<p> Daraltma çözüm tarifi RW Aldrich laboratuar. Ulusal Sağlık Enstitüleri, Ulusal Bilim Vakfı, Amerikan Kalp Derneği, Müsküler Distrofi Derneği, Donald B. ve Delia E. Baxter Vakfı, Klingenstein Fonu ve McKnight Endowment for Neuroscience için: Biz aşağıdaki finansman kuruluşları ve vakıflar destek için teşekkür ederiz. </p>

<p class="jove_step"> Bölüm 1: vitellin membran Çıkarma </p><ol><li> Forseps iki set hazırlayın. Biz bir takım hafif bir dosya ile bilenmiş olmuştur No: 5 forseps tercih ediyor. Ayrıca 7 &quot;Pasteur pipeti kırparak ve yangın parlatma, bir cam transferi pipet hazırlar. </li><li> <em>Önerilen:</em> oosit kaymasını önlemek için, ızgara bir daire (1 mm kareler) kesme ve 60mm bir Petri kabı altına yapıştırıcı. Bu yemek, kullanımlar arasında temiz tutulması halinde süresiz olarak yeniden kullanılabilir. </li><li> Bir ...

<ol>
	<li>Neher, E., Sakmann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-channel+currents+recorded+from+membrane+of+denervated+frog+muscle+fibres.">Single-channel currents recorded from membrane of denervated frog muscle fibres.</a> <em style='font-style: italic'>Nature</em>. <b>260</b>, 799-802 (1976).</li><li>Sackmann, B., Neher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> <em style='font-style: italic'>Single-channel Recording</em>. , (1983).</li></ol>

<p> Burada tartışılan elektrofizyolojik kayıt birçok parametre vardır. Rig kurulum, sistem gürültü yönetimi, kanal ifadesi, ve kayıt protokolleri iyi deneysel sonuçlar da kritik öneme sahiptir. </p><p> Deneyimlerimize göre, bu güvenilir mühürler oluşturan en önemli parametreler şunlardır: banyo girerken yüksek kalitede oosit, (nam-ı diğer &quot;soyma&quot;) hızla vitellin membran kaldırarak, tozdan korunan yeni çekilmiş pipetler, pürüzsüz pipetler, uygulanan pozitif basınç çözümü, kapatılmadan önce banyoda...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Patch Clamp Amplifier & Software</td>
<td>Instrument</td>
<td>HEKA or Axon</td>
<td>EPC-10</td>
<td>Or other similar device (e.g. HEKA EPC-9 or Axopatch 200B)</td>
</tr>
<tr>
<td>No. 5 forceps (two pairs)</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Oocyte shrinking solution</td>
<td>Reagent</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ingredient                            In mM
N-methyl-D-glucamine     220
HEPES                                   10
MgCl2                                       1
EGTA                                       10
Aspartic Acid                        220
KCl                                             2
pH to 7.4 w/ N-methyl-D-glucamine</td>
</tr>
<tr>
<td>woven mesh</td>
<td>800 um</td>
<td>Spectrum Laboratories INC</td>
<td>146481</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

patch clamp recording of ion channels expressed in  xenopus oocytes

<p class="jove_content"> Sakmann ve Neher <sup>1, 2,</sup> geliştirme bu yana, yama kelepçe hücreleri tekli veya çoklu iyon kanallarının elektrofizyolojik ölçüm için son derece yararlı bir teknik olarak kurulan haline gelmiştir . Bu teknik, kendi doğal ortamında hem de iyon kanalları için uygulanabilir ve heterolog hücreleri, Afrika pençeli kurbağası, Xenopus laevis hasat oosit gibi ifade edilebilir. Burada, Xenopus oositleri yama kelepçe kayıt köklü bir tekniktir açıklar. Bu teknik, bireysel olarak nüfus (macropatch) ya da (tek kanallı kayıt) olarak ifade iyon kanalları özelliklerini ölçmek için kullanılır. Oosit hazırlanması ve conta üretimi kalitesini en üst düzeye çıkarmak için teknikleri üzerine odaklanır. Tüm faktörleri optimize edilmiş, bu tekniğin başarılı conta üretimi yüzde 90 üzerinde bir olasılık verir. Bu süreç, o en önemli buluntu faktörlere dayanan her araştırmacı tarafından farklı olarak optimize edilmiş, ve biz elimizde en büyük başarısı için yol var yaklaşım mevcut olabilir. </p>

Watch this Scientific Journal Video about Patch Clamp Recording of Ion Channels Expressed in  Xenopus Oocytes at JoVE.com

Patch Clamp Recording of Ion Channels Expressed in  Xenopus Oocytes

<p class="jove_content">Bu Xenopus laevis oosit kelepçe kayıt yama için bir giriş olarak tasarlanmıştır. Vitellin membran, bir gigaohm mühür (gigaseal) oluşumu ve dış topoloji yama isteğe bağlı dönüşüm kapsar.</p>

Xenopus Oosit ifade İyon Kanalları Patch Kelepçe Kaydı

Since its development by Sakmann and Neher 1, 2, the patch clamp has become established as an extremely useful technique for electrophysiological ...

Research

JoVE Journal

Biology

Methods for Patch Clamp Capacitance Recordings from the Calyx

Kaliks Patch Kelepçe Kapasitans Kayıtlar Yöntemleri

We demonstrate the basic techniques for presynaptic patch clamp recording at the calyx of Held, a mammalian central nervous system nerve terminal. ...

Pressure-polishing Pipettes for Improved Patch-clamp Recording

Geliştirilmiş Patch-kelepçe kayıt için Basınç-parlatma Pipetler

Pressure-polishing is a method for shaping glass pipettes for patch-clamp recording.  We first developed this method for fabricating pipettes suitable for ...

Microinjection of Xenopus Laevis Oocytes

Xenopus laevis Oosit, Mikroenjeksiyon

Microinjection of Xenopus laevis oocytes followed by thin-sectioning electron microscopy (EM) is an excellent system for studying nucleocytoplasmic ...

Visualizing RNA Localization in <em>Xenopus</em> Oocytes

Visualizing RNA Localization in Xenopus Oocytes

Görselleştirme RNA Yerelleştirme<em> Xenopus</em> Oosit

RNA localization is a conserved mechanism of establishing cell polarity.  Vg1 mRNA localizes to the vegetal pole of Xenopus laevis oocytes and acts to ...

Fertilization of <em>Xenopus oocytes</em> using the Host Transfer Method

Fertilization of Xenopus oocytes using the Host Transfer Method

Gübrelenmesi<em> Xenopus oositleri</em> Host Transfer Yöntemi kullanılarak

Studying the contribution of maternally inherited molecules to vertebrate early development is often hampered by the time and expense necessary to ...

Mutagenesis and Functional Analysis of Ion Channels Heterologously Expressed in Mammalian Cells

İyon Kanalları ve Fonksiyonel Analiz Mutagenez Heterologously Memeli Hücreleri cinsinden ifade edilir

We will demonstrate how to study the functional effects of introducing a point mutation in an ion channel. We study G protein-gated inwardly rectifying ...

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in <em>Xenopus</em> oocytes

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

İyon Kanalları incelenmesi için yama Kelepçe ve Perfüzyon Teknikleri cinsinden ifade edilir<em> Xenopus</em> Oosit

The protocol presented here is designed to study the activation of the large conductance, voltage- and Ca2+-activated K+ (BK) channels. The protocol may ...

Optimized Transfection Strategy for Expression and Electrophysiological Recording of Recombinant Voltage-Gated Ion Channels in HEK-293T Cells

İfade ve HEK-293T Hücreler Rekombinant Gerilim Gated İyon Kanalları Elektrofizyolojik Kayıt için optimize edilmiş Transfeksiyon Strateji

The in vitro expression and electrophysiological recording of recombinant voltage-gated ion channels in cultured human embryonic kidney cells (HEK-293T) ...

Giant Liposome Preparation for Imaging and Patch-Clamp Electrophysiology

Görüntüleme ve Patch-Kelepçe Elektrofizyoloji için dev Liposome Hazırlık

The reconstitution of ion channels into chemically defined lipid membranes for electrophysiological recording has been a powerful technique to identify ...

The <em>Xenopus</em> Oocyte Cut-open Vaseline Gap Voltage-clamp Technique With Fluorometry

The Xenopus Oocyte Cut-open Vaseline Gap Voltage-clamp Technique With Fluorometry

<em&gt; Xenopus</emFluorometri ile&gt; Yumurta Kes-açık Vazelin Gap Gerilim-kelepçe Tekniği

The cut-open oocyte Vaseline gap (COVG) voltage clamp technique allows for analysis of electrophysiological and kinetic properties of heterologous ion ...