<p> Receta de la reducción de solución es el laboratorio de RW Aldrich. Agradecemos a los siguientes organismos de financiación y fundaciones de apoyo: National Institutes of Health, National Science Foundation, la American Heart Association, Asociación de Distrofia Muscular, de la B. Donald y Delia E. Baxter Foundation, el Fondo Klingenstein y la Fundación McKnight para la Neurociencia. </p>

<p class="jove_step"> Parte 1: Extracción de la membrana vitelina </p><ol><li> Prepare dos juegos de pinzas. Preferimos No. 5 pinzas, donde ha sido un conjunto ligeramente afilado con una lima. También preparan una pipeta de transferencia de cristal por el recorte y pulido fuego-a 7 &quot;pipeta Pasteur. </li><li> <em>Recomendado:</em> Para evitar que los oocitos de deslizamiento, cortar un círculo de rejilla (1 plazas mm) y pegamento en la parte inferior de una placa de Petri de 60 mm. Este plato se puede reutilizar indefinidamente si se ma...

<ol>
	<li>Neher, E., Sakmann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-channel+currents+recorded+from+membrane+of+denervated+frog+muscle+fibres.">Single-channel currents recorded from membrane of denervated frog muscle fibres.</a> <em style='font-style: italic'>Nature</em>. <b>260</b>, 799-802 (1976).</li><li>Sackmann, B., Neher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Single-channel Recording</em>. , (1983).</li></ol>

<p> Hay muchos parámetros de registro electrofisiológico no se discute aquí. Configuración de plataforma, sistema de gestión de ruido, la expresión de los canales y protocolos de registro son también fundamentales para un buen resultado experimental. </p><p> En nuestra experiencia, estos son los parámetros más importantes para la formación de sellos fiables: los ovocitos de alta calidad, la eliminación de la membrana vitelina rápidamente (también conocido como &quot;peeling&quot;), usar pipetas de nueva tira protegidos del polvo, p...

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Patch Clamp Amplifier & Software</td>
<td>Instrument</td>
<td>HEKA or Axon</td>
<td>EPC-10</td>
<td>Or other similar device (e.g. HEKA EPC-9 or Axopatch 200B)</td>
</tr>
<tr>
<td>No. 5 forceps (two pairs)</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Oocyte shrinking solution</td>
<td>Reagent</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ingredient                            In mM
N-methyl-D-glucamine     220
HEPES                                   10
MgCl2                                       1
EGTA                                       10
Aspartic Acid                        220
KCl                                             2
pH to 7.4 w/ N-methyl-D-glucamine</td>
</tr>
<tr>
<td>woven mesh</td>
<td>800 um</td>
<td>Spectrum Laboratories INC</td>
<td>146481</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

patch clamp recording of ion channels expressed in  xenopus oocytes

<p class="jove_content"> Desde su desarrollo por Sakmann Neher y <sup>1, 2,</sup> el patch clamp se ha establecido como una técnica muy útil para la medición electrofisiológica de los canales de iones únicos o múltiples en las células. Esta técnica se puede aplicar a los canales de iones, tanto en su ambiente nativo y se expresa en células heterólogas, tales como oocitos recolectados de la rana de uñas africana, Xenopus laevis. Aquí se describe la técnica bien establecida de la grabación de patch clamp de los ovocitos de Xenopus. Esta técnica se utiliza para medir las propiedades de los canales iónicos, expresados ​​en las poblaciones (macropatch) o de forma individual (un solo canal de grabación). Nos centramos en las técnicas para maximizar la calidad de la preparación de los ovocitos y la generación de sello. Con todos los factores optimizado, esta técnica da una probabilidad de éxito en la generación de sello 90 por ciento. El proceso puede ser optimizado de manera diferente por cada investigador sobre la base de los factores que él o ella encuentra más importante, y se presenta el enfoque que han llevado al éxito más grande en nuestras manos. </p>

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Patch Clamp Recording of Ion Channels Expressed in  Xenopus Oocytes

<p class="jove_content">Esta pretende ser una introducción a la revisión de la grabación de la abrazadera ovocitos de Xenopus laevis. Cubre la eliminación vitelina membrana, la formación de un sello gigaohm (gigaseal), y la conversión opcional de la revisión a la topología de fuera-out.</p>

Parche de grabación Clamp de canales iónicos expresados ​​en ovocitos de Xenopus

Since its development by Sakmann and Neher 1, 2, the patch clamp has become established as an extremely useful technique for electrophysiological ...

Research

JoVE Journal

Biology

Methods for Patch Clamp Capacitance Recordings from the Calyx

Métodos para grabaciones de parche Capacidad de la pinza del cáliz

We demonstrate the basic techniques for presynaptic patch clamp recording at the calyx of Held, a mammalian central nervous system nerve terminal. ...

Investigación

Biología

Pressure-polishing Pipettes for Improved Patch-clamp Recording

Pulido a presión para la Mejora de pipetas de patch-clamp grabación

Pressure-polishing is a method for shaping glass pipettes for patch-clamp recording.  We first developed this method for fabricating pipettes suitable for ...

Microinjection of Xenopus Laevis Oocytes

Microinyección de oocitos de Xenopus laevis

Microinjection of Xenopus laevis oocytes followed by thin-sectioning electron microscopy (EM) is an excellent system for studying nucleocytoplasmic ...

Visualizing RNA Localization in <em>Xenopus</em> Oocytes

Visualizing RNA Localization in Xenopus Oocytes

Visualizar la localización del ARN en<em> Xenopus</em> Los ovocitos

RNA localization is a conserved mechanism of establishing cell polarity.  Vg1 mRNA localizes to the vegetal pole of Xenopus laevis oocytes and acts to ...

Fertilization of <em>Xenopus oocytes</em> using the Host Transfer Method

Fertilization of Xenopus oocytes using the Host Transfer Method

La fertilización de<em> Oocitos de Xenopus</em> Utilizando el método de transferencia de acogida

Studying the contribution of maternally inherited molecules to vertebrate early development is often hampered by the time and expense necessary to ...

Mutagenesis and Functional Analysis of Ion Channels Heterologously Expressed in Mammalian Cells

Mutagénesis y análisis funcional de los canales iónicos heteróloga se expresa en células de mamífero

We will demonstrate how to study the functional effects of introducing a point mutation in an ion channel. We study G protein-gated inwardly rectifying ...

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in <em>Xenopus</em> oocytes

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

Patch clamp y técnicas de perfusión para el estudio de los canales iónicos expresados ​​en<em> Xenopus</em> Ovocitos

The protocol presented here is designed to study the activation of the large conductance, voltage- and Ca2+-activated K+ (BK) channels. The protocol may ...

Optimized Transfection Strategy for Expression and Electrophysiological Recording of Recombinant Voltage-Gated Ion Channels in HEK-293T Cells

Estrategia de transfección optimizados para la expresión y el registro electrofisiológico de los canales iónicos recombinantes del voltaje en las células HEK-293T

The in vitro expression and electrophysiological recording of recombinant voltage-gated ion channels in cultured human embryonic kidney cells (HEK-293T) ...

Giant Liposome Preparation for Imaging and Patch-Clamp Electrophysiology

Preparación de liposomas gigantes de la Imagen y Patch-Clamp Electrofisiología

The reconstitution of ion channels into chemically defined lipid membranes for electrophysiological recording has been a powerful technique to identify ...

The <em>Xenopus</em> Oocyte Cut-open Vaseline Gap Voltage-clamp Technique With Fluorometry

The Xenopus Oocyte Cut-open Vaseline Gap Voltage-clamp Technique With Fluorometry

La<em&gt; Xenopus</em&gt; Ovocitos-Cut abierta vaselina Gap Técnica Voltage-clamp Con Fluorometría

The cut-open oocyte Vaseline gap (COVG) voltage clamp technique allows for analysis of electrophysiological and kinetic properties of heterologous ion ...

Parche de grabación Clamp de canales iónicos expresados ​​en ovocitos de Xenopus

Parche de grabación Clamp de canales iónicos expresados en ovocitos de Xenopus