Name: pressure-polishing pipettes for improved patch-clamp recording
Uploaded: 2008-10-22T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Pressure-polishing Pipettes for Improved Patch-clamp Recording at JoVE.com

<p> De druk-polishing-techniek werd ontwikkeld in samenwerking met de SR Lockery. </p>

<p class="jove_step"> Pulling pipetten </p><p> Met behulp van een gloeidraad trekker, zoals een Sutter P-97 Flaming / Brown micro-elektrode Puller, trek een set van ongeveer 10-20 pipetten. </p><ol><li> Kies uw glas. We maken gebruik van borosilicaat (BF150-86-10, OD = 1,5 mm, ID = 0,86 mm). Zorgvuldig op te slaan, zodat het glas blijft schoon en stofvrij. </li><li> Ontwerp een programma te trekken. Het primaire doel is een tip opening van ongeveer de gewenste grootte, dat zal afhangen van de toepassing. Sutter&#39;s <em>P-97 Pipetteer Cookbook...

<ol>
	<li>Goodman, M. B., Lockery, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pressure+polishing:+a+method+for+re-shaping+patch+pipettes+during+fire+polishing. .">Pressure polishing: a method for re-shaping patch pipettes during fire polishing. .</a> <em style='font-style: italic'>J Neurosci Methods</em>. <b>100</b>, 13-15 (2000).</li></ol>

<p> We oorspronkelijk ontwikkelde deze methode om pipetten nuttig voor patch-clamp opnamen 2-3 um neuronen in <em>C. elegans</em> <sup>1.</sup> Het is in routine gebruik in het laboratorium Goodman. Wij druk polijsten pipetten niet alleen voor het opnemen van de kleine <em>C. elegans</em> neuronen, maar ook voor het verkrijgen van macropatch en single-channel opnames van ionenkanalen, uitgedrukt in Xenopus oöcyten. Voor een gegeven tip-opening met een diameter, de stompe vorm zorgt voor een lagere weerstand pipet. Lagere pipet weerstand leidt ...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Glass Capillaries</td>
<td>Consumable</td>
<td>Sutter Instruments</td>
<td>BF150-85-10 (or similar)</td>
<td>The method works with any type of capillary except those made from quartz.  However, we recommend using capillaries with a filament.</td>
</tr>
<tr>
<td>Inverted Microscope</td>
<td>Microscope</td>
<td>Leica</td>
<td>DM IL (or similar)</td>
<td>Any simple inverted microscope will do.  However, it is essential to have sufficient magnification to see pipettes during polishing.  We use a 100x metallurgical lens with a long working distance for this purpose.</td>
</tr>
<tr>
<td>Microforge Kit</td>
<td>Tool</td>
<td>ALA Science</td>
<td>CPM-2</td>
<td>Supplies polishing coil, controller and foot pedal.</td>
</tr>
<tr>
<td>Air pressure source</td>
<td>Tool</td>
<td>ALA Science</td>
<td>PR-60</td>
<td>Accessory for providing high pressure, includes a suitable valve.  Alternatively, compressed air from the building can be used together with a filter/regulator (set to 40 PSI) and a 4-way valve (see below)</td>
</tr>
<tr>
<td>4-way valve</td>
<td>Tool</td>
<td>Cole-Parmer</td>
<td>A-98150-01</td>
<td>Fittings will be needed to couple valve to tubing</td>
</tr>
<tr>
<td>Pipette Holder with Luer Connector</td>
<td>Tool</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>MPH-6S20</td>
<td>Use a male luer-to-barb fitting to connect pipette holder to high-pressure tubing</td>
</tr>
<tr>
<td>Tygon&#174; tubing</td>
<td>Tool</td>
<td>Cole-Parmer</td>
<td>06408-62</td>
<td>Use this tubing to connect pipette holder to 4-way valve
</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

pressure-polishing pipettes for improved patch-clamp recording

<p class="jove_content"> Druk-polijsten is een methode voor het vormgeven van glazen pipetten voor de patch-clamp opname. We hebben eerst ontwikkelde deze methode voor het vervaardigen van pipetten geschikt voor het opnemen van kleine (&lt;3 m) neuronale cellichamen. Het basisprincipe is vergelijkbaar met glasblazen en combineert de luchtdruk en warmte te wijzigen de vorm van de patch pipetten voorbereid door een conventionele micropipet trekker. Het kan worden toegepast op de zogenaamde soft (soda lime) en hard (borosilicaat) bril. In het algemeen, de druk polijsten kan verminderen pipet weerstand met 25% zonder het verminderen van de diameter van de tip opening (Goodman en Lockery, 2000). Het kan worden toegepast op vrijwel elk type van glas en vereist slechts de toevoeging van een hoge druk ventiel en passend bij een microforge. Deze techniek is essentieel voor het opnemen van ultrakleine cellen (&lt;5 m) en kan single-channel recording ook verbeteren door het minimaliseren van pipet weerstand. De stompe vorm is ook nuttig voor geperforeerde-patch clamp opnamen, omdat deze tip vorm resulteert in een groter membraan blaar beschikbaar voor perforatie. </p>

Watch this Scientific Journal Video about Pressure-polishing Pipettes for Improved Patch-clamp Recording at JoVE.com

Pressure-polishing Pipettes for Improved Patch-clamp Recording

<p class="jove_content">Dit is een gids voor het wijzigen van de vorm van glas micropipetten. In het bijzonder door gebruik te maken van warmte en luchtdruk van de taper is verbreed zonder verhoging van de tip opening, wat leidt tot een lagere weerstand pipet. Dit is essentieel voor het lage geluidsniveau opnamen van kleine cellen te verkrijgen, maar is nuttig in tal van toepassingen.</p>

Druk polijsten pipetten voor verbeterde patch-clamp opnemen

Pressure-polishing is a method for shaping glass pipettes for patch-clamp recording.  We first developed this method for fabricating pipettes suitable for ...

Research

JoVE Journal

Biology

Methods for Patch Clamp Capacitance Recordings from the Calyx

Methoden voor Patch Clamp capaciteit Recordings uit de Calyx

We demonstrate the basic techniques for presynaptic patch clamp recording at the calyx of Held, a mammalian central nervous system nerve terminal. ...

Patch Clamp Recording of Ion Channels Expressed in  Xenopus Oocytes

Patch Clamp Opname van ionenkanalen Uitgedrukt in Xenopus Eicellen

Since its development by Sakmann and Neher 1, 2, the patch clamp has become established as an extremely useful technique for electrophysiological ...

Making Patch-pipettes and Sharp Electrodes with a Programmable Puller

Het maken van Patch-pipetten en Sharp elektroden met een programmeerbare Puller

Glass microelectrodes (also called pipettes) have been a workhorse of electrophysiology for decades.  Today, such pipettes are made from glass capillaries ...

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in <em>Xenopus</em> oocytes

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

Patch Clamp en perfusie technieken voor het bestuderen van Ion Channels Uitgedrukt in<em> Xenopus</em> Eicellen

The protocol presented here is designed to study the activation of the large conductance, voltage- and Ca2+-activated K+ (BK) channels. The protocol may ...

Aseptic Laboratory Techniques: Volume Transfers with Serological Pipettes and Micropipettors

Aseptische Laboratoriumtechniek: Volume Transfers met serologische Pipetten en Micropipettors

Microorganisms are everywhere - in the air, soil, and human body as well as on inanimate surfaces like laboratory benches and computer keyboards. The ...

Exploring Arterial Smooth Muscle Kv7 Potassium Channel Function using Patch Clamp Electrophysiology and Pressure Myography

Het verkennen van arteriële gladde spier KV7 Kalium Kanaal Functie met Patch Clamp Elektrofysiologie en druk myografie

Contraction  or relaxation of smooth muscle cells within the walls of resistance arteries  determines the artery diameter and thereby controls flow of ...

Giant Liposome Preparation for Imaging and Patch-Clamp Electrophysiology

Giant liposoombereiding for Imaging en patch-clamp elektrofysiologie

The reconstitution of ion channels into chemically defined lipid membranes for electrophysiological recording has been a powerful technique to identify ...

One-channel Cell-attached Patch-clamp Recording

Eenkanaals-Cell bevestigd Patch-clamp-opname

Ion channel proteins are universal devices for fast communication across biological membranes. The temporal signature of the ionic flux they generate ...

Reconstitution of a Transmembrane Protein, the Voltage-gated Ion Channel, KvAP, into Giant Unilamellar Vesicles for Microscopy and Patch Clamp Studies

Reconstructie van een transmembraaneiwit, de Voltage-gated ionkanalen, KvAP, in Giant Unilamellaire Blaasjes voor Microscopie en Patch Clamp Studies

Giant Unilamellar Vesicles (GUVs) are a popular biomimetic system for studying membrane associated phenomena. However, commonly used protocols to grow ...

Implementing Patch Clamp and Live Fluorescence Microscopy to Monitor Functional Properties of Freshly Isolated PKD Epithelium

Implementeren Patch Clamp en Live-fluorescentie microscopie om functionele eigenschappen van vers geïsoleerde PKD Epithelium Monitor

Cyst initiation and expansion during polycystic kidney disease is a complex process characterized by abnormalities in tubular cell proliferation, luminal ...