Name: pressure-polishing pipettes for improved patch-clamp recording
Uploaded: 2008-10-22T00:00:00
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<p> La pressione di lucidatura tecnica è stata sviluppata in collaborazione con Lockery SR. </p>

<p class="jove_step"> Pipette tirando </p><p> Utilizzando un filamento estrattore come un Sutter P-97 Flaming Puller microelettrodo / Brown, tirare un insieme di circa 10-20 pipette. </p><ol><li> Seleziona il tuo bicchiere. Noi usiamo borosilicato (BF150-86-10, OD = 1,5 mm, ID = 0,86 mm). Conservare con cura il vetro in modo che rimane pulito e senza polvere. </li><li> Progettare un programma di trazione. L&#39;obiettivo primario è una punta di apertura circa la dimensione desiderata, che dipende dalla applicazione. Sutter <em>P-97 Cookbook Pi...

<ol>
	<li>Goodman, M. B., Lockery, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pressure+polishing:+a+method+for+re-shaping+patch+pipettes+during+fire+polishing. .">Pressure polishing: a method for re-shaping patch pipettes during fire polishing. .</a> <em style='font-style: italic'>J Neurosci Methods</em>. <b>100</b>, 13-15 (2000).</li></ol>

<p> Inizialmente abbiamo sviluppato questo metodo per pipette utile per patch-clamp registrazione 2-3 micron neuroni in <em>C. elegans</em> <sup>1.</sup> E &#39;in uso di routine nel laboratorio Goodman. Noi pipette pressione smalto non solo per la registrazione da piccolo <em>C. elegans</em> neuroni, ma anche per l&#39;ottenimento di registrazioni macropatch e single-channel dei canali ionici espressi in ovociti di Xenopus. Per un dato in punta di apertura del diametro, la forma smussata produce una minore resistenza pipetta. Resistenza pipett...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Glass Capillaries</td>
<td>Consumable</td>
<td>Sutter Instruments</td>
<td>BF150-85-10 (or similar)</td>
<td>The method works with any type of capillary except those made from quartz.  However, we recommend using capillaries with a filament.</td>
</tr>
<tr>
<td>Inverted Microscope</td>
<td>Microscope</td>
<td>Leica</td>
<td>DM IL (or similar)</td>
<td>Any simple inverted microscope will do.  However, it is essential to have sufficient magnification to see pipettes during polishing.  We use a 100x metallurgical lens with a long working distance for this purpose.</td>
</tr>
<tr>
<td>Microforge Kit</td>
<td>Tool</td>
<td>ALA Science</td>
<td>CPM-2</td>
<td>Supplies polishing coil, controller and foot pedal.</td>
</tr>
<tr>
<td>Air pressure source</td>
<td>Tool</td>
<td>ALA Science</td>
<td>PR-60</td>
<td>Accessory for providing high pressure, includes a suitable valve.  Alternatively, compressed air from the building can be used together with a filter/regulator (set to 40 PSI) and a 4-way valve (see below)</td>
</tr>
<tr>
<td>4-way valve</td>
<td>Tool</td>
<td>Cole-Parmer</td>
<td>A-98150-01</td>
<td>Fittings will be needed to couple valve to tubing</td>
</tr>
<tr>
<td>Pipette Holder with Luer Connector</td>
<td>Tool</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>MPH-6S20</td>
<td>Use a male luer-to-barb fitting to connect pipette holder to high-pressure tubing</td>
</tr>
<tr>
<td>Tygon&#174; tubing</td>
<td>Tool</td>
<td>Cole-Parmer</td>
<td>06408-62</td>
<td>Use this tubing to connect pipette holder to 4-way valve
</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

pressure-polishing pipettes for improved patch-clamp recording

<p class="jove_content"> Pressione lucidatura è un metodo per modellare pipette di vetro per patch-clamp registrazione. In primo luogo abbiamo sviluppato questo metodo per la realizzazione di pipette adatto per la registrazione di piccole dimensioni (&lt;3 m) corpi cellulari neuronali. Il principio di base è simile al vetro soffiato e combina la pressione dell&#39;aria e del calore per modificare la forma di pipette di patch preparata da un estrattore micropipetta convenzionale. Può essere applicato ai cosiddetti soft (calce sodata) e difficile (borosilicato) occhiali. In generale, la lucidatura della pressione può ridurre la resistenza pipetta del 25% senza diminuire il diametro dell&#39;apertura punta (Goodman e Lockery, 2000). Può essere applicato a qualsiasi tipo di vetro e richiede solo l&#39;aggiunta di un valvola di alta pressione e montato su un microforge. Questa tecnica è essenziale per la registrazione da cellule ultrasmall (&lt;5 m) e può anche migliorare singolo canale di registrazione, riducendo al minimo la resistenza pipetta. La forma smussata è utile anche per la registrazione perforata-patch clamp, perché i risultati in forma di questa punta una bozza membrana più disponibile per la perforazione. </p>

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Pressure-polishing Pipettes for Improved Patch-clamp Recording

<p class="jove_content">Questa è una guida per modificare la forma di micropipette di vetro. In particolare, utilizzando il calore e la pressione dell&#39;aria la conicità è allargato senza aumentare l&#39;apertura punta, con conseguente minore resistenza pipetta. Questo è fondamentale per ottenere registrazioni a basso rumore di piccole cellule, ma è utile in molte applicazioni.</p>

Pressione lucidatura Pipette per una migliore patch-clamp di registrazione

Pressure-polishing is a method for shaping glass pipettes for patch-clamp recording.  We first developed this method for fabricating pipettes suitable for ...

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