<p> 축소 솔루션 제조법은 RW 알드리치의 연구실에서입니다. 보건 국립 연구소, 국립 과학 재단 (National Science Foundation), 미국 심장 협회, 근육질 영양 장애 협회, 도널드 B.와 델리아 E. 백스터 재단 Klingenstein 기금과 신경 과학에 대한 맥나이트 엔다우먼트 : 우리는 지원을위한 다음과 같은 자금 지원 기관 및 재단 감사드립니다. </p>

<p class="jove_step"> 1 부 : vitelline 막 제거 </p><ol><li> 포셉 두 세트를 준비합니다. 우리는 한 세트가 약간 파일을 날카롭게되어 제 5 포셉를 선호합니다. 또한 7 &quot;파스퇴르 피펫을 트리밍하고 불을 연마하여 유리 전송 피펫을 준비합니다. </li><li> <em>추천 :</em> 늑대의 oocytes을 방지하기 위해, 그리드의 서클 (1mm의 사각형)을 잘라 60mm 페트리 접시의 바닥에 접착제. 사용하는 사이에 청소 보관하면이 음식은 무기한으로 활...

<ol>
	<li>Neher, E., Sakmann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-channel+currents+recorded+from+membrane+of+denervated+frog+muscle+fibres.">Single-channel currents recorded from membrane of denervated frog muscle fibres.</a> <em style='font-style: italic'>Nature</em>. <b>260</b>, 799-802 (1976).</li><li>Sackmann, B., Neher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Single-channel Recording</em>. , (1983).</li></ol>

<p> 여기에 논의하지 electrophysiological 녹음 많은 매개 변수가 있습니다. 릭 설치, 시스템 소음 관리, 채널 표현 및 기록 프로토콜은 모든 좋은 실험 결과 또한 중요합니다. </p><p> 우리의 경험에서, 이들은 안정적인 물개를 형성을위한 가장 중요한 파라미터 : 목욕을 입력하면 고품질 oocytes는 (일명, &quot;필링&quot;) 빠르게 vitelline 막 제거, 먼지로부터 보호 새로 가져온 pipettes 부드러운 pipettes, 적용 긍정적인 압력을 사용?...

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Patch Clamp Amplifier & Software</td>
<td>Instrument</td>
<td>HEKA or Axon</td>
<td>EPC-10</td>
<td>Or other similar device (e.g. HEKA EPC-9 or Axopatch 200B)</td>
</tr>
<tr>
<td>No. 5 forceps (two pairs)</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Oocyte shrinking solution</td>
<td>Reagent</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ingredient                            In mM
N-methyl-D-glucamine     220
HEPES                                   10
MgCl2                                       1
EGTA                                       10
Aspartic Acid                        220
KCl                                             2
pH to 7.4 w/ N-methyl-D-glucamine</td>
</tr>
<tr>
<td>woven mesh</td>
<td>800 um</td>
<td>Spectrum Laboratories INC</td>
<td>146481</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

patch clamp recording of ion channels expressed in  xenopus oocytes

<p class="jove_content"> Sakmann 및 Neher <sup>1, 2에</sup> 의해 개발 이후, 패치 클램프 세포에서 하나 또는 여러 개의 이온 채널의 electrophysiological 측정을위한 매우 유용한 기술로 설립되었다. 이 기술들은 기본 환경 모두에서 이온 채널에 적용 및 아프리카 발톱 개구리, Xenopus laevis oocytes에서 수확으로 heterologous 세포에 표현할 수있다. 여기, 우리는 Xenopus의 oocytes에서 패치 클램프 녹음의 잘 설립 기법을 설명합니다. 이 기술은 개별적으로 인구 (macropatch) 또는 (단일 채널 녹음)에 어느 표현 이온 채널의 속성을 측정하는 데 사용됩니다. 우리는 oocyte 준비 및 인감 세대의 품질을 극대화하기 위해 기술에 중점을두고 있습니다. 모든 요소가 최적으로,이 기법은 90 % 이상 성공 인감 세대의 가능성을 제공합니다. 과정은 그 또는 그녀가 가장 중요한 발견 요인에 따라 모든 연구자가 다르게 최적화, 우리는 우리 손에 가장 큰 성공으로 이어질있는 방법을 제시 수도 있습니다. </p>

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Patch Clamp Recording of Ion Channels Expressed in  Xenopus Oocytes

<p class="jove_content">이것은 Xenopus laevis oocytes에서 클​​램프의 녹음 패치에 대한 소개로서 것입니다. 그것은 vitelline 막 제거, gigaohm 인감 (gigaseal)의 형성, 그리고 외부 아웃 토폴로지에 패치의 선택 변환을 다룹니다.</p>

Xenopus Oocytes의 표현 이온 채널 패치 클램프 녹음

Since its development by Sakmann and Neher 1, 2, the patch clamp has become established as an extremely useful technique for electrophysiological ...

Research

JoVE Journal

Biology

Methods for Patch Clamp Capacitance Recordings from the Calyx

칼리에서 패치 클램프 커패시턴스 레코딩을위한 방법

We demonstrate the basic techniques for presynaptic patch clamp recording at the calyx of Held, a mammalian central nervous system nerve terminal. ...

연구

생물학

Pressure-polishing Pipettes for Improved Patch-clamp Recording

향상된 패치 - 클램프 녹음 압력 연마 Pipettes

Pressure-polishing is a method for shaping glass pipettes for patch-clamp recording.  We first developed this method for fabricating pipettes suitable for ...

Microinjection of Xenopus Laevis Oocytes

Xenopus Laevis의 Oocytes의 Microinjection

Microinjection of Xenopus laevis oocytes followed by thin-sectioning electron microscopy (EM) is an excellent system for studying nucleocytoplasmic ...

Visualizing RNA Localization in <em>Xenopus</em> Oocytes

Visualizing RNA Localization in Xenopus Oocytes

머릿속 RNA 현지화에서<em> Xenopus</em> Oocytes

RNA localization is a conserved mechanism of establishing cell polarity.  Vg1 mRNA localizes to the vegetal pole of Xenopus laevis oocytes and acts to ...

Fertilization of <em>Xenopus oocytes</em> using the Host Transfer Method

Fertilization of Xenopus oocytes using the Host Transfer Method

의 수정<em> Xenopus의 oocytes</em> 호스트 전송 방법을 사용하여

Studying the contribution of maternally inherited molecules to vertebrate early development is often hampered by the time and expense necessary to ...

Mutagenesis and Functional Analysis of Ion Channels Heterologously Expressed in Mammalian Cells

이온 채널의 돌연변이 유발과 기능 분석 Heterologously 포유 동물 세포에 표현

We will demonstrate how to study the functional effects of introducing a point mutation in an ion channel. We study G protein-gated inwardly rectifying ...

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in <em>Xenopus</em> oocytes

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

이온 채널 유학을위한 패치 클램프 및 재관류 기법으로 표현<em> Xenopus</em> oocytes

The protocol presented here is designed to study the activation of the large conductance, voltage- and Ca2+-activated K+ (BK) channels. The protocol may ...

Optimized Transfection Strategy for Expression and Electrophysiological Recording of Recombinant Voltage-Gated Ion Channels in HEK-293T Cells

표현과 HEK - 293T 세포의 재조합 전압 - 게이 티드 이온 채널 Electrophysiological 녹음에 최적화된 Transfection 전략

The in vitro expression and electrophysiological recording of recombinant voltage-gated ion channels in cultured human embryonic kidney cells (HEK-293T) ...

Giant Liposome Preparation for Imaging and Patch-Clamp Electrophysiology

이미징 및 패치 클램프 전기 생리학에 대한 거대한 리포좀 준비

The reconstitution of ion channels into chemically defined lipid membranes for electrophysiological recording has been a powerful technique to identify ...

The <em>Xenopus</em> Oocyte Cut-open Vaseline Gap Voltage-clamp Technique With Fluorometry

The Xenopus Oocyte Cut-open Vaseline Gap Voltage-clamp Technique With Fluorometry

<em&gt; Xenopus의</em형광 측정으로&gt; 난자 절개 바셀린 갭 전압 클램프 기술

The cut-open oocyte Vaseline gap (COVG) voltage clamp technique allows for analysis of electrophysiological and kinetic properties of heterologous ion ...