Name: in vitro and in vivo bioluminescence reporter gene imaging of human embryonic stem cells
Uploaded: 2008-05-02T17:59:00
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팀 도일, 박사 및 bioluminescence 이미징과 지원 VIVO 이미징에 대한 스탠포드 센터에 감사드립니다. 또한 매트릭스 솔루션과 줄기 세포 공동 사출 그녀의 기술을 공유 Ngan 황, 박사 덕분에. 마지막으로, 스티브 덕분에 박사에게 펠트 동물 동물 보호와 지원.

<ol><li> 더블 퓨전 리포터 유전자의 건설 <ol><li> 인간 배아 줄기 세포의 bioluminescence 이미징을 수행하기 위해서는 먼저 안정 등 Ubiquitin이나 EF1a 같은 제정 발기인에 의한 반딧불 루시페라제로 루시페라제 리포터 유전자를 표현 세포를 얻기 위해 필요합니다. </li><li> 이 프로토콜의 초점은 기자의 유전자 응용 프로그램에, 자세한 절차를 여기에 제공되지 않습니다 때문에. 그러나, 우리 실험실의 일반적인 ?...

<ol>
	<li>Passier, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+cardiomyocyte+differentiation+from+human+embryonic+stem+cells+in+serum-free+cultures.">Increased cardiomyocyte differentiation from human embryonic stem cells in serum-free cultures.</a> Stem Cells. 23, 772-780 (2003).</li><li>Laflamme, M. 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Circulation. 113, 1005-1014 (2006).</li><li>Cao, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+Imaging+of+Embryonic+Stem+Cell+Misbehavior+and+Suicide+Gene+Ablation.">Molecular Imaging of Embryonic Stem Cell Misbehavior and Suicide Gene Ablation.</a> Cloning and Stem Cells. 9, 107-117 (2007).</li><li>Ray, P., De, A., Min, J. J., Tsien, R. Y., Gambhir, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+tri-fusion+multimodality+reporter+gene+expression+in+living+subjects.">Imaging tri-fusion multimodality reporter gene expression in living subjects.</a> Cancer Res. 64, 1323-1330 (2004).</li><li>Wu, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Proteomic+analysis+of+reporter+genes+for+molecular+imaging+of+transplanted+embryonic+stem+cells.">Proteomic analysis of reporter genes for molecular imaging of transplanted embryonic stem cells.</a> Proteomics. 6, 6234-6249 (2006).</li><li>Eiges, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+human+embryonic+stem+cell-transfected+clones+carrying+a+marker+for+undifferentiated+cells.">Establishment of human embryonic stem cell-transfected clones carrying a marker for undifferentiated cells.</a> Curr Biol. 11, 514-518 (2001).</li><li>Mohr, J. C., de Pablo, J. J., Palecek, S. 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이러한 PET와 MRI와 같은 다른 modalities 비교, bioluminescence 제한된 공간 해상도와 방출되는 광자의 상대적으로 약한 에너지 (2-3 EV)으로 인해 감소 조직 침투력을 가지고, 이러한 이유로 그것은 지금까지 큰 동물에서 적용되지 않았습니다. 그러나, bioluminescence 작은 동물의 생체내 추적의 줄기 세포에 대해 그것이 매우 바람직 만들기, 저렴한 비용, 높은 처리량, 그리고 비침습되는 장점이 있습니다. 이러한 PET 및 형광 ...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>HyClone</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BD Matrigel&#x2122; Basement Membrane Matrix</td>
<td>Growth factor reduced (optional: phenol-red free)</td>
<td>BD Biosciences</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>mTeSR1 Maintenance Medium for Human Embryonic Stem Cells</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>StemCell Technologies</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>D-Luciferin Firefly, potassium salt</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Biosynth AG</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Collagenase IV solution</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dissolve 30 mg Collagenase Type IV in 30 mL DMEM-F12 media. Sterile filter and store at 4 degrees (Celsius).</td>
</tr>
<tr>
<td>Baked Pasteur pipets</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>6-well tissue culture-treated plates</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>TPP</td>
<td>92006</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

in vitro and in vivo bioluminescence reporter gene imaging of human embryonic stem cells

인간 배아 줄기 세포 (hESCs)의 발견은 극적으로 재생 의료에 관심이 의료 과학자에 사용할 수있는 도구를 증가했습니다. 그러나, 살아있는 생물로, hESCs에서 차별 hESCs, 그리고 세포의 직접 분사는 지금까지 상당한 세포 사망, 기형 종의 형성, 및 호스트 면역 거부 반응에 의해 방해되었다. 이식 후 생체내 hESC 행동에을 이해하는 것은 새로운 이미징 기술은 길이 방향 hESC 현지화, 증식 및 생존을 모니터링해야합니다. 분자 영상은 조사에게 생체내 세포 일 동안 확산, 주, 심지어 개월 이내에 추적에 대한 높은 처리량, 저렴하고, 중요한 수단을 제공하고 있습니다. 이 발전은 크게 hESC의 engraftment, 확산, 생활 과목의 기형 종 - 형성 spatio - 시간적 동력학에 대한 이해를 증가하고 있습니다. 분자 이미징의 주요 사전은 생체내에서 다중 양상 이미징 플랫폼으로 분자 및 세포 생물학에서 비침 투 리포터 유전자의 assays의 확장되었습니다. 이 기자의 유전자는 숙주 세포의 transcriptional 기계를 활용 설계 발기인 및 강화의 통제하에, 벡터가 아닌 벡터 다양한 방법을 사용하여 세포에 도입하고 있습니다. 일단 세포에서 기자의 유전자를 사용 모터의 종류에 따라, 특정 생물 학적 또는 세포 조건 중 constitutively 또는 유일한 베꼈는데 수 있습니다. bioactive 단백질로 전사와 기자의 유전자의 번역은 다음 D - luciferin 같은 신호 생성 프로브를 사용하여 민감한, 비침 투 계측 (예 : CCD 카메라)와 검색입니다. 로 형광 이미징에 필요한 생체내에서 줄기 세포를 추적하는 흥분성의 조명의 필요성을 방지하기 위해, bioluminescence의 리포터 유전자 이미징 시스템은 발광을 유발에만 exogenously 관리 프로브가 필요합니다. 반딧불 Photinus pyralis에서 파생된 반딧불 루시페라제은, 광학 활성 대사, oxyluciferin에 D - luciferin을 catalyzes 효소를 인코딩합니다. 광학 활동 후 외부 CCD 카메라로 모니터링할 수 있습니다. 안정 기자 들고 세포들은 염색체 DNA 내에 구축 transduced 기자가 생체내에 hESC의 생존과 확산의 길이 모니터링있게 딸 세포에 DNA를 구성 전달합니다. 리포터 유전자 제품의 표현은 신호 생성을 위해 필요하기 때문에 또한, 오직 실용적 부모와 딸 세포는 bioluminescence 신호를 만들 것이다; apoptotic이나 죽은 세포가되지 않습니다. 이 동영상에서 특정 자료 및 bioluminescence 이미징과 함께 추적 줄기 세포 증식 및 기형 종의 형성에 필요한 방법은 설명한다.

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In vitro and in vivo Bioluminescence Reporter Gene Imaging of Human Embryonic Stem Cells

줄기 세포 요법에 대한 관심이 점점으로, 분자 이미징 기술은 이식 후 모니터링 줄기 세포 행동에 이상적입니다. 루시페라제 리포터 유전자는 세포 생존, 위치 및 생체내의 확산의 비침습, 반복적인 평가를 활성화합니다. 이 동영상은 살아있는 마우스의 hESC 확산을 추적하는 방법을 보여줍니다 것입니다.

체외에서 인간 배아 줄기 세포의 생체내의 Bioluminescence 리포터 진 영상에

The discovery of human embryonic stem cells (hESCs) has dramatically increased the tools available to medical scientists interested in regenerative ...

Research

JoVE Journal

Biology

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

Immunosurgery에 의해 인간 배아 줄기 세포의 유도

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

연구

생물학

Probing for Mitochondrial Complex Activity in Human Embryonic Stem Cells

인간 배아 줄기 세포에서 Mitochondrial 복잡한 활동에 대한 탐색

Mitochondria are cytoplasmic organelles that have a primary role in cellular metabolism and homeostasis, regulation of the cell signaling network, and ...

In vitro Labeling of Human Embryonic Stem Cells for Magnetic Resonance Imaging

자기 공명 영상을위한 인간 배아 줄기 세포의 체외 라벨에

Human embryonic stem cells (hESC) have demonstrated the ability to restore the injured myocardium. Magnetic resonance imaging (MRI) has emerged as one of ...

Culture and Maintenance of Human Embryonic Stem Cells  

인간 배아 줄기 세포의 문화 및 유지 관리

Human embryonic stem (hES) cells must be monitored and cared for in order to maintain healthy, undifferentiated cultures. At minimum, the cultures must be ...

Freezing and Thawing Human Embryonic Stem Cells

인간 배아 줄기 세포를 동결 융해

Since James Thomson et al developed a technique in 1998 to isolate and grow hES in culture, freezing cells for later use and thawing and expanding cells ...

Video Bioinformatics Analysis of Human Embryonic Stem Cell Colony Growth

비디오 생물 정보학 인간의 배아 줄기 세포 콜로니 성장 분석

Because video data are complex and are comprised of many images, mining information from video material is difficult to do without the aid of computer ...

Differentiation of Embryonic Stem Cells into Oligodendrocyte Precursors

Oligodendrocyte 엽 성의 전구 물질로 배아 줄기 세포의 분화

Oligodendrocytes are the myelinating cells of the central nervous system. For regenerative cell therapy in demyelinating diseases, there is significant ...

Efficient Derivation of Human Cardiac Precursors and Cardiomyocytes from Pluripotent Human Embryonic Stem Cells with Small Molecule Induction

작은 분자와 유도 Pluripotent 인간 배아 줄기 세포로부터 인간 심장 엽 성의 전구 물질과 Cardiomyocytes의 효율 유도

To date, the lack of a suitable human cardiac cell source has been the major setback in regenerating the human myocardium, either by cell-based ...

Reprogramming Human Somatic Cells into Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs) Using Retroviral Vector with GFP

Reprogramming Human Somatic Cells into Induced Pluripotent Stem Cells iPSCs Using Retroviral Vector with GFP

GFP와 Retroviral 벡터를 사용하여 유도 Pluripotent 줄기 세포 (iPSCs)로 인간 체세포를 프로그래밍

Human embryonic stem cells (hESCs) are pluripotent and an invaluable cellular sources for in vitro disease modeling and regenerative medicine1. It has ...

Isolation of Ribosome Bound Nascent Polypeptides in vitro to Identify Translational Pause Sites Along mRNA

Isolation of Ribosome Bound Nascent Polypeptides in vitro to Identify Translational Pause Sites Along mRNA

Ribosome 바운드 초기 Polypeptides의 분리<em&gt; 체외에서</em&gt; mRNA 함께 Translational 일시 중지 사이트를 식별하려면

The rate of translational elongation is non-uniform. mRNA secondary structure, codon usage and mRNA associated proteins may alter ribosome movement on the ...