<p style=";text-align:right;direction:rtl"> מתכון הפתרון הוא כיווץ מהמעבדה של RW אולדריץ&#39;. אנו מודים סוכנויות מימון הבאים היסודות תמיכה: National Institutes of Health, הקרן הלאומית למדע, איגוד הלב האמריקני, איגוד ניוון שרירים, ב &#39;דונלד E. בקסטר דליה קרן, קרן Klingenstein ולקרן מק&#39; נייט למדעי המוח. </p>

<p class="jove_step" style=";text-align:right;direction:rtl"> חלק 1: הסרת הממברנה vitelline </p><ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן שני סטים של מלקחיים. אנחנו מעדיפים 5 מס &#39;מלקחיים, שם קבוצה אחת כבר חידד מעט עם קובץ. כמו כן להכין פיפטה העברת זכוכית ידי זמירה ואת האש ליטוש 7 &quot;פיפטה פסטר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> <em>מומל...

<ol>
	<li>Neher, E., Sakmann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-channel+currents+recorded+from+membrane+of+denervated+frog+muscle+fibres.">Single-channel currents recorded from membrane of denervated frog muscle fibres.</a> <em style='font-style: italic'>Nature</em>. <b>260</b>, 799-802 (1976).</li><li>Sackmann, B., Neher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Single-channel Recording</em>. , (1983).</li></ol>

<p style=";text-align:right;direction:rtl"> ישנם פרמטרים רבים הקלטה אלקטרו לא נדון כאן. התקנת המתקן, רעש מערכת ניהול, הביטוי הערוץ, ופרוטוקולים הקלטה דבר קריטי גם תוצאות הניסוי טוב. </p><p style=";text-align:right;direction:rtl"> מניסיוננו, אלו הם הפרמטרים הקריטיים ביותר עבור יצירת חותמות אמין: ביציות באיכות גבוהה, הסרת קרום vitelline מהר (aka, &quot;פי?...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Patch Clamp Amplifier & Software</td>
<td>Instrument</td>
<td>HEKA or Axon</td>
<td>EPC-10</td>
<td>Or other similar device (e.g. HEKA EPC-9 or Axopatch 200B)</td>
</tr>
<tr>
<td>No. 5 forceps (two pairs)</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Oocyte shrinking solution</td>
<td>Reagent</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ingredient                            In mM
N-methyl-D-glucamine     220
HEPES                                   10
MgCl2                                       1
EGTA                                       10
Aspartic Acid                        220
KCl                                             2
pH to 7.4 w/ N-methyl-D-glucamine</td>
</tr>
<tr>
<td>woven mesh</td>
<td>800 um</td>
<td>Spectrum Laboratories INC</td>
<td>146481</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

patch clamp recording of ion channels expressed in  xenopus oocytes

<p style=";text-align:right;direction:rtl"> מאז הפיתוח שלה על ידי Sakmann ואת נהר <sup>1, 2,</sup> מהדק את התיקון הפך הוקמה טכניקה שימושית מאוד עבור מדידה אלקטרו של תעלות יונים יחיד או מספר תאים. טכניקה זו ניתן להחיל על תעלות יונים בסביבה הן מולדתם והביעו בתאים Heterologous, כגון ביציות שנקטפו מן הצפרדע טפרים אפריקה, Xenopus laevis. כאן אנו מתארים את הטכניקה מבוססת היטב של הקלטה תיקון מהדק מ ביציות Xenopus. טכניקה זו משמשת כדי למדוד את המאפיינים של תעלות יונים לידי ביטוי גם באוכלוסיות (macropatch) או בנפרד (יחיד ערוץ הקלטה). אנו מתמקדים וטכניקות על מנת למקסם את איכות הביצית הכנה הדור חותם. עם כל הגורמים אופטימיזציה, טכניקה זו נותנת הסתברות של הדור חותם מוצלח מעל 90 אחוז. התהליך עשוי להיות מותאם באופן שונה על ידי כל חוקר מבוסס על הגורמים הוא או היא מוצאת החשוב ביותר, ואנחנו מציגים את הגישה כי יש להוביל להצלחה רבה בידינו. </p>

Watch this Scientific Journal Video about Patch Clamp Recording of Ion Channels Expressed in  Xenopus Oocytes at JoVE.com

Patch Clamp Recording of Ion Channels Expressed in  Xenopus Oocytes

<p class="jove_content">זה נועד כהקדמה תיקון הקלטה מהדק מ ביציות Xenopus laevis. היא משתרעת על הסרת vitelline קרום, היווצרות חותם gigaohm (gigaseal), ואת ההמרה אופציונלי של תיקון כדי טופולוגיה מחוץ הקצוב.</p>

הצמד תיקון הקלטה של ​​תעלות יונים מתבטא ביציות Xenopus

Since its development by Sakmann and Neher 1, 2, the patch clamp has become established as an extremely useful technique for electrophysiological ...

Research

JoVE Journal

Biology

Methods for Patch Clamp Capacitance Recordings from the Calyx

שיטות הצמד תיקון הקלטות קיבול מן Calyx

We demonstrate the basic techniques for presynaptic patch clamp recording at the calyx of Held, a mammalian central nervous system nerve terminal. ...

Pressure-polishing Pipettes for Improved Patch-clamp Recording

לחץ לליטוש pipettes עבור Patch-clamp הקלטה משופרים

Pressure-polishing is a method for shaping glass pipettes for patch-clamp recording.  We first developed this method for fabricating pipettes suitable for ...

Microinjection of Xenopus Laevis Oocytes

Microinjection של ביציות Xenopus Laevis

Microinjection of Xenopus laevis oocytes followed by thin-sectioning electron microscopy (EM) is an excellent system for studying nucleocytoplasmic ...

Visualizing RNA Localization in <em>Xenopus</em> Oocytes

Visualizing RNA Localization in Xenopus Oocytes

הדמיה ב-RNA לוקליזציה<em> Xenopus</em> ביציות

RNA localization is a conserved mechanism of establishing cell polarity.  Vg1 mRNA localizes to the vegetal pole of Xenopus laevis oocytes and acts to ...

Fertilization of <em>Xenopus oocytes</em> using the Host Transfer Method

Fertilization of Xenopus oocytes using the Host Transfer Method

הפריה של<em> Xenopus ביציות</em> באמצעות שיטת העברה מארח

Studying the contribution of maternally inherited molecules to vertebrate early development is often hampered by the time and expense necessary to ...

Mutagenesis and Functional Analysis of Ion Channels Heterologously Expressed in Mammalian Cells

Mutagenesis וניתוח פונקציונלי של תעלות יונים הביעו Heterologously בתאי יונקים

We will demonstrate how to study the functional effects of introducing a point mutation in an ion channel. We study G protein-gated inwardly rectifying ...

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in <em>Xenopus</em> oocytes

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

הצמד תיקון וטכניקות זלוף עבור לימוד תעלות יונים מתבטא<em> Xenopus</em> ביציות

The protocol presented here is designed to study the activation of the large conductance, voltage- and Ca2+-activated K+ (BK) channels. The protocol may ...

Optimized Transfection Strategy for Expression and Electrophysiological Recording of Recombinant Voltage-Gated Ion Channels in HEK-293T Cells

Transfection אסטרטגיה אופטימיזציה עבור הביטוי הקלטה של ​​אלקטרו Voltage-מגודרת ערוצי רקומביננטי יון ב HEK-293T תאים

The in vitro expression and electrophysiological recording of recombinant voltage-gated ion channels in cultured human embryonic kidney cells (HEK-293T) ...

Giant Liposome Preparation for Imaging and Patch-Clamp Electrophysiology

הכנת Liposome ענקית הדמיה ותיקון מהדק Electrophysiology

The reconstitution of ion channels into chemically defined lipid membranes for electrophysiological recording has been a powerful technique to identify ...

The <em>Xenopus</em> Oocyte Cut-open Vaseline Gap Voltage-clamp Technique With Fluorometry

The Xenopus Oocyte Cut-open Vaseline Gap Voltage-clamp Technique With Fluorometry

<em&gt; Xenopus</em&gt; טכניקת ביצית Cut-פתוח וזלין גאפ מתח מהדק עם Fluorometry

The cut-open oocyte Vaseline gap (COVG) voltage clamp technique allows for analysis of electrophysiological and kinetic properties of heterologous ion ...

הצמד תיקון הקלטה של ​​תעלות יונים מתבטא ביציות Xenopus

הצמד תיקון הקלטה של תעלות יונים מתבטא ביציות Xenopus