Name: method for whole mount antibody staining in chick
Uploaded: 2009-02-02T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Method for Whole Mount Antibody Staining in Chick at JoVE.com

Den monoklonala antikroppar (15.3B9, PAX7) som utvecklats av (J. Dodd, TM Jessell och A. Kawakami) erhölls från utvecklingsstudier Hybridoma Bank utvecklats under ledning av NICHD underhålls och av University of Iowa, Institutionen för bio-vetenskaper , Iowa. DP är mottagare av Ruth Kirschstein Award 1F32 DA021977-01A1 från National Institute on Drug Abuse. Detta arbete stöddes av Margaret M. Alkek Foundation för att RHF.

I. Schematisk översikt: Denna video visar de olika stegen i hela montera immunohistokemi i kycklingembryo. För det första är embryot fastställs i PFA [IHC1]. Då är endogen peroxidasaktivitet kylda [IHC2]. Embryot är då inkuberas i primära antikroppen [IHC3]. Efter flera tvättar, är embryot inkuberas i sekundär antikropp [IHC4]; färgreaktion avslöjas med hjälp av DAB [IHC5] och antikroppar färgning visas Orange [IHC6]. <img src="/files/ftp_upload/old...

<ol>
	<li>Yamada, T., Placzek, M., Tanaka, H., Dodd, J., Jessell, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+cell+pattern+in+the+developing+nervous+system:+Polarizing+activity+of+the+floor+plate+and+notochord.">Control of cell pattern in the developing nervous system: Polarizing activity of the floor plate and notochord.</a> Cell. 64, 635-647 (1991).</li><li>Streit, A., Stern, C. D., Thery, C., Ireland, G. W., Aparicio, S., Sharpe, M. J., Gherardi, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+role+for+HGF/SF+in+neural+induction+and+its+expression+in+Hensen's+node+during+gastrulation.">A role for HGF/SF in neural induction and its expression in Hensen's node during gastrulation.</a> Development. 121, 813-824 (1995).</li><li>Basch, M., Bronner-Fraser, M., Garcia-Castro, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specification+of+neural+crest+occurs+during+gastrulation+and+requires+Pax7.">Specification of neural crest occurs during gastrulation and requires Pax7.</a> Nature. 441, 218-222 (2006).</li><li>Psychoyos, D., Stern, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restoration+of+the+organizer+after+radical+ablation+of+Hensen's+node+and+the+anterior+primitive+streak+in+the+chick+embryo.">Restoration of the organizer after radical ablation of Hensen's node and the anterior primitive streak in the chick embryo.</a> Development. 122, 3263-3273 (1996).</li></ol>

Denna video visar de olika stegen för att utföra hela montering antikroppar färgning hos unga kycklingembryon. Detta protokoll är i huvudsak använts för den rumsliga och tidsmässiga karakterisering av nya antikroppar i chick 2,3, liksom för användningen av kända antigen markörer för att bestämma embryonala missbildningar efter förolämpning 4.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Eggs</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Charles River Laboratories</td>
<td>Premium Fertile</td>
<td>Fertilized, HH4 (16 hr)</td>
</tr>
<tr>
<td>Stereomicroscope</td>
<td>Microscope</td>
<td>Leica Microsystems</td>
<td>MZ9.5 or similar</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Marsh Automatic Incubator</td>
<td>Other</td>
<td>Lyon</td>
<td>RX</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Curved Forceps (1)</td>
<td>Tool</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>72991-4C</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps (2)</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>11002-13</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fine scissors</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>14161-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td> Plastic dishes</td>
<td>Tool</td>
<td>Falcon</td>
<td>353001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Rubber Bulb</td>
<td>Tool</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>70980</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Pasteur Capillary Pipette</td>
<td>Tool</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>70950-12</td>
<td>round edge under flame</td>
</tr>
<tr>
<td>Microdissecting knife</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>10056-12</td>
<td>Use to cut embryo from surrounding membranes following fixation</td>
</tr>
<tr>
<td>Sylgard 184 Silicon Elastomer Curing Agent and Base</td>
<td>Reagent</td>
<td>Dow Corning</td>
<td>0001986475</td>
<td>Mix 1 part Curing Agent, 9 parts Base; set O/N at 37C</td>
</tr>
<tr>
<td>16% PFA</td>
<td>Reagent</td>
<td>Electron Microscopy Sciences</td>
<td>15710</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>30% H2O2</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>H1009</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BSA</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>A3803</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>NGS</td>
<td>Reagent</td>
<td>Jackson Immuno</td>
<td>005-000-121</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Primary Antibodies</td>
<td>Reagent</td>
<td>Developmental studies Hybridoma Bank</td>
<td>4G11, 15.3B9, PAX7</td>
<td>For these antibodies, investgators used mouse donnors</td>
</tr>
<tr>
<td>Peroxidase conjugated-Goat Anti-Mouse IgG (H+L) </td>
<td>Reagent</td>
<td>Jackson Immuno</td>
<td>115-035-003</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>3,3&#x2019;-diaminobenzidine tetrahydrochloride</td>
<td>Reagent</td>
<td>Pierce</td>
<td>34001</td>
<td>Store at -20; Allow bottle to warm to RT before use.</td>
</tr>
<tr>
<td>Cedar wood oil</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>W522503</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fast green FCF</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>F7252</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Minuten pins 0.2mm diam</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>26002-20 </td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

method for whole mount antibody staining in chick

Den kycklingembryo är ett värdefullt verktyg i studiet av tidiga embryonala utvecklingen. Dess öppenhet, tillgänglighet och enkel manipulation, gör det ett idealiskt verktyg för att studera antikroppar uttryck i att utveckla hjärnan, neuralrörsdefekter och somit. Denna video visar de olika stegen i hela montera antikropp färgning med HRP konjugerade sekundära antikroppar, det första är embryot skäras ut från ägget och fasta i paraformaldehyd. För det andra, endogen peroxidas är inaktiverat, Embryot är då utsätts för primär antikropp. Efter flera tvättar, är embryot inkuberas med sekundär antikropp konjugerad med HRP. Peroxidasaktivitet avslöjas med hjälp av reaktion med Diaminobenzidin substrat. Slutligen är embryot fast och behandlas för fotografering och sektionering. Fördelen med denna metod över användningen av fluorescerande antikroppar är att embryon kan behandlas för vax sektionering, vilket gör det möjligt att studera antigen platser i genomskärning. Denna metod introducerades ursprungligen av Jane Dodd och Tom Jessell<sup&gt; 1</sup&gt;.

Watch this Scientific Journal Video about Method for Whole Mount Antibody Staining in Chick at JoVE.com

Method for Whole Mount Antibody Staining in Chick

Denna video visar hela montera immunohistokemi, en metod som den rumsliga och tidsmässiga uttryck mönster av ett antigen kan visualiseras i unga kycklingembryon. Denna metod introducerades ursprungligen av Jane Dodd och Tom Jessell.

Metod för hela berget antikropp färgning i Chick

The chick embryo is a valuable tool in the study of early embryonic development. Its transparency, accessibility and ease of manipulation, make it an ...

Research

JoVE Journal

Biology

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo (New Culture)

Method for Culture of Early Chick Embryos ex vivo New Culture

Metod för kultur av tidig kycklingembryon ex vivo (New Kultur)

Double Whole Mount in situ Hybridization of Early Chick Embryos

Dubbel Hela Montera in situ hybridisering för tidig kycklingembryon

Zebrafish Whole Mount High-Resolution Double Fluorescent In Situ Hybridization

Zebrafish Whole Mount High-Resolution Double Fluorescent In Situ Hybridization

Zebrafisk Hela Mount högupplöst Dubbel Fluorescerande In Situ Hybridisering

Whole mount in situ hybridization is one of the most widely used techniques in developmental biology.  Here, we present a high-resolution double ...

Using Whole Mount in situ Hybridization to Link Molecular and Organismal Biology

Using Whole Mount in situ Hybridization to Link Molecular and Organismal Biology

Använda Hela Mount På plats Hybridisering till Link Molekyl-och organismbiologi

Whole mount in situ hybridization (WISH) is a common technique in molecular biology laboratories used to study gene expression through the localization of ...

Whole Mount in Situ Hybridization of E8.5 to E11.5 Mouse Embryos

Whole Mount in Situ Hybridization of E8.5 to E11.5 Mouse Embryos

Hela berget<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisering av E8.5 till E11.5 musembryon

Whole mount in situ hybridization is a very informative approach for defining gene expression patterns in embryos. The in situ hybridization procedures ...

Whole Mount RNA Fluorescent in situ Hybridization of Drosophila Embryos

Whole Mount RNA Fluorescent in situ Hybridization of Drosophila Embryos

Hel Mount RNA Lysrör<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisering av<em&gt; Drosophila</em&gt; Embryon

Assessing  the expression pattern of a gene, as well as the subcellular localization  properties of its transcribed RNA, are key features for ...

RNA In situ Hybridization in Whole Mount Embryos and Cell Histology Adapted for Marine Elasmobranchs

RNA In situ Hybridization in Whole Mount Embryos and Cell Histology Adapted for Marine Elasmobranchs

RNA<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisering i hela Mount Embryon och Cell Histologi Anpassad för marina Elasmobranchii

Marine  elasmobranchs are valued animal models for biomedical and genomic studies as  they are the most primitive vertebrates to have adaptive immunity ...

Antibody Staining in C. Elegans Using &quot;Freeze-Cracking&quot;

Antibody Staining in C. Elegans Using "Freeze-Cracking"

Antikropp färgning i<em&gt; C. Elegans</em&gt; Använda &quot;Freeze-Cracking&quot;

To stain C.  elegans with antibodies, the relatively impermeable cuticle must be  bypassed by chemical or mechanical methods.  "Freeze-cracking" is one ...

An Efficient Method for Quantitative, Single-cell Analysis of Chromatin Modification and Nuclear Architecture in Whole-mount Ovules in Arabidopsis

An Efficient Method for Quantitative, Single-cell Analysis of Chromatin Modification and Nuclear Architecture in Whole-mount Ovules in Arabidopsis

En effektiv metod för kvantitativ, analys Encelliga av Chromatin Ändring och Nuclear Arkitektur i hela-fäste fröämnen i<em&gt; Arabidopsis</em

In flowering plants, the somatic-to-reproductive cell fate transition is marked by the specification of spore mother cells (SMCs) in floral organs of the ...

Flat Mount Preparation for Observation and Analysis of Zebrafish Embryo Specimens Stained by Whole Mount In situ Hybridization

Flat Mount Preparation for Observation and Analysis of Zebrafish Embryo Specimens Stained by Whole Mount In situ Hybridization

Flat Mount Förberedelse för observation och analys av Zebrafish Embryo Prover Målat av Hela Mount<em&gt; In situ</em&gt; Hybridisering

The zebrafish embryo is now commonly used for basic and biomedical research to investigate the genetic control of developmental processes and to model ...