Name: method for whole mount antibody staining in chick
Uploaded: 2009-02-02T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Method for Whole Mount Antibody Staining in Chick at JoVE.com

Die monoklonalen Antikörper (15.3B9, PAX7) durch (J. Dodd, TM Jessell und A. Kawakami) entwickelt wurden, aus dem Developmental Studies Hybridoma Bank unter der Schirmherrschaft der NICHD und von der University of Iowa gepflegt, Department of Biological Sciences entwickelt erhalten , Iowa. DP ist Empfänger von Ruth Kirschstein-Award 1F32 DA021977-01A1 aus dem National Institute on Drug Abuse. Diese Arbeit wurde von der Margaret M. Alkek Stiftung RHF unterstützt.

I. Schematische Übersicht: Dieses Video zeigt die verschiedenen Schritte in whole mount Immunhistochemie in Hühnerembryo. Zunächst wird der Embryo in PFA fixiert [IHC1]. Dann wird die endogene Peroxidase Aktivität abgeschreckt [IHC2]. Der Embryo wird dann in Primärantikörper [IHC3] inkubiert. Nach mehrmaligem Waschen wird der Embryo in sekundärem Antikörper [IHC4]; Farbreaktion zeigte mit DAB [IHC5] und Antikörper-Färbung erscheint orange [IHC6]. <img src=...

<ol>
	<li>Yamada, T., Placzek, M., Tanaka, H., Dodd, J., Jessell, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+cell+pattern+in+the+developing+nervous+system:+Polarizing+activity+of+the+floor+plate+and+notochord.">Control of cell pattern in the developing nervous system: Polarizing activity of the floor plate and notochord.</a> Cell. 64, 635-647 (1991).</li><li>Streit, A., Stern, C. D., Thery, C., Ireland, G. W., Aparicio, S., Sharpe, M. J., Gherardi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+HGF/SF+in+neural+induction+and+its+expression+in+Hensen's+node+during+gastrulation.">A role for HGF/SF in neural induction and its expression in Hensen's node during gastrulation.</a> Development. 121, 813-824 (1995).</li><li>Basch, M., Bronner-Fraser, M., Garcia-Castro, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specification+of+neural+crest+occurs+during+gastrulation+and+requires+Pax7.">Specification of neural crest occurs during gastrulation and requires Pax7.</a> Nature. 441, 218-222 (2006).</li><li>Psychoyos, D., Stern, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restoration+of+the+organizer+after+radical+ablation+of+Hensen's+node+and+the+anterior+primitive+streak+in+the+chick+embryo.">Restoration of the organizer after radical ablation of Hensen's node and the anterior primitive streak in the chick embryo.</a> Development. 122, 3263-3273 (1996).</li></ol>

Dieses Video zeigt die verschiedenen Schritte bei der Durchführung ganz-mount Antikörper-Färbung bei jungen Hühnerembryonen. Dieses Protokoll ist im Wesentlichen für die räumliche und zeitliche Charakterisierung neuartiger Antikörper in chick 2,3 verwendet, sowie für die Verwendung bekannter antigener Marker zu embryonalen Missbildungen folgenden Beleidigung 4 zu bestimmen.

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Eggs</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Charles River Laboratories</td>
<td>Premium Fertile</td>
<td>Fertilized, HH4 (16 hr)</td>
</tr>
<tr>
<td>Stereomicroscope</td>
<td>Microscope</td>
<td>Leica Microsystems</td>
<td>MZ9.5 or similar</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Marsh Automatic Incubator</td>
<td>Other</td>
<td>Lyon</td>
<td>RX</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Curved Forceps (1)</td>
<td>Tool</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>72991-4C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps (2)</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>11002-13</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fine scissors</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>14161-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td> Plastic dishes</td>
<td>Tool</td>
<td>Falcon</td>
<td>353001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Rubber Bulb</td>
<td>Tool</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>70980</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pasteur Capillary Pipette</td>
<td>Tool</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>70950-12</td>
<td>round edge under flame</td>
</tr>
<tr>
<td>Microdissecting knife</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>10056-12</td>
<td>Use to cut embryo from surrounding membranes following fixation</td>
</tr>
<tr>
<td>Sylgard 184 Silicon Elastomer Curing Agent and Base</td>
<td>Reagent</td>
<td>Dow Corning</td>
<td>0001986475</td>
<td>Mix 1 part Curing Agent, 9 parts Base; set O/N at 37C</td>
</tr>
<tr>
<td>16% PFA</td>
<td>Reagent</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>15710</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>30% H2O2</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>H1009</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BSA</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>A3803</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>NGS</td>
<td>Reagent</td>
<td>Jackson Immuno</td>
<td>005-000-121</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Primary Antibodies</td>
<td>Reagent</td>
<td>Developmental studies Hybridoma Bank</td>
<td>4G11, 15.3B9, PAX7</td>
<td>For these antibodies, investgators used mouse donnors</td>
</tr>
<tr>
<td>Peroxidase conjugated-Goat Anti-Mouse IgG (H+L) </td>
<td>Reagent</td>
<td>Jackson Immuno</td>
<td>115-035-003</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>3,3&#x2019;-diaminobenzidine tetrahydrochloride</td>
<td>Reagent</td>
<td>Pierce</td>
<td>34001</td>
<td>Store at -20; Allow bottle to warm to RT before use.</td>
</tr>
<tr>
<td>Cedar wood oil</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>W522503</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fast green FCF</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>F7252</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Minuten pins 0.2mm diam</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>26002-20 </td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

method for whole mount antibody staining in chick

Der Hühnerembryo ist ein wertvolles Werkzeug in der Studie der frühen Embryonalentwicklung. Seine Transparenz, Zugänglichkeit und einfache Handhabung machen ihn zu einem idealen Werkzeug zur Untersuchung der Antikörper-Expression im sich entwickelnden Gehirn, Neuralrohr und Somiten. Dieses Video zeigt die verschiedenen Schritte ganz-mount Antikörper-Färbung mit HRP konjugierte Sekundärantikörper; Erste, der Embryo aus dem Ei präpariert und fixiert in Paraformaldehyd. Zweitens endogene Peroxidase inaktiviert wird; Der Embryo wird dann in primärer Antikörper ausgesetzt. Nach mehrmaligem Waschen wird der Embryo mit sekundärem Antikörper, konjugiert mit HRP inkubiert. Peroxidase-Aktivität zeigte mit Reaktion mit Diaminobenzidin Substrat. Schließlich ist der Embryo fixiert und für die Fotografie und Schneiden. Der Vorteil dieser Methode gegenüber der Verwendung von fluoreszierenden Antikörpern ist, dass Embryonen für Wachs Schnitte verarbeitet werden, so dass die Untersuchung von Antigen-Sites im Querschnitt. Diese Methode wurde ursprünglich von Jane Dodd und Tom Jessell eingeführt<sup&gt; 1</sup&gt;.

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Method for Whole Mount Antibody Staining in Chick

Dieses Video zeigt whole mount Immunhistochemie, eine Methode, durch die die räumliche und zeitliche Expressionsmuster eines Antigens visualisiert werden bei jungen Hühnerembryonen kann. Diese Methode wurde ursprünglich von Jane Dodd und Tom Jessell eingeführt.

Verfahren zur Whole Mount Antikörper-Färbung in Küken

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Research

JoVE Journal

Biology

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

Method for Culture of Early Hühnerembryonen ex vivo (New Culture)

Forschung

Biologie

Double Whole Mount in situ Hybridization of Early Chick Embryos

Doppel Whole Mount in situ Hybridisierung von Anfang Hühnerembryonen

Zebrafish Whole Mount High-Resolution Double Fluorescent In Situ Hybridization

Zebrafish Whole Mount High-Resolution Double Fluorescent In Situ Hybridization

Zebrafisch Whole Mount High-Resolution Doppel Fluorescent In-situ Hybridisierung

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Using Whole Mount in situ Hybridization to Link Molecular and Organismal Biology

Using Whole Mount in situ Hybridization to Link Molecular and Organismal Biology

Mit Whole Berg In situ Hybridisierung zu Molecular Biology und Organismal Link-

Whole mount in situ hybridization (WISH) is a common technique in molecular biology laboratories used to study gene expression through the localization of ...

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Whole Mount in Situ Hybridization of E8.5 to E11.5 Mouse Embryos

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Whole mount in situ hybridization is a very informative approach for defining gene expression patterns in embryos. The in situ hybridization procedures ...

Whole Mount RNA Fluorescent in situ Hybridization of Drosophila Embryos

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Whole Berg RNA Fluorescent<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisierung<em&gt; Drosophila</em&gt; Embryonen

Assessing  the expression pattern of a gene, as well as the subcellular localization  properties of its transcribed RNA, are key features for ...

RNA In situ Hybridization in Whole Mount Embryos and Cell Histology Adapted for Marine Elasmobranchs

RNA In situ Hybridization in Whole Mount Embryos and Cell Histology Adapted for Marine Elasmobranchs

RNA<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisierung in whole mount Embryonen und Histologie für Marine Elasmobranchs Angepasst

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