Name: method for whole mount antibody staining in chick
Uploaded: 2009-02-02T00:00:00
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Les anticorps monoclonaux (15.3B9, PAX7) développé par (J. Dodd, MC Jessell et A. Kawakami) ont été obtenus auprès de la Banque de développement d&#39;hybridomes études élaborées sous les auspices de l&#39;NICHD et maintenu par l&#39;Université de l&#39;Iowa, Département des sciences biologiques , dans l&#39;Iowa. DP est récipiendaire du Prix Ruth Kirschstein 1F32-01A1 DA021977 du National Institute on Drug Abuse. Ce travail a été soutenu par la Fondation Margaret M. Alkek au RHF.

I. Schéma Aperçu: Cette vidéo montre les différentes étapes de l&#39;immunohistochimie monter ensemble dans l&#39;embryon de poulet. Tout d&#39;abord, l&#39;embryon est fixé en PFA [IHC1]. Ensuite, l&#39;activité peroxydase endogène est éteint [IHC2]. L&#39;embryon est ensuite incubée dans l&#39;anticorps primaire [IHC3]. Après plusieurs lavages, l&#39;embryon est incubé dans anticorps secondaire [IHC4]; réaction colorée se révèle en DAB [IHC5] et la coloration des anticorps ap...

<ol>
	<li>Yamada, T., Placzek, M., Tanaka, H., Dodd, J., Jessell, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+cell+pattern+in+the+developing+nervous+system:+Polarizing+activity+of+the+floor+plate+and+notochord.">Control of cell pattern in the developing nervous system: Polarizing activity of the floor plate and notochord.</a> Cell. 64, 635-647 (1991).</li><li>Streit, A., Stern, C. D., Thery, C., Ireland, G. W., Aparicio, S., Sharpe, M. J., Gherardi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+HGF/SF+in+neural+induction+and+its+expression+in+Hensen's+node+during+gastrulation.">A role for HGF/SF in neural induction and its expression in Hensen's node during gastrulation.</a> Development. 121, 813-824 (1995).</li><li>Basch, M., Bronner-Fraser, M., Garcia-Castro, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specification+of+neural+crest+occurs+during+gastrulation+and+requires+Pax7.">Specification of neural crest occurs during gastrulation and requires Pax7.</a> Nature. 441, 218-222 (2006).</li><li>Psychoyos, D., Stern, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restoration+of+the+organizer+after+radical+ablation+of+Hensen's+node+and+the+anterior+primitive+streak+in+the+chick+embryo.">Restoration of the organizer after radical ablation of Hensen's node and the anterior primitive streak in the chick embryo.</a> Development. 122, 3263-3273 (1996).</li></ol>

Cette vidéo montre les différentes étapes dans l&#39;exécution de coloration des anticorps entiers monter dans des embryons de poulet jeunes. Ce protocole est essentiellement utilisé pour la caractérisation spatiale et temporelle de nouveaux anticorps chez le poulet 2,3, ainsi que pour l&#39;utilisation de marqueurs antigéniques connues pour déterminer les malformations embryonnaires suivantes insulte 4.

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Eggs</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Charles River Laboratories</td>
<td>Premium Fertile</td>
<td>Fertilized, HH4 (16 hr)</td>
</tr>
<tr>
<td>Stereomicroscope</td>
<td>Microscope</td>
<td>Leica Microsystems</td>
<td>MZ9.5 or similar</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Marsh Automatic Incubator</td>
<td>Other</td>
<td>Lyon</td>
<td>RX</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Curved Forceps (1)</td>
<td>Tool</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>72991-4C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps (2)</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>11002-13</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fine scissors</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>14161-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td> Plastic dishes</td>
<td>Tool</td>
<td>Falcon</td>
<td>353001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Rubber Bulb</td>
<td>Tool</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>70980</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pasteur Capillary Pipette</td>
<td>Tool</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>70950-12</td>
<td>round edge under flame</td>
</tr>
<tr>
<td>Microdissecting knife</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>10056-12</td>
<td>Use to cut embryo from surrounding membranes following fixation</td>
</tr>
<tr>
<td>Sylgard 184 Silicon Elastomer Curing Agent and Base</td>
<td>Reagent</td>
<td>Dow Corning</td>
<td>0001986475</td>
<td>Mix 1 part Curing Agent, 9 parts Base; set O/N at 37C</td>
</tr>
<tr>
<td>16% PFA</td>
<td>Reagent</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>15710</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>30% H2O2</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>H1009</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BSA</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>A3803</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>NGS</td>
<td>Reagent</td>
<td>Jackson Immuno</td>
<td>005-000-121</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Primary Antibodies</td>
<td>Reagent</td>
<td>Developmental studies Hybridoma Bank</td>
<td>4G11, 15.3B9, PAX7</td>
<td>For these antibodies, investgators used mouse donnors</td>
</tr>
<tr>
<td>Peroxidase conjugated-Goat Anti-Mouse IgG (H+L) </td>
<td>Reagent</td>
<td>Jackson Immuno</td>
<td>115-035-003</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>3,3&#x2019;-diaminobenzidine tetrahydrochloride</td>
<td>Reagent</td>
<td>Pierce</td>
<td>34001</td>
<td>Store at -20; Allow bottle to warm to RT before use.</td>
</tr>
<tr>
<td>Cedar wood oil</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>W522503</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fast green FCF</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>F7252</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Minuten pins 0.2mm diam</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>26002-20 </td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

method for whole mount antibody staining in chick

L&#39;embryon de poulet est un outil précieux dans l&#39;étude du développement embryonnaire précoce. Sa transparence, l&#39;accessibilité et la facilité de manipulation, en font un outil idéal pour étudier l&#39;expression d&#39;anticorps dans le développement du cerveau, du tube neural et des somites. Cette vidéo montre les différentes étapes de coloration des anticorps entiers de montage en utilisant HRP conjugué anticorps secondaire; d&#39;abord, l&#39;embryon est disséquée de l&#39;oeuf et fixés dans du paraformaldéhyde. Deuxièmement, la peroxydase endogène est inactivé; L&#39;embryon est ensuite exposée à l&#39;anticorps primaire. Après plusieurs lavages, l&#39;embryon est incubée avec un anticorps secondaire conjugué à la HRP. L&#39;activité peroxydase est révélée en utilisant la réaction avec le substrat diaminobenzidine. Enfin, l&#39;embryon est fixe et traitées pour la photographie et de sectionnement. L&#39;avantage de cette méthode sur l&#39;utilisation d&#39;anticorps fluorescents est que les embryons peuvent être traités pour la coupe de la cire, permettant ainsi à l&#39;étude de sites antigéniques en coupe transversale. Cette méthode a été initialement présenté par Jane et Tom Dodd Jessell<sup&gt; 1</sup&gt;.

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Method for Whole Mount Antibody Staining in Chick

Cette vidéo montre tout le mont immunohistochimie, une méthode par laquelle le profil d&#39;expression spatiale et temporelle d&#39;un antigène peut être visualisé dans des embryons de poulet jeunes. Cette méthode a été initialement présenté par Jane et Tom Dodd Jessell.

Méthode de coloration Mont anticorps entier de Chick

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Research

JoVE Journal

Biology

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

Méthode pour la culture d&#39;embryons de poulet Early ex vivo (Nouvelle Culture)

Recherche

Biologie

Double Whole Mount in situ Hybridization of Early Chick Embryos

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Zebrafish Whole Mount High-Resolution Double Fluorescent In Situ Hybridization

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Using Whole Mount in situ Hybridization to Link Molecular and Organismal Biology

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Utilisation Mont entier<em&gt; In situ</emHybridation&gt; Lien vers biologie moléculaire et Organismal

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Whole Mount in Situ Hybridization of E8.5 to E11.5 Mouse Embryos

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Whole Mount RNA Fluorescent in situ Hybridization of Drosophila Embryos

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Toute Mont ARN fluorescent<em&gt; In situ</emHybridation&gt; d&#39;<em&gt; Drosophila</em&gt; Embryons

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RNA In situ Hybridization in Whole Mount Embryos and Cell Histology Adapted for Marine Elasmobranchs

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ARN<em&gt; In situ</emHybridation&gt; en embryons entiers de montage et histologie Adapté pour les élasmobranches marins

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Anticorps coloration dans<em&gt; C. Elegans</em&gt; Utilisation de «gel-Cracking&quot;

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In flowering plants, the somatic-to-reproductive cell fate transition is marked by the specification of spore mother cells (SMCs) in floral organs of the ...

Flat Mount Preparation for Observation and Analysis of Zebrafish Embryo Specimens Stained by Whole Mount In situ Hybridization

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Appartement Mont Préparation pour l&#39;observation et l&#39;analyse des échantillons embryon de poisson zèbre souillé par toute la montagne<em&gt; In situ</em&gt; Hybridation

The zebrafish embryo is now commonly used for basic and biomedical research to investigate the genetic control of developmental processes and to model ...