann, W. H., Hess, D., Isenberg, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+intact+talin+and+talin+tail+fragment+on+actin+filament+dynamics+and+structure+depends+on+pH+and+ionic+strength.">The effect of intact talin and talin tail fragment on actin filament dynamics and structure depends on pH and ionic strength.</a> Eur J Biochem. 260, 439-445 (1999).</li><li>Lee, H., Bellin, R. M., Walker, D. L., Patel, B., Powers, P., Liu, H., Garcia-Alvarez, B., de Pereda, J., Liddington, R. C., Volkmann, N., Hanein, D., Critchley, D. R., Robson, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+an+Actin-binding+Site+within+the+Talin+FERM+Domain.">Characterization of an Actin-binding Site within the Talin FERM Domain.</a> J Mol Biol. 22, 771-784 (2004).</li></ol>

Актина совместного отстаивания просто в пробирке анализа для анализа белков specfic связывания с F-актина. В этом видео мы покажем один пример того, как простой актина совместного осаждения может быть осуществлена. Мы покажем, как готовить F-актин, подготовить белка для проверки и процедуры актина сов...

actin co-sedimentation assay; for the analysis of protein binding to f-actin

Актина цитоскелета в клетке представляет собой сеть из нитей актина, который позволяет движение клеток и клеточных процессов, и это создает напряжение и помогает поддерживает сотовые форму. Хотя цитоскелета актина является жесткой структурой, это динамическая структура, которая постоянно ремоделирования. Количество белков могут быть привязаны к актина цитоскелета. Связывания конкретного белка в F-актин часто желаемое для поддержки ячейки биологических наблюдений или для более глубокого понимания динамических процессов за счет реконструкции актина цитоскелета. Актина совместного осаждения анализа является анализ в лабораторных обычно используется для анализа связывания специфических белков или белковых доменов с F-актина. Основные принципы анализа привлекать инкубации белок (полной длины или области) с F-актин, ультрацентрифугирования шаг к гранулы F-актин и анализа белков совместно осаждающихся с F-актина. Актина совместного осаждения анализов могут быть разработаны соответственно для измерения аффинности связывания актина и в анализах конкуренции.

Watch this Scientific Journal Video about Actin Co-Sedimentation Assay; for the Analysis of Protein Binding to F-Actin at JoVE.com

Actin Co-Sedimentation Assay; for the Analysis of Protein Binding to F-Actin

Белки связываются с нитчатые актина (Ф-актин), через различные актина обязательные модули. В этом видео мы продемонстрируем процедуры актина совместного осаждения, которая в пробирке анализ обычно используется для анализа белков или конкретных областях, которые связывают F-актина.

Актина сотрудничества седиментации Пробирной; для анализа связывание белка с F-актин

The actin cytoskeleton within the cell is a network of actin filaments that allows the movement of cells and cellular processes, and that generates ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Neuronal and Astrocyte Co-Culture Assay for High Content Analysis of Neurotoxicity

Нейронов и астроцитов сотрудничеству культуры Пробирной высоких Анализ содержания Нейротоксичность

High Content Analysis (HCA) assays combine cells and detection reagents with automated imaging and powerful image analysis algorithms, allowing ...

Detection of Protein Ubiquitination

Обнаружение белка убиквитинирования

Ubiquitination, the covalent attachment of the polypeptide ubiquitin to target proteins, is a key posttranslational modification carried out by a set of ...

Live Cell Imaging of F-actin Dynamics via Fluorescent Speckle Microscopy (FSM)

Live Cell Imaging of F-actin Dynamics via Fluorescent Speckle Microscopy FSM

Живая изображений Сотовые Ф-актина Динамика через Флуоресцентный Спекл микроскопия (FSM)

In this protocol we describe the use of Fluorescent Speckle Microscopy (FSM) to capture high-resolution images of actin dynamics in PtK1 cells. A unique ...

Using the GELFREE 8100 Fractionation System for Molecular Weight-Based Fractionation with Liquid Phase Recovery

Использование GELFREE 8100 Фракционирование Система Молекулярный вес основе фракционирования с жидким этапе восстановления

The GELFREE 8100 Fractionation System is a novel protein fractionation system designed to maximize protein recovery during molecular weight based ...

Linearization of the Bradford Protein Assay

Линеаризация Анализ белка Брэдфорд

Determination of microgram quantities of protein in the Bradford Coomassie brilliant blue assay is accomplished by measurement of absorbance at 590 nm. ...

PAR-CliP - A Method to Identify Transcriptome-wide the Binding Sites of RNA Binding Proteins

PAR-Clip - метод идентификации транскриптома всей места связывания РНК-связывающие белки

RNA transcripts are subjected to post-transcriptional gene regulation by interacting with hundreds of RNA-binding proteins (RBPs) and microRNA-containing ...

Study of the Actin Cytoskeleton in Live Endothelial Cells Expressing GFP-Actin

Изучение актинового цитоскелета в клетках эндотелия Живая выражая GFP-актин

The microvascular endothelium plays an important role as a selectively permeable barrier to fluids and solutes. The adhesive junctions between endothelial ...

A Liquid Phase Affinity Capture Assay Using Magnetic Beads to Study Protein-Protein Interaction: The Poliovirus-Nanobody Example

Жидкая фаза Affinity Capture методом с использованием магнитных шариков по изучению белок-белковые взаимодействия: Полиовирус-нанотела Пример

In this article, a simple, quantitative, liquid phase affinity capture assay is presented. Provided that one protein can be tagged and another protein ...

A High Throughput MHC II Binding Assay for Quantitative Analysis of Peptide Epitopes

Анализ связывания Высокая пропускная МНС II для количественного анализа пептидных эпитопов

Biochemical assays with recombinant human MHC II molecules can provide rapid, quantitative insights into immunogenic epitope identification, deletion, or ...

Reporter-based Growth Assay for Systematic Analysis of Protein Degradation

Репортер основе анализа роста для систематического анализа белка деградации

Protein degradation by the ubiquitin-proteasome system (UPS) is a major regulatory mechanism for protein homeostasis in all eukaryotes. The standard ...