Name: pressure-polishing pipettes for improved patch-clamp recording
Uploaded: 2008-10-22T00:00:00
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<p> La technique de la pression de polissage a été développé en collaboration avec Lockery SR. </p>

<p class="jove_step"> Pipettes de traction </p><p> En utilisant un filament extracteur comme une Sutter P-97 Extracteur microélectrodes Flaming / Brown, tirer un ensemble d&#39;environ 10-20 pipettes. </p><ol><li> Sélectionnez votre verre. Nous utilisons borosilicate (BF150-86-10, DO = 1,5 mm, ID = 0,86 mm). Conservez le verre avec soin afin qu&#39;il reste propre et sans poussière. </li><li> Concevoir un programme de traction. L&#39;objectif principal est une astuce ouverture d&#39;environ la taille désirée, ce qui dépendra de l&#39;appl...

<ol>
	<li>Goodman, M. B., Lockery, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pressure+polishing:+a+method+for+re-shaping+patch+pipettes+during+fire+polishing. .">Pressure polishing: a method for re-shaping patch pipettes during fire polishing. .</a> <em style='font-style: italic'>J Neurosci Methods</em>. <b>100</b>, 13-15 (2000).</li></ol>

<p> Nous avions d&#39;abord développé cette méthode pour faire des pipettes utile pour patch-clamp 2-3 um neurones en <em>C. elegans</em> <sup>1.</sup> C&#39;est dans l&#39;utilisation de routine dans le laboratoire de Goodman. Pipettes pression polonaise Nous avons non seulement pour l&#39;enregistrement à partir de minuscules <em>C.</em> neurones <em>elegans,</em> mais aussi pour l&#39;obtention d&#39;enregistrements macropatch et un seul canal des canaux ioniques exprimés dans des ovocytes de Xenopus. Pour une donnée pointe de l&#39;ou...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Glass Capillaries</td>
<td>Consumable</td>
<td>Sutter Instruments</td>
<td>BF150-85-10 (or similar)</td>
<td>The method works with any type of capillary except those made from quartz.  However, we recommend using capillaries with a filament.</td>
</tr>
<tr>
<td>Inverted Microscope</td>
<td>Microscope</td>
<td>Leica</td>
<td>DM IL (or similar)</td>
<td>Any simple inverted microscope will do.  However, it is essential to have sufficient magnification to see pipettes during polishing.  We use a 100x metallurgical lens with a long working distance for this purpose.</td>
</tr>
<tr>
<td>Microforge Kit</td>
<td>Tool</td>
<td>ALA Science</td>
<td>CPM-2</td>
<td>Supplies polishing coil, controller and foot pedal.</td>
</tr>
<tr>
<td>Air pressure source</td>
<td>Tool</td>
<td>ALA Science</td>
<td>PR-60</td>
<td>Accessory for providing high pressure, includes a suitable valve.  Alternatively, compressed air from the building can be used together with a filter/regulator (set to 40 PSI) and a 4-way valve (see below)</td>
</tr>
<tr>
<td>4-way valve</td>
<td>Tool</td>
<td>Cole-Parmer</td>
<td>A-98150-01</td>
<td>Fittings will be needed to couple valve to tubing</td>
</tr>
<tr>
<td>Pipette Holder with Luer Connector</td>
<td>Tool</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>MPH-6S20</td>
<td>Use a male luer-to-barb fitting to connect pipette holder to high-pressure tubing</td>
</tr>
<tr>
<td>Tygon&#174; tubing</td>
<td>Tool</td>
<td>Cole-Parmer</td>
<td>06408-62</td>
<td>Use this tubing to connect pipette holder to 4-way valve
</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

pressure-polishing pipettes for improved patch-clamp recording

<p class="jove_content"> Pression de polissage est une méthode pour façonner des pipettes en verre pour patch-clamp. Nous avons d&#39;abord développé cette méthode pour la fabrication de pipettes approprié pour l&#39;enregistrement de petite taille (&lt;3 m) des corps cellulaires neuronaux. Le principe de base est similaire à soufflage du verre et combine la pression de l&#39;air et la chaleur de modifier la forme de pipettes de patch préparé par un extracteur micropipette conventionnels. Il peut être appliqué aux soi-disant douces (chaux sodée) et durs (borosilicate) lunettes. De manière générale le polissage de pression, peut réduire la résistance pipette de 25% sans diminuer le diamètre de l&#39;ouverture pointe (Goodman et Lockery, 2000). Il peut être appliqué à pratiquement n&#39;importe quel type de verre et ne nécessite que l&#39;ajout d&#39;une vanne à haute pression et à équiper une microforge. Cette technique est indispensable pour l&#39;enregistrement à partir des cellules ultrapetites (&lt;5 m) et peut également améliorer canal unique d&#39;enregistrement en minimisant la résistance pipette. La forme émoussée est également utile pour l&#39;enregistrement de pince-patch perforé puisque cette forme de la pointe des résultats dans une bulle plus grande membrane disponible pour la perforation. </p>

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Pressure-polishing Pipettes for Improved Patch-clamp Recording

<p class="jove_content">Ceci est un guide pour modifier la forme de micropipettes de verre. Plus précisément, en utilisant la chaleur et la pression d&#39;air du cône est élargi sans pour autant augmenter l&#39;ouverture astuce, conduisant à une plus faible résistance pipette. Cela est essentiel pour obtenir des enregistrements à faible bruit de petites cellules, mais est utile dans de nombreuses applications.</p>

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