Name: pressure-polishing pipettes for improved patch-clamp recording
Uploaded: 2008-10-22T00:00:00
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<p> A técnica de pressão polimento foi desenvolvido em colaboração com Lockery SR. </p>

<p class="jove_step"> Pipetas puxando </p><p> Usando um filamento como um extrator Sutter P-97 Flaming Puller microeletrodos / Brown, puxe um conjunto de aproximadamente 10-20 pipetas. </p><ol><li> Selecione seu vidro. Usamos borosilicato (BF150-86-10, OD = 1,5 mm, ID = 0,86 mm). Armazenar o vidro com cuidado para que ele permaneça limpo e livre de poeira. </li><li> Conceber um programa de puxar. O principal objetivo é uma dica de abertura aproximadamente o tamanho desejado, que dependerá da aplicação. <em>P-97</em> Sutter <em>Cookbook Pip...

<ol>
	<li>Goodman, M. B., Lockery, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pressure+polishing:+a+method+for+re-shaping+patch+pipettes+during+fire+polishing. .">Pressure polishing: a method for re-shaping patch pipettes during fire polishing. .</a> <em style='font-style: italic'>J Neurosci Methods</em>. <b>100</b>, 13-15 (2000).</li></ol>

<p> Nós originalmente desenvolvido este método para fazer pipetas útil para patch-clamp gravação 2-3 neurônios M em <em>C. elegans</em> <sup>1.</sup> Ele está em uso rotineiro no laboratório Goodman. Nós pipetas pressão polonês não só para a gravação de pequenos <em>C.</em> neurônios <em>elegans,</em> mas também para a obtenção de macropatch e single-channel gravações de canais iônicos expressos em oócitos Xenopus. Para um determinado diâmetro da ponta-abertura, a forma contundente produz uma pipeta de menor resistência...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Glass Capillaries</td>
<td>Consumable</td>
<td>Sutter Instruments</td>
<td>BF150-85-10 (or similar)</td>
<td>The method works with any type of capillary except those made from quartz.  However, we recommend using capillaries with a filament.</td>
</tr>
<tr>
<td>Inverted Microscope</td>
<td>Microscope</td>
<td>Leica</td>
<td>DM IL (or similar)</td>
<td>Any simple inverted microscope will do.  However, it is essential to have sufficient magnification to see pipettes during polishing.  We use a 100x metallurgical lens with a long working distance for this purpose.</td>
</tr>
<tr>
<td>Microforge Kit</td>
<td>Tool</td>
<td>ALA Science</td>
<td>CPM-2</td>
<td>Supplies polishing coil, controller and foot pedal.</td>
</tr>
<tr>
<td>Air pressure source</td>
<td>Tool</td>
<td>ALA Science</td>
<td>PR-60</td>
<td>Accessory for providing high pressure, includes a suitable valve.  Alternatively, compressed air from the building can be used together with a filter/regulator (set to 40 PSI) and a 4-way valve (see below)</td>
</tr>
<tr>
<td>4-way valve</td>
<td>Tool</td>
<td>Cole-Parmer</td>
<td>A-98150-01</td>
<td>Fittings will be needed to couple valve to tubing</td>
</tr>
<tr>
<td>Pipette Holder with Luer Connector</td>
<td>Tool</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>MPH-6S20</td>
<td>Use a male luer-to-barb fitting to connect pipette holder to high-pressure tubing</td>
</tr>
<tr>
<td>Tygon&#174; tubing</td>
<td>Tool</td>
<td>Cole-Parmer</td>
<td>06408-62</td>
<td>Use this tubing to connect pipette holder to 4-way valve
</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

pressure-polishing pipettes for improved patch-clamp recording

<p class="jove_content"> Pressão polimento é um método para moldar pipetas de vidro para patch-clamp gravação. Nós desenvolvido pela primeira vez este método para a fabricação de pipetas adequado para a gravação de pequenos (&lt;3 m) corpos celulares neuronais. O princípio básico é semelhante ao vidro soprado e combina a pressão do ar e calor para modificar a forma de pipetas de patch preparado por um puxador de micropipeta convencionais. Ela pode ser aplicada aos chamados moles (soda de limão) e rígido (borosilicato) óculos. Polimento de pressão de modo geral, pode reduzir a resistência da pipeta em 25%, sem diminuir o diâmetro de uma abertura (Goodman e Lockery, 2000). Pode ser aplicada a praticamente qualquer tipo de vidro e requer apenas a adição de uma válvula de alta pressão e encaixe a um microforge. Esta técnica é essencial para a gravação a partir de células ultrasmall (&lt;5 m) e também pode melhorar a gravação de um único canal, minimizando a resistência da pipeta. A forma nua e crua é também útil para perfurada-patch clamp gravação uma vez que este resultados ponta forma em uma bolha maior membrana disponíveis para a perfuração. </p>

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Pressure-polishing Pipettes for Improved Patch-clamp Recording

<p class="jove_content">Este é um guia para modificar a forma de micropipetas de vidro. Especificamente, usando calor e pressão de ar do cone é alargado, sem aumentar a abertura da ponta, levando a menor resistência da pipeta. Isto é fundamental para obter gravações de baixo ruído de pequenas células, mas é útil em muitas aplicações.</p>

Pressão polimento Pipetas para Gravação de patch-clamp melhorada

Pressure-polishing is a method for shaping glass pipettes for patch-clamp recording.  We first developed this method for fabricating pipettes suitable for ...

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