Name: pressure-polishing pipettes for improved patch-clamp recording
Uploaded: 2008-10-22T00:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Pressure-polishing Pipettes for Improved Patch-clamp Recording at JoVE.com

<p> Trycket från polering tekniken har utvecklats i samarbete med SR Lockery. </p>

<p class="jove_step"> Dra pipetter </p><p> Med hjälp av en glödtråd avdragare som en Sutter P-97 Flaming / Brown mikroelektrod Avdragare, dra en uppsättning av ca 10-20 pipetter. </p><ol><li> Välj ditt glas. Vi använder borosilikatglas (BF150-86-10, OD = 1,5 mm, ID = 0,86 mm). Förvara glaset försiktigt så att det förblir rent och dammfritt. </li><li> Designa en dra-program. Det primära målet är ett tips att öppna ungefär önskad storlek, som beror på tillämpningen. Sutter s <em>P-97 Pipettera Kokbok</em> <sup>2</sup> är en utm...

<ol>
	<li>Goodman, M. B., Lockery, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pressure+polishing:+a+method+for+re-shaping+patch+pipettes+during+fire+polishing. .">Pressure polishing: a method for re-shaping patch pipettes during fire polishing. .</a> <em style='font-style: italic'>J Neurosci Methods</em>. <b>100</b>, 13-15 (2000).</li></ol>

<p> Vi utvecklade ursprungligen denna metod för att göra pipetter användbart för patch-clamp inspelning 2-3 ìm nervceller i <em>C. elegans</em> <sup>1.</sup> Det är i rutinmässig användning i Goodman laboratoriet. Vi tryck-polish pipetter inte bara för inspelning från små <em>C. elegans</em> nervceller, men också för att få macropatch och en kanal inspelningar av jonkanaler som uttrycks i Xenopus oocyter. För ett givet tips öppnande diameter, producerar trubbiga formen ett lägre motstånd pipett. Lägre pipett motstånd leder t...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Glass Capillaries</td>
<td>Consumable</td>
<td>Sutter Instruments</td>
<td>BF150-85-10 (or similar)</td>
<td>The method works with any type of capillary except those made from quartz.  However, we recommend using capillaries with a filament.</td>
</tr>
<tr>
<td>Inverted Microscope</td>
<td>Microscope</td>
<td>Leica</td>
<td>DM IL (or similar)</td>
<td>Any simple inverted microscope will do.  However, it is essential to have sufficient magnification to see pipettes during polishing.  We use a 100x metallurgical lens with a long working distance for this purpose.</td>
</tr>
<tr>
<td>Microforge Kit</td>
<td>Tool</td>
<td>ALA Science</td>
<td>CPM-2</td>
<td>Supplies polishing coil, controller and foot pedal.</td>
</tr>
<tr>
<td>Air pressure source</td>
<td>Tool</td>
<td>ALA Science</td>
<td>PR-60</td>
<td>Accessory for providing high pressure, includes a suitable valve.  Alternatively, compressed air from the building can be used together with a filter/regulator (set to 40 PSI) and a 4-way valve (see below)</td>
</tr>
<tr>
<td>4-way valve</td>
<td>Tool</td>
<td>Cole-Parmer</td>
<td>A-98150-01</td>
<td>Fittings will be needed to couple valve to tubing</td>
</tr>
<tr>
<td>Pipette Holder with Luer Connector</td>
<td>Tool</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>MPH-6S20</td>
<td>Use a male luer-to-barb fitting to connect pipette holder to high-pressure tubing</td>
</tr>
<tr>
<td>Tygon&#174; tubing</td>
<td>Tool</td>
<td>Cole-Parmer</td>
<td>06408-62</td>
<td>Use this tubing to connect pipette holder to 4-way valve
</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

pressure-polishing pipettes for improved patch-clamp recording

<p class="jove_content"> Tryck-polering är en metod för att forma glas pipetter för patch-clamp inspelning. Vi utvecklade först denna metod för att tillverka pipetter lämplig för inspelning från små (&lt;3 m) neuronal cell organ. Den grundläggande principen liknar glasblåsning och kombinerar lufttryck och värme för att ändra formen på plåster pipetter som utarbetats av en konventionell mikropipett avdragare. Det kan tillämpas på så kallade mjuka (kalk) och hårda (borosilikatglas) glasögon. Generellt trycket polering kan minska pipett motståndet med 25% utan att minska diametern på spetsen öppning (Goodman och Lockery, 2000). Det kan appliceras på nästan alla typer av glas och endast kräver tillsats av en högtrycks-ventil och montering på ett microforge. Denna teknik är avgörande för inspelning från ultrasmall celler (&lt;5 m) och kan också förbättra en-kanals inspelning genom att minimera pipett motstånd. Den trubbiga formen är också användbar för perforerade-patch clamp inspelning eftersom detta tips formen resulterar i en större membran Bleb tillgängliga för perforering. </p>

Watch this Scientific Journal Video about Pressure-polishing Pipettes for Improved Patch-clamp Recording at JoVE.com

Pressure-polishing Pipettes for Improved Patch-clamp Recording

<p class="jove_content">Detta är en guide för att ändra formen på glaset mikropipetter. Specifikt, genom att använda värme och lufttryck den koniska vidgas utan att öka spetsen öppning, vilket leder till lägre pipett motstånd. Detta är avgörande för att erhålla låg ljudnivå inspelningar av små celler, men är användbar i många tillämpningar.</p>

Tryck-polering Pipetter för förbättrad patch-clamp-inspelning

Pressure-polishing is a method for shaping glass pipettes for patch-clamp recording.  We first developed this method for fabricating pipettes suitable for ...

Research

JoVE Journal

Biology

Methods for Patch Clamp Capacitance Recordings from the Calyx

Metoder för Kapacitans Patch Clamp inspelningar från Calyx

We demonstrate the basic techniques for presynaptic patch clamp recording at the calyx of Held, a mammalian central nervous system nerve terminal. ...

Patch Clamp Recording of Ion Channels Expressed in  Xenopus Oocytes

Patch Clamp Registrering av jonkanaler Uttryckt i Xenopus oocyter

Since its development by Sakmann and Neher 1, 2, the patch clamp has become established as an extremely useful technique for electrophysiological ...

Making Patch-pipettes and Sharp Electrodes with a Programmable Puller

Göra Patch-pipetter och Sharp Elektroder med en programmerbar Puller

Glass microelectrodes (also called pipettes) have been a workhorse of electrophysiology for decades.  Today, such pipettes are made from glass capillaries ...

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in <em>Xenopus</em> oocytes

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

Patch Clamp och tekniker perfusion för att studera jonkanaler Uttryckt i<em> Xenopus</em> Oocyter

The protocol presented here is designed to study the activation of the large conductance, voltage- and Ca2+-activated K+ (BK) channels. The protocol may ...

Aseptic Laboratory Techniques: Volume Transfers with Serological Pipettes and Micropipettors

Aseptiska Laboratory Tekniker: Volym Överför med serologiska pipetter och Micropipettors

Microorganisms are everywhere - in the air, soil, and human body as well as on inanimate surfaces like laboratory benches and computer keyboards. The ...

Exploring Arterial Smooth Muscle Kv7 Potassium Channel Function using Patch Clamp Electrophysiology and Pressure Myography

Exploring arteriella glatta muskel KV7 Funktion kaliumkanal med Elektrofysiologi Patch Clamp och tryck Myography

Contraction  or relaxation of smooth muscle cells within the walls of resistance arteries  determines the artery diameter and thereby controls flow of ...

Giant Liposome Preparation for Imaging and Patch-Clamp Electrophysiology

Jätte liposomberedningen för Imaging och Patch-Clamp Electrophysiology

The reconstitution of ion channels into chemically defined lipid membranes for electrophysiological recording has been a powerful technique to identify ...

One-channel Cell-attached Patch-clamp Recording

En-kanals Cell-ansluten Patch-clamp inspelning

Ion channel proteins are universal devices for fast communication across biological membranes. The temporal signature of the ionic flux they generate ...

Reconstitution of a Transmembrane Protein, the Voltage-gated Ion Channel, KvAP, into Giant Unilamellar Vesicles for Microscopy and Patch Clamp Studies

Beredning av ett transmembranprotein, den spänningskänsliga jonkanaler, KvAP, in Giant enlamellvesiklar för mikroskopi och Patch Clamp Studies

Giant Unilamellar Vesicles (GUVs) are a popular biomimetic system for studying membrane associated phenomena. However, commonly used protocols to grow ...

Implementing Patch Clamp and Live Fluorescence Microscopy to Monitor Functional Properties of Freshly Isolated PKD Epithelium

Implementera Patch Clamp och Live fluorescensmikroskopi att övervaka funktionella egenskaper hos nyisolerade PKD epitel

Cyst initiation and expansion during polycystic kidney disease is a complex process characterized by abnormalities in tubular cell proliferation, luminal ...