<p> Krympande lösning recept från labbet i RW Aldrich. Vi tackar följande finansiärer och stiftelser till stöd: National Institutes of Health, National Science Foundation, American Heart Association, muskeldystrofi Association, Donald B. och Delia E. Baxter Foundation, Klingenstein fonden och McKnight Endowment for Neuroscience. </p>

<p class="jove_step"> Del 1: Ta bort vitelline membranet </p><ol><li> Förbered två uppsättningar av tång. Vi föredrar nr 5 pincett, där en uppsättning har varit något slipas med en fil. Också utarbeta en pipett glas överlåtelse genom putsning och eld-polering en 7 &quot;pasteurpipett. </li><li> <em>Rekommenderas:</em> att förhindra att ägg från att halka, skär en cirkel av galler (1 mm rutor) och lim i botten av en 60mm petriskål. Denna maträtt kan återanvändas på obestämd tid om hålls ren mellan användningarna. </li><li>...

<ol>
	<li>Neher, E., Sakmann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-channel+currents+recorded+from+membrane+of+denervated+frog+muscle+fibres.">Single-channel currents recorded from membrane of denervated frog muscle fibres.</a> <em style='font-style: italic'>Nature</em>. <b>260</b>, 799-802 (1976).</li><li>Sackmann, B., Neher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Single-channel Recording</em>. , (1983).</li></ol>

<p> Det finns många parametrar elektrofysiologiska inspelning inte diskuteras här. Rigg setup, system för bullerbekämpningen, kanal uttryck, och protokoll inspelning är alla också kritiska till goda experimentella resultat. </p><p> Enligt vår erfarenhet, dessa är de mest kritiska parametrarna för att bilda pålitliga tätningar: hög kvalitet ägg, ta bort vitelline membranet snabbt (aka &quot;peeling&quot;), använder nya drog pipetter skyddas från damm, släta pipetter, positivt tryck användas vid inträde i badet lösning, korta t...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Patch Clamp Amplifier & Software</td>
<td>Instrument</td>
<td>HEKA or Axon</td>
<td>EPC-10</td>
<td>Or other similar device (e.g. HEKA EPC-9 or Axopatch 200B)</td>
</tr>
<tr>
<td>No. 5 forceps (two pairs)</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Oocyte shrinking solution</td>
<td>Reagent</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ingredient                            In mM
N-methyl-D-glucamine     220
HEPES                                   10
MgCl2                                       1
EGTA                                       10
Aspartic Acid                        220
KCl                                             2
pH to 7.4 w/ N-methyl-D-glucamine</td>
</tr>
<tr>
<td>woven mesh</td>
<td>800 um</td>
<td>Spectrum Laboratories INC</td>
<td>146481</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

patch clamp recording of ion channels expressed in  xenopus oocytes

<p class="jove_content"> Sedan dess utveckling genom Sakmann och Neher <sup>1, 2,</sup> har patch clamp etablerat sig som en mycket användbar teknik för elektrofysiologiska mätningar av ett eller flera jonkanaler i cellerna. Denna teknik kan tillämpas på jonkanaler i både deras naturliga miljö och uttrycks i heterolog celler, t.ex. oocyter skördats från klor afrikanska grodan, Xenopus laevis. Här beskriver vi den väletablerade tekniken med patch clamp inspelning från Xenopus oocyter. Denna teknik används för att mäta egenskaperna hos uttryckt jonkanaler antingen i populationer (macropatch) eller individuellt (singel-kanals inspelning). Vi fokuserar på tekniker för att maximera kvaliteten i äggcellen förberedelse och tätning generation. Med alla faktorer optimeras, ger denna teknik en sannolikhet för framgångsrik säl generationen över 90 procent. Processen kan optimeras på olika sätt av varje forskare bygger på de faktorer som han eller hon finner viktigast, och vi presenterar den metod som lett till den största framgången i våra händer. </p>

Watch this Scientific Journal Video about Patch Clamp Recording of Ion Channels Expressed in  Xenopus Oocytes at JoVE.com

Patch Clamp Recording of Ion Channels Expressed in  Xenopus Oocytes

<p class="jove_content">Detta är tänkt som en introduktion till patch clamp-inspelning från Xenopus laevis oocyter. Det omfattar vitelline membran borttagning, bildandet av en gigaohm tätning (gigaseal) och valfria omvandlingen av plåstret på utsidan ut topologi.</p>

Patch Clamp Registrering av jonkanaler Uttryckt i Xenopus oocyter

Since its development by Sakmann and Neher 1, 2, the patch clamp has become established as an extremely useful technique for electrophysiological ...

Research

JoVE Journal

Biology

Methods for Patch Clamp Capacitance Recordings from the Calyx

Metoder för Kapacitans Patch Clamp inspelningar från Calyx

We demonstrate the basic techniques for presynaptic patch clamp recording at the calyx of Held, a mammalian central nervous system nerve terminal. ...

Pressure-polishing Pipettes for Improved Patch-clamp Recording

Tryck-polering Pipetter för förbättrad patch-clamp-inspelning

Pressure-polishing is a method for shaping glass pipettes for patch-clamp recording.  We first developed this method for fabricating pipettes suitable for ...

Microinjection of Xenopus Laevis Oocytes

Mikroinjektion av Xenopus laevis oocyter

Microinjection of Xenopus laevis oocytes followed by thin-sectioning electron microscopy (EM) is an excellent system for studying nucleocytoplasmic ...

Visualizing RNA Localization in <em>Xenopus</em> Oocytes

Visualizing RNA Localization in Xenopus Oocytes

Visualisera RNA lokalisering i<em> Xenopus</em> Oocyter

RNA localization is a conserved mechanism of establishing cell polarity.  Vg1 mRNA localizes to the vegetal pole of Xenopus laevis oocytes and acts to ...

Fertilization of <em>Xenopus oocytes</em> using the Host Transfer Method

Fertilization of Xenopus oocytes using the Host Transfer Method

Gödsling av<em> Xenopus oocyter</em> Med metoden Host Transfer

Studying the contribution of maternally inherited molecules to vertebrate early development is often hampered by the time and expense necessary to ...

Mutagenesis and Functional Analysis of Ion Channels Heterologously Expressed in Mammalian Cells

Mutagenes och funktionsanalys av jonkanaler Uttryckt Heterologously i däggdjursceller

We will demonstrate how to study the functional effects of introducing a point mutation in an ion channel. We study G protein-gated inwardly rectifying ...

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in <em>Xenopus</em> oocytes

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

Patch Clamp och tekniker perfusion för att studera jonkanaler Uttryckt i<em> Xenopus</em> Oocyter

The protocol presented here is designed to study the activation of the large conductance, voltage- and Ca2+-activated K+ (BK) channels. The protocol may ...

Optimized Transfection Strategy for Expression and Electrophysiological Recording of Recombinant Voltage-Gated Ion Channels in HEK-293T Cells

Optimerad Transfektion Strategi för Expression och elektrofysiologiska Inspelningen av rekombinanta spänningskänsliga jonkanaler i HEK-293T celler

The in vitro expression and electrophysiological recording of recombinant voltage-gated ion channels in cultured human embryonic kidney cells (HEK-293T) ...

Giant Liposome Preparation for Imaging and Patch-Clamp Electrophysiology

Jätte liposomberedningen för Imaging och Patch-Clamp Electrophysiology

The reconstitution of ion channels into chemically defined lipid membranes for electrophysiological recording has been a powerful technique to identify ...

The <em>Xenopus</em> Oocyte Cut-open Vaseline Gap Voltage-clamp Technique With Fluorometry

The Xenopus Oocyte Cut-open Vaseline Gap Voltage-clamp Technique With Fluorometry

Den<em&gt; Xenopus</em&gt; Äggcellen Cut-öppen vaselin Gap spänning-clamp teknik med fluorometri

The cut-open oocyte Vaseline gap (COVG) voltage clamp technique allows for analysis of electrophysiological and kinetic properties of heterologous ion ...