Name: pressure-polishing pipettes for improved patch-clamp recording
Uploaded: 2008-10-22T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Pressure-polishing Pipettes for Improved Patch-clamp Recording at JoVE.com

<p style=";text-align:right;direction:rtl"> הטכניקה הלחץ ליטוש פותחה בשיתוף פעולה עם Lockery SR. </p>

<p class="jove_step" style=";text-align:right;direction:rtl"> משיכת pipettes </p><p style=";text-align:right;direction:rtl"> בעזרת חוט כזה חולץ כמו סאטר P-97 Flaming פולר microelectrode / בראון, למשוך קבוצה של כ 10-20 pipettes. </p><ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר זכוכית שלך. אנו משתמשים בורוסיליקט (BF150-86-10, OD = 1.5 מ&quot;מ, ID = 0.86 מ&quot;מ). אחסן את הכוס בזהירות כך הוא ?...

<ol>
	<li>Goodman, M. B., Lockery, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pressure+polishing:+a+method+for+re-shaping+patch+pipettes+during+fire+polishing. .">Pressure polishing: a method for re-shaping patch pipettes during fire polishing. .</a> <em style='font-style: italic'>J Neurosci Methods</em>. <b>100</b>, 13-15 (2000).</li></ol>

<p style=";text-align:right;direction:rtl"> אנחנו במקור פיתחו שיטה להפוך pipettes שימושי הקלטה תיקון-clamp 2-3 מיקרומטר נוירונים ב <em>C. elegans</em> <sup>1.</sup> זה נמצא בשימוש שגרתי במעבדה גודמן. אנחנו בלחץ פולנית pipettes לא רק הקלטה מ <em>ג</em> זעיר נוירונים <em>elegans,</em> אלא גם לקבלת macropatch חד ערוצים הקלטות של תעלות יונים לידי ביטוי ביציות Xenopus. עבור ...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Glass Capillaries</td>
<td>Consumable</td>
<td>Sutter Instruments</td>
<td>BF150-85-10 (or similar)</td>
<td>The method works with any type of capillary except those made from quartz.  However, we recommend using capillaries with a filament.</td>
</tr>
<tr>
<td>Inverted Microscope</td>
<td>Microscope</td>
<td>Leica</td>
<td>DM IL (or similar)</td>
<td>Any simple inverted microscope will do.  However, it is essential to have sufficient magnification to see pipettes during polishing.  We use a 100x metallurgical lens with a long working distance for this purpose.</td>
</tr>
<tr>
<td>Microforge Kit</td>
<td>Tool</td>
<td>ALA Science</td>
<td>CPM-2</td>
<td>Supplies polishing coil, controller and foot pedal.</td>
</tr>
<tr>
<td>Air pressure source</td>
<td>Tool</td>
<td>ALA Science</td>
<td>PR-60</td>
<td>Accessory for providing high pressure, includes a suitable valve.  Alternatively, compressed air from the building can be used together with a filter/regulator (set to 40 PSI) and a 4-way valve (see below)</td>
</tr>
<tr>
<td>4-way valve</td>
<td>Tool</td>
<td>Cole-Parmer</td>
<td>A-98150-01</td>
<td>Fittings will be needed to couple valve to tubing</td>
</tr>
<tr>
<td>Pipette Holder with Luer Connector</td>
<td>Tool</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>MPH-6S20</td>
<td>Use a male luer-to-barb fitting to connect pipette holder to high-pressure tubing</td>
</tr>
<tr>
<td>Tygon&#174; tubing</td>
<td>Tool</td>
<td>Cole-Parmer</td>
<td>06408-62</td>
<td>Use this tubing to connect pipette holder to 4-way valve
</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

pressure-polishing pipettes for improved patch-clamp recording

<p style=";text-align:right;direction:rtl"> לחץ לליטוש היא שיטה לעיצוב pipettes זכוכית הקלטה תיקון-clamp. אנחנו הראשונים שפותחו בשיטה זו בודה pipettes מתאים הקלטה מ (&lt;3 מ &#39;), גופים קטנים תאים עצביים. מנהל בסיסי דומה ניפוח זכוכית, והוא משלב לחץ אוויר וחום לשנות את הצורה של pipettes תיקון שהוכן על ידי חולץ micropipette קונבנציונאלי. זה יכול להיות מיושם רך שנקרא (סודה לימון) וקשה (בורוסיליקט) משקפיים. ככלל, ליטוש הלחץ יכול להפחית התנגדות פיפטה של ​​25% ללא ירידה בקוטר של פתיחת קצה (גודמן Lockery, 2000). זה יכול להיות מיושם כמעט כל סוג של זכוכית דורש רק תוספת של שסתום לחץ גבוה ו הולם microforge. טכניקה זו היא חיונית עבור הקלטת מתאי ultrasmall (&lt;5 מ &#39;) יכול גם לשפר את ההקלטה יחיד הערוץ על ידי צמצום התנגדות פיפטה. הצורה הבוטה שימושית גם עבור הקלטה מחורר, מהדק מאז תיקון זה צורה תוצאות הטיפ בועה קרום יותר עבור ניקוב. </p>

Watch this Scientific Journal Video about Pressure-polishing Pipettes for Improved Patch-clamp Recording at JoVE.com

Pressure-polishing Pipettes for Improved Patch-clamp Recording

<p class="jove_content">זהו מדריך כדי לשנות את הצורה של micropipettes זכוכית. באופן ספציפי, באמצעות חום ולחץ אוויר להתחדד הוא התרחב מבלי להגדיל את פתיחת קצה, המוביל פיפטה התנגדות נמוכה יותר. זה קריטי כדי להשיג הקלטות רעש נמוך של תאים קטנים אך שימושית ביישומים רבים.</p>

לחץ לליטוש pipettes עבור Patch-clamp הקלטה משופרים

Pressure-polishing is a method for shaping glass pipettes for patch-clamp recording.  We first developed this method for fabricating pipettes suitable for ...

Research

JoVE Journal

Biology

Methods for Patch Clamp Capacitance Recordings from the Calyx

שיטות הצמד תיקון הקלטות קיבול מן Calyx

We demonstrate the basic techniques for presynaptic patch clamp recording at the calyx of Held, a mammalian central nervous system nerve terminal. ...

Patch Clamp Recording of Ion Channels Expressed in  Xenopus Oocytes

הצמד תיקון הקלטה של ​​תעלות יונים מתבטא ביציות Xenopus

Since its development by Sakmann and Neher 1, 2, the patch clamp has become established as an extremely useful technique for electrophysiological ...

Making Patch-pipettes and Sharp Electrodes with a Programmable Puller

ביצוע Patch ו-pipettes אלקטרודות שארפ עם פולר לתכנות

Glass microelectrodes (also called pipettes) have been a workhorse of electrophysiology for decades.  Today, such pipettes are made from glass capillaries ...

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in <em>Xenopus</em> oocytes

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

הצמד תיקון וטכניקות זלוף עבור לימוד תעלות יונים מתבטא<em> Xenopus</em> ביציות

The protocol presented here is designed to study the activation of the large conductance, voltage- and Ca2+-activated K+ (BK) channels. The protocol may ...

Aseptic Laboratory Techniques: Volume Transfers with Serological Pipettes and Micropipettors

טכניקות מעבדה אספטיים: העברות נפח עם טפטפות ו Micropipettors סרולוגיות

Microorganisms are everywhere - in the air, soil, and human body as well as on inanimate surfaces like laboratory benches and computer keyboards. The ...

Exploring Arterial Smooth Muscle Kv7 Potassium Channel Function using Patch Clamp Electrophysiology and Pressure Myography

היכרות עם פונקצית עורקי שריר חלק Kv7 אשלגן ערוץ באמצעות אלקטרופיזיולוגיה קלאמפ תיקון וMyography לחץ

Contraction  or relaxation of smooth muscle cells within the walls of resistance arteries  determines the artery diameter and thereby controls flow of ...

Giant Liposome Preparation for Imaging and Patch-Clamp Electrophysiology

הכנת Liposome ענקית הדמיה ותיקון מהדק Electrophysiology

The reconstitution of ion channels into chemically defined lipid membranes for electrophysiological recording has been a powerful technique to identify ...

One-channel Cell-attached Patch-clamp Recording

הקלטת תיקון מהדק מצורף תא אחד ערוצים

Ion channel proteins are universal devices for fast communication across biological membranes. The temporal signature of the ionic flux they generate ...

Reconstitution of a Transmembrane Protein, the Voltage-gated Ion Channel, KvAP, into Giant Unilamellar Vesicles for Microscopy and Patch Clamp Studies

כינונה מחדש של חלבון טראנסממברנלי, יון ערוץ מתח מגודרת, KvAP, לענק Unilamellar שלפוחית ​​למיקרוסקופי וצמד תיקון ללימודים

Giant Unilamellar Vesicles (GUVs) are a popular biomimetic system for studying membrane associated phenomena. However, commonly used protocols to grow ...

Implementing Patch Clamp and Live Fluorescence Microscopy to Monitor Functional Properties of Freshly Isolated PKD Epithelium

יישום הצמד תיקון והחי מיקרוסקופ פלואורסצנטי לפקח על מאפיינים פונקציונליים של מבודד טרי PKD האפיתל

Cyst initiation and expansion during polycystic kidney disease is a complex process characterized by abnormalities in tubular cell proliferation, luminal ...