Name: actin co-sedimentation assay; for the analysis of protein binding to f-actin
Uploaded: 2008-03-28T01:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Actin Co-Sedimentation Assay; for the Analysis of Protein Binding to F-Actin at JoVE.com

HaCAT hücreleri aktin film için UCSF Wittman laboratuarında Dr. Praveen Kaya için teşekkür ederiz.

1. Aktin hazırlanması Bu testte kullanılan aktin kaynağı Sitoiskelet A.Ş. Menkul Kıymetler alikotları 10 mg / ml -70 º C derin dondurucuda muhafaza elde kas olmayan insan trombositler (β-aktin) oldu. Testi için, aktin 4 º C&#39;de 10 dakika 20.000 g de santrifüj 5 mM Tris pH: 8, 0.2 mM CaCl 2, 0.2 mM ATP ve 0,5 mM DTT, içeren bir tampon 0.4 mg / ml &#39;ye seyreltilerek Monomerik aktin süpernatant polimerize olmaya hazırdır. Aktin polimerizasyonu Ayrıca 50 mM KCI, 1...

<ol>
	<li>Senetar, M. A., Foster, S. J., McCann, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrasteric+inhibition+mediates+the+interaction+of+the+I/LWEQ+module+proteins+Talin1,+Talin2,+Hip1,+and+Hip12+with+actin.">Intrasteric inhibition mediates the interaction of the I/LWEQ module proteins Talin1, Talin2, Hip1, and Hip12 with actin.</a> Biochemistry. 14, 15418-15428 (2004).</li><li>Goldmann, W. H., Hess, D., Isenberg, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+intact+talin+and+talin+tail+fragment+on+actin+filament+dynamics+and+structure+depends+on+pH+and+ionic+strength.">The effect of intact talin and talin tail fragment on actin filament dynamics and structure depends on pH and ionic strength.</a> Eur J Biochem. 260, 439-445 (1999).</li><li>Lee, H., Bellin, R. M., Walker, D. L., Patel, B., Powers, P., Liu, H., Garcia-Alvarez, B., de Pereda, J., Liddington, R. C., Volkmann, N., Hanein, D., Critchley, D. R., Robson, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+an+Actin-binding+Site+within+the+Talin+FERM+Domain.">Characterization of an Actin-binding Site within the Talin FERM Domain.</a> J Mol Biol. 22, 771-784 (2004).</li></ol>

Aktin co-sedimantasyon, F-aktin bağlayıcı specfic proteinleri analiz etmek için basit bir in vitro tahlil. Bu videoda, basit bir aktin co-sedimantasyon yapılabilir nasıl bir örnek göstermektedir. Biz F-aktin hazırlamak için nasıl test edilecek protein ve aktin prosedürü co-sedimantasyon hazırlamak. Aktin co-sedimantasyon deneyleri yaparken puan sayısı dikkate alınmalıdır. Örneğin, kuluçka için tampon parçaları, test edilmesi ve pH, sıcaklık ve tuz konsantrasyonu F-aktin bağlayıcı etkileyebilir protein bağlı o...

actin co-sedimentation assay; for the analysis of protein binding to f-actin

Hücre içinde aktin hücre iskeleti, hücre ve hücresel süreçlerin hareketi sağlayan aktin filamentler bir ağ ve bu gerilim üretir ve hücresel şeklini korur yardımcı olur. Aktin hücre iskeletinin sert bir yapısı olmasına rağmen, sürekli remodeling dinamik bir yapıdır. Proteinlerin çok sayıda aktin hücre iskeletinin bağlayabilirsiniz. F-aktin belirli bir protein bağlayıcı genellikle hücre biyolojik gözlemler ya da daha fazla aktin hücre iskeletinin yeniden şekillenme nedeniyle dinamik süreçleri anlamak için arzu edilir. Aktin co-sedimantasyon tahlil spesifik proteinlerin veya F-aktin protein etki bağlama rutin analiz etmek için kullanılan in vitro tayininde. Testin temel ilkeleri, F-aktin ile ilgi protein bir inkübasyon (tam uzunlukta veya etki alanı), F-aktin ile birlikte sedimenting protein pelet F-aktin ve analiz Ultrasantrifügasyon adım içerir. Aktin co-sedimantasyon deneyleri aktin bağlayıcı yakınlık ve rekabet deneyleri ölçmek için buna göre dizayn edilebilir.

Watch this Scientific Journal Video about Actin Co-Sedimentation Assay; for the Analysis of Protein Binding to F-Actin at JoVE.com

Actin Co-Sedimentation Assay; for the Analysis of Protein Binding to F-Actin

Proteinler, farklı aktin bağlayıcı modüller aracılığıyla ipliksi aktin (F-aktin) bağlanır. Bu video in vitro testinin rutin olarak, F-aktin bağlayan proteinler ya da belirli etki analiz etmek için kullanılan bir co-sedimantasyon, aktin prosedürü göstermektedir.

Aktin Co-Sedimantasyon Testi; F-Aktin Bağlayıcı Protein Analizi

The actin cytoskeleton within the cell is a network of actin filaments that allows the movement of cells and cellular processes, and that generates ...

Research

JoVE Journal

Biology

A Neuronal and Astrocyte Co-Culture Assay for High Content Analysis of Neurotoxicity

Nörotoksisite Yüksek İçerik Analizi Nöronal ve Astrosit Hücre Co-Kültür Testi

High Content Analysis (HCA) assays combine cells and detection reagents with automated imaging and powerful image analysis algorithms, allowing ...

Detection of Protein Ubiquitination

Protein Ubikitinasyon Tespiti

Ubiquitination, the covalent attachment of the polypeptide ubiquitin to target proteins, is a key posttranslational modification carried out by a set of ...

Live Cell Imaging of F-actin Dynamics via Fluorescent Speckle Microscopy (FSM)

Live Cell Imaging of F-actin Dynamics via Fluorescent Speckle Microscopy FSM

Floresan üzerinden F-aktin Dynamics Canlı Hücre Görüntüleme speckle Mikroskopi (FSM)

In this protocol we describe the use of Fluorescent Speckle Microscopy (FSM) to capture high-resolution images of actin dynamics in PtK1 cells. A unique ...

Using the GELFREE 8100 Fractionation System for Molecular Weight-Based Fractionation with Liquid Phase Recovery

Sıvı Faz Kurtarma Moleküler Ağırlık Tabanlı Fraksiyonu GELFREE 8100 Fraksiyonu Sisteminin Kullanılması

The GELFREE 8100 Fractionation System is a novel protein fractionation system designed to maximize protein recovery during molecular weight based ...

Linearization of the Bradford Protein Assay

Bradford Protein Testi lineerleştirilmesi

Determination of microgram quantities of protein in the Bradford Coomassie brilliant blue assay is accomplished by measurement of absorbance at 590 nm. ...

PAR-CliP - A Method to Identify Transcriptome-wide the Binding Sites of RNA Binding Proteins

PAR-Klip - RNA Cilt Proteinler Transcriptome geniş Cilt Siteleri Belirlemek Amacıyla Bir Yöntem

RNA transcripts are subjected to post-transcriptional gene regulation by interacting with hundreds of RNA-binding proteins (RBPs) and microRNA-containing ...

Study of the Actin Cytoskeleton in Live Endothelial Cells Expressing GFP-Actin

GFP-Aktin ifade Canlı Endotel Hücreleri Aktin Sitoiskelet Çalışması

The microvascular endothelium plays an important role as a selectively permeable barrier to fluids and solutes. The adhesive junctions between endothelial ...

A Liquid Phase Affinity Capture Assay Using Magnetic Beads to Study Protein-Protein Interaction: The Poliovirus-Nanobody Example

Protein-Protein Etkileşimi Okumak Manyetik Boncuk Kullanarak Bir Sıvı Faz Affinity Yakalama Testi: Poliovirüs-Nanobody Örnek

In this article, a simple, quantitative, liquid phase affinity capture assay is presented. Provided that one protein can be tagged and another protein ...

A High Throughput MHC II Binding Assay for Quantitative Analysis of Peptide Epitopes

Peptid Epitopların Kantitatif Analiz için bir yüksek veri akışı MHC II Bağlanma Deneyi

Biochemical assays with recombinant human MHC II molecules can provide rapid, quantitative insights into immunogenic epitope identification, deletion, or ...

Reporter-based Growth Assay for Systematic Analysis of Protein Degradation

Protein Parçalanabilirliklerinin Sistematik Analizi muhabiri tabanlı Büyüme Deneyi

Protein degradation by the ubiquitin-proteasome system (UPS) is a major regulatory mechanism for protein homeostasis in all eukaryotes. The standard ...