Name: method for whole mount antibody staining in chick
Uploaded: 2009-02-02T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Method for Whole Mount Antibody Staining in Chick at JoVE.com

Gli anticorpi monoclonali (15.3B9, PAX7) sviluppato da (J. Dodd, TM Jessell e A. Kawakami) sono stati ottenuti dalla Banca dello Sviluppo Studi Ibridoma sviluppato sotto l&#39;egida del NICHD e mantenuto dalla University of Iowa, Dipartimento di Scienze biologiche , Iowa. DP è destinatario del Premio Ruth Kirschstein DA021977 1F32-01A1 dal National Institute on Drug Abuse. Questo lavoro è stato sostenuto dal M. Margaret Alkek Fondazione RHF.

I. Panoramica schematica: Questo video mostra le diverse fasi in immunoistochimica montare tutto in embrione di pollo. In primo luogo, l&#39;embrione è fissato in PFA [IHC1]. Poi, l&#39;attività della perossidasi endogena si spegne [IHC2]. L&#39;embrione viene quindi incubato in anticorpo primario [IHC3]. Dopo numerosi lavaggi, l&#39;embrione viene incubato in anticorpo secondario [IHC4]; reazione del colore è rivelato utilizzando DAB [IHC5] e colorazione anticorpale sembra arancione [IHC6]...

<ol>
	<li>Yamada, T., Placzek, M., Tanaka, H., Dodd, J., Jessell, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+cell+pattern+in+the+developing+nervous+system:+Polarizing+activity+of+the+floor+plate+and+notochord.">Control of cell pattern in the developing nervous system: Polarizing activity of the floor plate and notochord.</a> Cell. 64, 635-647 (1991).</li><li>Streit, A., Stern, C. D., Thery, C., Ireland, G. W., Aparicio, S., Sharpe, M. J., Gherardi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+HGF/SF+in+neural+induction+and+its+expression+in+Hensen's+node+during+gastrulation.">A role for HGF/SF in neural induction and its expression in Hensen's node during gastrulation.</a> Development. 121, 813-824 (1995).</li><li>Basch, M., Bronner-Fraser, M., Garcia-Castro, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specification+of+neural+crest+occurs+during+gastrulation+and+requires+Pax7.">Specification of neural crest occurs during gastrulation and requires Pax7.</a> Nature. 441, 218-222 (2006).</li><li>Psychoyos, D., Stern, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restoration+of+the+organizer+after+radical+ablation+of+Hensen's+node+and+the+anterior+primitive+streak+in+the+chick+embryo.">Restoration of the organizer after radical ablation of Hensen's node and the anterior primitive streak in the chick embryo.</a> Development. 122, 3263-3273 (1996).</li></ol>

Questo video mostra le varie fasi di esecuzione di tutto il montaggio colorazione anticorpi in embrioni di pollo giovani. Questo protocollo è essenzialmente utilizzato per la caratterizzazione spaziale e temporale di anticorpi romanzo in pulcino 2,3, così come per l&#39;uso di marcatori antigenica nota per determinare malformazioni embrionali seguenti insulto 4.

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<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Eggs</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Charles River Laboratories</td>
<td>Premium Fertile</td>
<td>Fertilized, HH4 (16 hr)</td>
</tr>
<tr>
<td>Stereomicroscope</td>
<td>Microscope</td>
<td>Leica Microsystems</td>
<td>MZ9.5 or similar</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Marsh Automatic Incubator</td>
<td>Other</td>
<td>Lyon</td>
<td>RX</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Curved Forceps (1)</td>
<td>Tool</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>72991-4C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps (2)</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>11002-13</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fine scissors</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>14161-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td> Plastic dishes</td>
<td>Tool</td>
<td>Falcon</td>
<td>353001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Rubber Bulb</td>
<td>Tool</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>70980</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pasteur Capillary Pipette</td>
<td>Tool</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>70950-12</td>
<td>round edge under flame</td>
</tr>
<tr>
<td>Microdissecting knife</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>10056-12</td>
<td>Use to cut embryo from surrounding membranes following fixation</td>
</tr>
<tr>
<td>Sylgard 184 Silicon Elastomer Curing Agent and Base</td>
<td>Reagent</td>
<td>Dow Corning</td>
<td>0001986475</td>
<td>Mix 1 part Curing Agent, 9 parts Base; set O/N at 37C</td>
</tr>
<tr>
<td>16% PFA</td>
<td>Reagent</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>15710</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>30% H2O2</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>H1009</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BSA</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>A3803</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>NGS</td>
<td>Reagent</td>
<td>Jackson Immuno</td>
<td>005-000-121</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Primary Antibodies</td>
<td>Reagent</td>
<td>Developmental studies Hybridoma Bank</td>
<td>4G11, 15.3B9, PAX7</td>
<td>For these antibodies, investgators used mouse donnors</td>
</tr>
<tr>
<td>Peroxidase conjugated-Goat Anti-Mouse IgG (H+L) </td>
<td>Reagent</td>
<td>Jackson Immuno</td>
<td>115-035-003</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>3,3&#x2019;-diaminobenzidine tetrahydrochloride</td>
<td>Reagent</td>
<td>Pierce</td>
<td>34001</td>
<td>Store at -20; Allow bottle to warm to RT before use.</td>
</tr>
<tr>
<td>Cedar wood oil</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>W522503</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fast green FCF</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>F7252</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Minuten pins 0.2mm diam</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>26002-20 </td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

method for whole mount antibody staining in chick

L&#39;embrione di pollo è uno strumento prezioso per lo studio dello sviluppo embrionale precoce. La sua trasparenza, accessibilità e facilità di manipolazione, lo rendono uno strumento ideale per studiare l&#39;espressione di anticorpi nello sviluppo del cervello, del tubo neurale e somite. Questo video mostra le diverse fasi, in tutto il montaggio colorazione anticorpale utilizzando anticorpi coniugati con HRP secondaria; In primo luogo, l&#39;embrione è sezionato dall&#39;uovo e fissati in paraformaldeide. In secondo luogo, perossidasi endogena è inattivato; L&#39;embrione viene quindi esposto a anticorpo primario. Dopo numerosi lavaggi, l&#39;embrione viene incubato con l&#39;anticorpo secondario coniugato con HRP. Perossidasi viene rivelato tramite la reazione con il substrato diaminobenzidina. Infine, l&#39;embrione è fisso ed elaborati per la fotografia e sezionamento. Il vantaggio di questo metodo rispetto all&#39;uso di anticorpi fluorescenti è che gli embrioni possono essere trattati per sezionamento cera, permettendo così lo studio dei siti antigene nella sezione trasversale. Questo metodo è stato originariamente introdotto da Jane e Tom Dodd Jessell<sup&gt; 1</sup&gt;.

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Method for Whole Mount Antibody Staining in Chick

Questo video dimostra tutta montare immunoistochimica, un metodo con cui il modello di espressione spaziale e temporale di un antigene può essere visualizzata in embrioni di pollo giovani. Questo metodo è stato originariamente introdotto da Jane e Tom Dodd Jessell.

Metodo per la colorazione intero anticorpi Monte a Chick

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