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Vaccinia Virus Infection &amp; Temporal Analysis of Virus Gene Expression: Part 1

The family Poxviridae consists of large double-stranded DNA containing viruses that replicate exclusively in the cytoplasm of infected cells.  Members of ...

Vaccinia Virus Infection &amp; Temporal Analysis of Virus Gene Expression: Part 2

Vaccinia Virus Infection &amp; Temporal Analysis of Virus Gene Expression: Part 3

MIT - Massachusetts Institute of Technology

&#x4F7F;&#x7528;&#x7EC6;&#x83CC;&#x4EBA;&#x5DE5;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53; (BAC) &#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6709;&#x6784;&#x9020;&#x548C;&#x7279;&#x70B9;&#x4E3B;&#x8981;&#x7ACB;&#x5373;&#x65E9;&#x671F;&#x533A;&#x57DF; 2 &#xFF08;IE2&#xFF09; &#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x5916;&#x663E;&#x5B50;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x4E0E;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x5DE8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x75C5;&#x6BD2;&#x91CD;&#x7EC4;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x56E0;&#x4EA7;&#x7269;&#x3002;&#x7531;&#x6B64;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684; IE2 86 kDa &#x86CB;&#x767D; (IE2 86) &#x6C28;&#x57FA;&#x9178; 136 &#x81F3; 290 &#x5185;&#x90E8;&#x5220;&#x9664;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x589E;&#x5F3A;&#x578B;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; (EGFP) &#x7684;&#x7FA7;&#x57FA;&#x603B;&#x7AD9;&#x4FDD;&#x9669;&#x4E1D;&#x70E7;&#x65AD;&#x3002;&#x5220;&#x9664;&#x64CD;&#x4F5C;&#x8FD8;&#x4F1A;&#x5220;&#x9664; p40 p60 &#x5F62;&#x5F0F;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;IE2 &#x548C;&#x542F;&#x52A8;&#x5668;&#x86CB;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x7A97;&#x4F53;&#x7684;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x548C;&#x542F;&#x52A8;&#x5668;&#x86CB;&#x6C28;&#x9178;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x751F;&#x4EA7;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8FDF;&#x5230;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x4EA7;&#x54C1;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x7A81;&#x53D8;&#x75C5;&#x6BD2; IE2 86 &#x4E09;&#x89D2;&#x6D32; SX &#x4E0E;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x662F;&#x53EF;&#x884C;&#x7684;&#x4F46;&#x5C55;&#x54C1;&#x6539;&#x53D8;&#x76F8;&#x6BD4;&#x5168;&#x957F;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; (wt) IE2 86-&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6216;&#x4E43;&#x662F;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x57F9;&#x517B;&#x4E2D;&#x751F;&#x957F;&#x7279;&#x6027;&#x3002;&#x5F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x611F;&#x67D3;&#x7A81;&#x53D8;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5728;&#x611F;&#x67D3; (MOI) &#x4F4E;&#x591A;&#x91CD;&#x6027;&#x65F6;&#xFF0C;&#x4F20;&#x67D3;&#x6027;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x751F;&#x4EA7;&#x6709;&#x660E;&#x663E;&#x7684;&#x5EF6;&#x8FDF;&#x3002;&#x8FD9;&#x662F;&#x4E0E;&#x8F83;&#x6162;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6269;&#x6563;&#x7684;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x514D;&#x75AB;&#x8367;&#x5149;&#x548C;&#x5370;&#x8FF9;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x79CD;&#x7A81;&#x53D8;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x590D;&#x5236;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x65E9;&#x671F;&#x6B65;&#x9AA4;&#x5AB2;&#x7F8E; wt&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x5927;&#x5927;&#x5C11; IE2 &#x86CB;&#x767D;&#x7A81;&#x53D8;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x521D;&#x59CB;&#x79EF;&#x7D2F; IE1 72 &#x4E0E;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x65E9;&#x671F;&#x86CB;&#x767D;&#x4E2D;&#x6709;&#x53EA;&#x6E29;&#x548C;&#x7684;&#x6EDE;&#x540E;&#x548C;&#x75C5;&#x6BD2; DNA &#x590D;&#x5236;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x6B63;&#x5E38;&#x8FDB;&#x884C;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x7A81;&#x53D8;&#x4E5F;&#x53EA;&#x662F;&#x5F88;&#x5C0F;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4E3B;&#x8981;&#x8863;&#x58F3;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x5408;&#x6210;&#x3002;&#x7A81;&#x53D8;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x6700;&#x663E;&#x8457;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x7F3A;&#x9677;&#x662F;&#xFF0C;pp65 &#x7A33;&#x6001;&#x6C34;&#x5E73; (UL83) &#x548C; pp28 (UL99) &#x57FA;&#x8D28;&#x86CB;&#x767D;&#x5C06;&#x5927;&#x5927;&#x51CF;&#x5C11;&#x3002;UL83&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; UL99&#xFF0C;&#x4E5F;&#x662F;&#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x5B58;&#x5728;&#x76F8;&#x5E94;&#x51CF;&#x5C11;&#x3002;

&#x53EF;&#x884C;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x5DE8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x75C5;&#x6BD2;&#x91CD;&#x7EC4;&#x75C5;&#x6BD2; IE2 86 &#x57FA;&#x56E0;&#x5185;&#x90E8;&#x7F3A;&#x5931;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x540E;&#x671F;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x590D;&#x5236;&#x3002;

Using bacterial artificial chromosome (BAC) technology, we have constructed and characterized a human cytomegalovirus recombinant virus with a mutation in the exon specific for the major immediate-early region 2 (IE2) gene product. The resulting IE2 86-kDa protein (IE2 86) has an internal deletion of amino acids 136 to 290 and is fused at the carboxy terminus to enhanced green fluorescent protein (EGFP). The deletion also removes the promoter and initiator methionine for the p40 form of IE2 and initiator methionine for the p60 form of the protein, and therefore, these late gene products are not produced. The mutant virus IE2 86 Delta SX-EGFP is viable but exhibits altered growth characteristics in tissue culture compared with a full-length wild-type (wt) IE2 86-EGFP virus or a revertant virus. When cells are infected with the mutant virus at a low multiplicity of infection (MOI), there is a marked delay in the production of infectious virus. This is associated with slower cell-to-cell spread of the virus. By immunofluorescence and Western blot analyses, we show that the early steps in the replication of the mutant virus are comparable to those for the wt. Although there is significantly less IE2 protein in the cells infected with the mutant, there is only a modest lag in the initial accumulation of IE1 72 and viral early proteins, and viral DNA replication proceeds normally. The mutation also has only a small effect on the synthesis of the viral major capsid protein. The most notable molecular defect in the mutant virus infection is that the steady-state levels of the pp65 (UL83) and pp28 (UL99) matrix proteins are greatly reduced. In the case of UL83, but not UL99, there is also a corresponding decrease in the amount of mRNA present in cells infected with the mutant virus.

Viable human cytomegalovirus recombinant virus with an internal deletion of the IE2 86 gene affects late stages of viral replication.

Utilisant la technologie de chromosomes artificiels bact&eacute;riens (BAC), nous avons construit et caract&eacute;ris&eacute; un virus recombinant de cytom&eacute;galovirus humain avec une mutation dans l&#39;exon sp&eacute;cifique pour la grande r&eacute;gion pr&eacute;coce imm&eacute;diate 2 (IE2) produit du g&egrave;ne. La prot&eacute;ine de 86 kDa IE2 qui en r&eacute;sulte (IE2 86) a une d&eacute;l&eacute;tion interne d&#39;acides amin&eacute;s 136 &agrave; 290 et est fusionn&eacute;e &agrave; l&#39;extr&eacute;mit&eacute; de carboxy terminale de la prot&eacute;ine fluorescente verte am&eacute;lior&eacute;e (EGFP). La suppression supprime &eacute;galement la m&eacute;thionine initiateur et promoteur du formulaire p40 de m&eacute;thionine IE2 et initiateur du formulaire p60 de la prot&eacute;ine, et par cons&eacute;quent, ces produits de g&egrave;ne tardif ne sont pas produits. Le virus mutant IE2 86 Delta SX-EGFP est viable mais pr&eacute;sente alt&eacute;r&eacute; les caract&eacute;ristiques de croissance en culture de tissus, compar&eacute;e &agrave; une pleine longueur sauvage (wt) virus EGFP 86 IE2 ou un virus r&eacute;vertant. Lorsque des cellules sont infect&eacute;es par le virus mutant &agrave; une faible multiplicit&eacute; d&#39;infection (MOI), il y a un retard sensible dans la production de virus infectieux. Ceci est associ&eacute; &agrave; plus lente cellule-cellule propagation du virus. Par immunofluorescence et buvardage de Western, nous montrons que les premi&egrave;res &eacute;tapes dans la r&eacute;plication du virus mutant sont comparables &agrave; ceux de l&#39;&eacute;quipe de travail. Bien qu&#39;il y a nettement moins IE2 de prot&eacute;ines dans les cellules infect&eacute;es par le mutant, il n&#39;y a seulement un modeste lag dans l&#39;accumulation initiale de 72 IE1 et des prot&eacute;ines virales pr&eacute;coces et r&eacute;plication de l&#39;ADN virale proc&egrave;de normalement. La mutation a &eacute;galement qu&#39;un faible effet sur la synth&egrave;se de la prot&eacute;ine de capside majeure. L&#39;anomalie mol&eacute;culaire plus notable de l&#39;infection par le virus mutant est que les niveaux d&#39;&eacute;quilibre de la pp65 (UL83) et pp28 (UL99) prot&eacute;ines de la matrice sont consid&eacute;rablement r&eacute;duites. Dans le cas de UL83, mais pas UL99, il y a aussi une diminution correspondante au montant de l&#39;ARNm dans les cellules infect&eacute;es par le virus mutant.

Le virus recombinant cytom&eacute;galovirus humain viable avec une d&eacute;l&eacute;tion interne du g&egrave;ne IE2 86 affecte les derni&egrave;res phases de la r&eacute;plication virale.

Lebensf&#xE4;hige humanen Cytomegalovirus rekombinanten Virus mit einer internen Deletion des Gens beeinflusst IE2 86 sp&#xE4;ten Stadien der viralen Replikation.

Utilizzando la tecnologia di cromosomi artificiali batterici (BAC), abbiamo costruito e caratterizzato un virus ricombinante citomegalovirus umano con una mutazione dell&#39;esone specifico per l&#39;importante regione immediata inizio 2 (IE2) prodotto del gene. IE2 86-kDa proteina risultante (IE2 86) ha un&#39;eliminazione interna di aminoacidi 136 a 290 e si fonde al capolinea carboxy di avanzata proteina fluorescente verde (EGFP). L&#39;eliminazione rimuove anche la metionina iniziatore e promotore della forma p40 di metionina IE2 e iniziatore per il modulo p60 della proteina, e quindi, non sono prodotti questi prodotti genici tardo. Il virus mutante IE2 86 Delta SX-EGFP &egrave; praticabile ma esibisce alterate le caratteristiche di crescita in coltura tissutale rispetto ad un full-length wild-type (wt) virus 86-EGFP IE2 o un virus revertanti. Quando le cellule sono infettate con il virus mutante a una molteplicit&agrave; di basso di infezione (MOI), c&#39;&egrave; un ritardo marcato nella produzione di virus infettivo. Questo &egrave; associato con pi&ugrave; lento a cella diffusione del virus. Dall&#39;analisi Western blot e immunofluorescenza, mostriamo che i primi passi nella replicazione del virus mutante sono paragonabili a quelli per la wt. Anche se c&#39;&egrave; significativamente meno IE2 proteina nelle cellule infettate con il mutante, c&#39;&egrave; solo un modesto ritardo nell&#39;accumulazione iniziale dei 72 IE1 e proteine virali, le prime, e la replicazione del DNA virale procede normalmente. La mutazione ha anche solo un piccolo effetto sulla sintesi della proteina del capside virale importante. Il difetto molecolare pi&ugrave; notevole nell&#39;infezione da virus mutante &egrave; che i livelli di steady-state del pp65 (UL83) e pp28 proteine di matrice (UL99) sono notevolmente ridotti. Nel caso di UL83, ma non UL99, c&#39;&egrave; anche una corrispondente diminuzione della quantit&agrave; di mRNA presenti in cellule infettate con il virus mutante.

Vitali citomegalovirus umano ricombinante virus con un interno delezione del gene IE2 86 colpisce ultime fasi della replicazione virale.

&#x7D30;&#x83CC;&#x4EBA;&#x5DE5;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53; &#xFF08;BAC &#x306E;&#xFF09; &#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3057;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30AC;&#x30ED; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x4E3B;&#x8981;&#x306E;&#x5373;&#x6642;&#x521D;&#x671F;&#x5730;&#x57DF; 2 &#xFF08;IE2&#xFF09; &#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30A8;&#x30AF;&#x30BD;&#x30F3;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3068;&#x3057;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7523;&#x7269;&#x3002;&#x7D50;&#x679C; IE2 86 kDa &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (IE2 86) &#x306F;&#x3001;&#x5185;&#x90E8;&#x524A;&#x9664;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178; 136 &#x306B; 290 &#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30DC;&#x30AD;&#x30B7;&#x672B;&#x7AEF;&#x5F37;&#x5316;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (EGFP) &#x306B;&#x878D;&#x5408;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x524A;&#x9664;&#x307E;&#x305F; IE2 &#x3068;&#x30A4;&#x30CB;&#x30B7;&#x30A8;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E; p60 &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x7528;&#x306E; p40 &#x5F62;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x30A4;&#x30CB;&#x30B7;&#x30A8;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x3092;&#x524A;&#x9664;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3001;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5F8C;&#x534A;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x88FD;&#x54C1;&#x306A;&#x3044;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;IE2 86 &#x30C7;&#x30EB;&#x30BF; SX EGFP &#x5B9F;&#x884C;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x5C55;&#x793A;&#x5909;&#x7570;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x6210;&#x9577;&#x7279;&#x6027;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x57F9;&#x990A;&#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; &#xFF08;wt&#xFF09; IE2 86 EGFP &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3084;&#x6728;&#x9162;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x5909;&#x66F4;&#x3002;&#x30BB;&#x30EB;&#x4F4E;&#x591A;&#x69D8;&#x6027;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7; (MOI) &#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x304D;&#x306F;&#x3001;&#x4F1D;&#x67D3;&#x6027;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x3067;&#x306F;&#x8457;&#x3057;&#x3044;&#x9045;&#x5EF6;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x9045;&#x3044;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x5E83;&#x304C;&#x308A;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x86CD;&#x5149;&#x6297;&#x4F53;&#x6CD5;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x897F;&#x90E8;&#x306E;&#x3057;&#x307F;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x304C;&#x3001;wt &#x306B;&#x5339;&#x6575;&#x3059;&#x308B;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3001;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x5C11;&#x306A;&#x3044; IE2 &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x611F;&#x67D3;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; IE1 72 &#x3068;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#x306B;&#x306E;&#x307F;&#x3055;&#x3055;&#x3084;&#x304B;&#x306A;&#x9045;&#x308C;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; DNA &#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x3092;&#x6B63;&#x5E38;&#x306B;&#x7D9A;&#x884C;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x4E3B;&#x8981;&#x30AB;&#x30D7;&#x30B7;&#x30C9;&#x86CB;&#x767D;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x5F71;&#x97FF;&#x306F;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x3082;&#x9855;&#x8457;&#x306A;&#x5206;&#x5B50;&#x6B20;&#x640D;&#x5909;&#x7570;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x3067;&#x306F;&#x3001;pp65 &#x306E;&#x5B9A;&#x5E38;&#x72B6;&#x614B;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x3059; (UL83) &#x3068; pp28 (UL99) &#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x524A;&#x6E1B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;UL83&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x306A;&#x3044; UL99 &#x5834;&#x5408;&#x306F;&#x3001;mRNA &#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x91CF;&#x306E;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3067;&#x3059;&#x3082;&#x3002;

&#x5B9F;&#x884C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30D2;&#x30C8;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30AC;&#x30ED; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3001;IE2 86 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5185;&#x90E8;&#x6B20;&#x640D;&#x3068;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x8907;&#x88FD;&#x306E;&#x5F8C;&#x671F;&#x6BB5;&#x968E;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC138;&#xADE0; &#xC778;&#xACF5; &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; (BAC) &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xAC74;&#xC124; &#xD558; &#xACE0; &#xC8FC;&#xC694; &#xC989;&#xC2DC; &#xCD08;&#xAE30; &#xC9C0;&#xC5ED; 2 (IE2)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD2B9;&#xC815; exon&#xC5D0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC640; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC81C;&#xD488;. &#xACB0;&#xACFC; IE2 86-kDa &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (IE2 86)&#xB294; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; 136 290&#xC758; &#xB0B4;&#xBD80; &#xC0AD;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (EGFP) carboxy &#xC885;&#xC810;&#xC5D0; &#xC735;&#xD569;. &#xC0AD;&#xC81C; &#xB610;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, p60 &#xD615;&#xD0DC;&#xC758; IE2 &#xBC0F; &#xCD08;&#xAE30;&#xC790; &#xBA54;&#xD2F0;&#xC624;&#xB2CC; p40 &#xD615;&#xD0DC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xBC0F; &#xCD08;&#xAE30;&#xC790; &#xBA54;&#xD2F0;&#xC624;&#xB2CC;&#xC744; &#xC81C;&#xAC70; &#xD558; &#xACE0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB2A6;&#xC740; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC81C;&#xD488; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; IE2 86 &#xB378;&#xD0C0; SX EGFP &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC804;&#xC2DC; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; &#xC640;&#xC77C;&#xB4DC; &#xD0C0;&#xC785; (wt) IE2 86 EGFP &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xB610;&#xB294; revertant &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC870;&#xC9C1; &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC131;&#xC7A5; &#xD2B9;&#xC131; &#xBCC0;&#xACBD;. &#xC138;&#xD3EC; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xAC10;&#xC5FC; (MOI)&#xC758; &#xB0AE;&#xC740; &#xB2E4;&#xC911;&#xC131;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB418; &#xBA74; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC131; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xC9C0;&#xC5F0;&#xC774; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; &#xB290;&#xB9B0; &#xC140; &#xD655;&#xC0B0;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBA74;&#xC5ED; &#xD615;&#xAD11; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC0F; &#xC11C;&#xCABD; &#xC624; &#xC810; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; &#xBCF5;&#xC81C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD08;&#xAE30; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB294; wt&#xC5D0; &#xADF8; &#xBE44;&#xAD50;&#xB294; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD06C;&#xAC8C; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB354; &#xC801;&#xC740; IE2 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740;, &#xBE44;&#xB85D; IE1 72&#xC640; &#xCD08;&#xAE30; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xCD95;&#xC801;&#xC5D0;&#xB294; &#xACB8;&#xC190; &#xD558; &#xAC8C; &#xD53C;&#xB85C; &#xBC0F; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; DNA &#xBCF5;&#xC81C;&#xAC00; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC9C4;&#xD589; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB610;&#xD55C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xC8FC;&#xC694; capsid &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xC791;&#xC740; &#xD6A8;&#xACFC;&#xB9CC;&#xC774; &#xC788;&#xB2E4;. &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC8FC;&#xBAA9;&#xD560; &#xB9CC;&#xD55C; &#xBD84;&#xC790; &#xACB0;&#xD568;&#xC740; pp65 &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xC548;&#xC815; &#xB41C; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB294; (UL83) &#xBC0F; pp28 (UL99) &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC904;&#xC77C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. UL83, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; ul99&#xC758; &#xACBD;&#xC6B0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; Mrna&#xC758; &#xC591;&#xC744; &#xD574;&#xB2F9; &#xAC10;&#xC18C;&#xAC00; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

IE2 86 &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xB0B4;&#xBD80; &#xC0AD;&#xC81C; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBCF5;&#xC81C;&#xC758; &#xB2A6;&#xC740; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Usando tecnolog&iacute;a de cromosoma artificial bacteriano (BAC), hemos construido y caracterizado un virus recombinante de citomegalovirus humano con una mutaci&oacute;n en el ex&oacute;n espec&iacute;fico para la regi&oacute;n inmediata y principios principal 2 (IE2) producto del gene. La prote&iacute;na resultante de 86 kDa IE2 (IE2 86) tiene una eliminaci&oacute;n interna de amino&aacute;cidos 136 a 290 y se funde en la terminal de carboxilo a mayor prote&iacute;na verde fluorescente (EGFP). La eliminaci&oacute;n tambi&eacute;n elimina la metionina iniciador y promotor de la forma de p40 de metionina IE2 e iniciador de la forma de la prote&iacute;na p60, y por lo tanto, no se producen estos productos g&eacute;nicos finales. El virus mutante IE2 86 Delta SX-EGFP es viable pero exhibe alterado las caracter&iacute;sticas de crecimiento en cultivo de tejidos en comparaci&oacute;n con un largometraje wild-type (wt) virus de 86-EGFP IE2 o un virus revertido. Cuando las c&eacute;lulas se infectan con el virus mutante en una baja multiplicidad de infecci&oacute;n (MOI), hay un marcado retraso en la producci&oacute;n de virus infeccioso. Esto se asocia con menor propagaci&oacute;n de c&eacute;lula a c&eacute;lula del virus. Por inmunofluorescencia y an&aacute;lisis de Western blot, demostramos que los primeros pasos en la replicaci&oacute;n del virus mutante son comparables a los de la wt. Aunque hay significativamente menos IE2 prote&iacute;nas en las c&eacute;lulas infectadas con el mutante, hay s&oacute;lo un modesto desfase en la acumulaci&oacute;n inicial de 72 IE1 y prote&iacute;nas virales tempranas y replicaci&oacute;n del DNA viral se desarrolla normalmente. La mutaci&oacute;n tambi&eacute;n tiene s&oacute;lo un efecto peque&ntilde;o sobre la s&iacute;ntesis de la prote&iacute;na de la c&aacute;pside viral importante. El defecto molecular m&aacute;s notable en la infecci&oacute;n del virus mutante es que los niveles de estado estacionario de la pp65 (UL83) y pp28 se reducen considerablemente las prote&iacute;nas de la matriz (UL99). En el caso de UL83, pero no UL99, tambi&eacute;n existe una correspondiente disminuci&oacute;n en la cantidad de ARNm presentes en c&eacute;lulas infectadas con el virus mutante.

Virus recombinantes citomegalovirus humano viable con una canceladura interna del gen 86 IE2 afecta a etapas tard&iacute;as de la replicaci&oacute;n viral.

&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E4B;&#x540E;&#x5F00;&#x59CB; DNA &#x590D;&#x5236;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x5DE8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x75C5;&#x6BD2; (HCMV) &#x611F;&#x67D3;&#x4E0D;&#x542F;&#x52A8;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7ACB;&#x5373;&#x65E9;&#x671F; (IE) &#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5E76;&#x902E;&#x6355;&#x524D;&#x5212;&#x5206;&#x3002;&#x8981;&#x786E;&#x5B9A;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5C01;&#x9501;&#x7684;&#x6027;&#x8D28;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4E86;&#x88AB;&#x611F;&#x67D3; 24 &#x5C0F;&#x65F6;&#x540E;&#x91CA;&#x653E;&#x7684; G(0) &#x4F7F;&#x7528;&#x514D;&#x75AB;&#x8367;&#x5149;&#x3001; &#x6FC0;&#x5149;&#x626B;&#x63CF;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EEA;&#x3001; &#x8367;&#x5149;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x9009; (FACS) &#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x5927;&#x7EA6; 40 &#x5230; 50%&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E86; 2N DNA &#x542B;&#x91CF;&#x3001; &#x6210;&#x4E3A;&#x7B2C;&#x4E00; 12 h&#xFF0C;IE(+) &#x548C;&#x902E;&#x6355;&#x3002;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x6240;&#x6709;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E0E; &gt; 2N DNA &#x542B;&#x91CF;&#x5E76;&#x6CA1;&#x6709;&#x8868;&#x793A; IE &#x6297;&#x539F;&#x76F4;&#x5230;&#x540E;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x3002;&#x6765;&#x5B9A;&#x4E49;&#x5C0F;&#x4EBA;&#x53E3;&#x7684;&#x9010;&#x6E10;&#x79EF;&#x7D2F;&#x7684; S &#x548C; G (2) &#x5185;&#x7684; IE(+) &#x7EC6;&#x80DE; /M &#x8F66;&#x53A2;&#xFF0C;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x662F;&#x8109;&#x51B2;&#x4E0E;&#x6EB4;&#x8131;&#x6C27;&#x5C3F;&#x7519; (BrdU) &#x524D;&#x5915; S &#x9636;&#x6BB5;&#x611F;&#x67D3;&#x5E76;&#x5728; IE &#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x3001; BrdU &#x9633;&#x6027;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x4E0E; 12 h &#x53D7;&#x8FDB;&#x884C;&#x5206;&#x6790;&#x3002;BrdU(+) &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x662F; IE(-)&#xFF0C;&#x5E76;&#x5230; G (2) /M &#x6216;&#x56DE; G(1) &#x53D6;&#x5F97;&#x4E86;&#x8FDB;&#x5C55;&#x3002;IE(+) &#x7684;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728; S &#x548C; G (2) /M &#x662F; BrdU(-)&#x3002;&#x53EA;&#x6709;&#x51E0;&#x4E2A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x662F; IE(+) BrdU(+)&#xFF0C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5C45;&#x4F4F;&#x5728; G 2/M.&#x591A;&#x70B9; BrdU &#x8109;&#x51B2;&#x6807;&#x8BB0;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E8E;&#x79EF;&#x6781;&#x5408;&#x6210; DNA &#x5728;&#x611F;&#x67D3;&#x5F00;&#x59CB;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x66F4;&#x5927;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5F00;&#x59CB; DNA &#x590D;&#x5236; 4 h &#x4EE5;&#x540E;&#x7684;&#x767E;&#x5206;&#x6BD4;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8868;&#x793A; IE &#x6297;&#x539F;&#x548C; S.&#x540C;&#x6B65;&#x5E26; aphidicolin &#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x8FDB;&#x5165;&#x8FD8;&#x6307;&#x51FA;&#x4E86;&#x5C01;&#x9501;&#x5BF9; IE &#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x6210;&#x7ACB;&#x4E8E;&#x7EC6;&#x80DE; DNA &#x590D;&#x5236;&#x542F;&#x52A8;&#x540E;&#x4E0D;&#x4E45;&#x3002;&#x770B;&#x6765;&#x77ED;&#x6682;&#x86CB;&#x767D;&#x5728; S &#x671F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x9700;&#x8981;&#x7684; IE &#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5B83;&#x90E8;&#x5206;&#x6062;&#x590D;&#xFF0C;&#x4EE5; MG132 &#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x6CBB;&#x7597;&#x3002;

&#x4EBA;&#x7C7B;&#x5DE8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728; S &#x671F;&#x671F;&#x95F4;&#x611F;&#x67D3;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7684;&#x5C01;&#x9501;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F;&#x53EF;&#x4EE5;&#x514B;&#x670D;&#x7684;&#x7ACB;&#x5373;&#x65E9;&#x671F;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;

Cells infected with human cytomegalovirus (HCMV) after commencing DNA replication do not initiate viral immediate-early (IE) gene expression and divide before arresting. To determine the nature of this blockade, we examined cells that were infected 24 h after release from G(0) using immunofluorescence, laser scanning cytometry, and fluorescence-activated cell sorting (FACS) analysis. Approximately 40 to 50% of the cells had 2N DNA content, became IE(+) in the first 12 h, and arrested. Most but not all of the cells with >2N DNA content did not express IE antigens until after mitosis. To define the small population of IE(+) cells that gradually accumulated within the S and G(2)/M compartments, cells were pulsed with bromodeoxyuridine (BrdU) just prior to S-phase infection and analyzed at 12 h postinfection for IE gene expression, BrdU positivity, and cell cycle position. Most of the BrdU(+) cells were IE(-) and had progressed into G(2)/M or back to G(1). The majority of the IE(+) cells in S and G(2)/M were BrdU(-). Only a few cells were IE(+) BrdU(+), and they resided in G(2)/M. Multipoint BrdU pulse-labeling revealed that, compared to cells actively synthesizing DNA at the beginning of the infection, a greater percentage of the cells that initiated DNA replication 4 h later could express IE antigens and proceed into S. Synchronization of the cells with aphidicolin also indicated that the blockade to the activation of IE gene expression was established in cells soon after initiation of DNA replication. It appears that a short-lived protein in S-phase cells may be required for IE gene expression, as it is partially restored by treatment with the proteasome inhibitor MG132.

Infection of cells with human cytomegalovirus during S phase results in a blockade to immediate-early gene expression that can be overcome by inhibition of the proteasome.

Les cellules infect&eacute;es par le cytom&eacute;galovirus humain (HCMV) apr&egrave;s le d&eacute;but de la r&eacute;plication de l&#39;ADN ne pas initier virale expression des g&egrave;nes pr&eacute;coce imm&eacute;diate (IE) et diviser avant d&#39;arr&ecirc;ter. Pour d&eacute;terminer la nature de ce blocus, nous avons examin&eacute; les cellules qui ont &eacute;t&eacute; infect&eacute;s 24 h apr&egrave;s la lib&eacute;ration du transect lin&eacute;aire &agrave; l&#39;aide d&#39;immunofluorescence, cytom&eacute;trie en flux balayage laser et fluorescence-lanc&eacute;e de cellules tri analyse (FACS). Environ 40 &agrave; 50 % des cellules a teneur en ADN 2N, est devenu IE(+) au cours des 12 premi&egrave;res heures et arr&ecirc;t&eacute;. La plupart, mais pas la totalit&eacute; des cellules avec &amp;gt; 2N contenu en ADN n&#39;a pas formul&eacute; d&#39;antig&egrave;nes IE jusqu&#39;apr&egrave;s la mitose. Pour d&eacute;finir la petite population de cellules IE(+) qui peu &agrave; peu accumul&eacute; dans les S et G (2) compartiments/m, les cellules ont &eacute;t&eacute; puls&eacute;s avec bromod&eacute;oxyuridine (BrdU) juste avant l&#39;infection de la phase S et analys&eacute;s 12 h apr&egrave;s l&#39;infection pour l&#39;expression des g&egrave;nes IE BrdU positivit&eacute; et position du cycle cellulaire. La plupart des cellules BrdU(+) ont &eacute;t&eacute; IE(-) et avait progress&eacute; dans/m G (2) ou en g (1). La majorit&eacute; de la IE(+) des cellules dans f et D (2) / m ont &eacute;t&eacute; BrdU(-). Seules quelques cellules ont &eacute;t&eacute; IE(+) BrdU(+), et ils ont r&eacute;sid&eacute; en sol (2) / M. Multipoint BrdU pulse-&eacute;tiquetage a r&eacute;v&eacute;l&eacute; que, comparativement aux cellules activement de synth&eacute;tiser l&#39;ADN au d&eacute;but de l&#39;infection, un pourcentage plus &eacute;lev&eacute; des cellules qui a initi&eacute; la r&eacute;plication de l&#39;ADN 4 h plus tard pourrait exprimer des antig&egrave;nes IE et soumettre leurs S. synchronisation des cellules avec aphidicoline a &eacute;galement indiqu&eacute; que le blocus &agrave; l&#39;activation de l&#39;expression g&eacute;nique IE a &eacute;t&eacute; cr&eacute;&eacute; en peu de temps apr&egrave;s l&#39;initiation de la r&eacute;plication de l&#39;ADN des cellules. Il semble qu&#39;une prot&eacute;ine de courte dur&eacute;e dans les cellules en phase S peut-&ecirc;tre &ecirc;tre requise pour l&#39;expression des g&egrave;nes IE car il est partiellement r&eacute;tablie par le traitement avec l&#39;inhibiteur du prot&eacute;asome MG132.

Infection de cellules par le cytom&eacute;galovirus humain au cours de la phase S se traduit par un blocus &agrave; l&#39;expression des g&egrave;nes pr&eacute;coces imm&eacute;diats qui peut &ecirc;tre surmont&eacute;e par l&#39;inhibition du prot&eacute;asome.

&#x4EBA;&#x5DE8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x75C5;&#x6BD2; (HCMV) &#x611F;&#x67D3;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x8C03;&#x8282;&#x86CB;&#x767D;&#x65F6;&#x5F02;&#x5E38;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4E86;&#x5BF9;&#x75C5;&#x6BD2;&#x590D;&#x5236;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x6FC0;&#x9176; &#xFF08;cdk&#xFF09; &#x6D3B;&#x6027;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x4E0E;&#x836F;&#x7269;&#x7CFB;&#x5217;&#xFF0C;&#x4E00;&#x79CD;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x6FC0;&#x9176; 1&#x3001; 2&#x3001; 5&#x3001; 7 &#x548C; 9&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x8868;&#x660E;&#x671F;&#x95F4;&#x611F;&#x67D3;&#x7B2C;&#x4E00; 6 h&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x6FC0;&#x9176;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x53D1;&#x751F;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5305;&#x62EC;&#x53D7;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7684;&#x52A0;&#x5DE5;&#x548C;&#x7ACB;&#x5373;&#x65E9;&#x671F; (IE) UL122-123 &#x6210;&#x7EE9;&#x5355;&#x548C; UL36 37 &#x6210;&#x7EE9;&#x5355;&#x7684;&#x79EF;&#x7D2F;&#x3002;&#x6539;&#x53D8; UL122 123 &#x5BFC;&#x81F4; IE1 72 &#x548C; IE2 86 &#x589E;&#x52A0;&#x635F;&#x5931;&#x7684;&#x5904;&#x7406;&#x3002;&#x6BD4;&#x4F8B;&#x62FC;&#x63A5;&#x5230; unspliced UL37 &#x6210;&#x7EE9;&#x5355;&#x4E5F;&#x53D1;&#x751F;&#x4E86;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6548;&#x679C;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x4F53;&#x4E0D;&#x9700;&#x8981; de novo &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5408;&#x6210;&#x6216;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x964D;&#x89E3;&#x3002;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x5F00;&#x5934;&#x7CFB;&#x5217;&#x4E5F;&#x662F;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x7684;&#x5173;&#x8054;&#x9009;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x65E9;&#x671F;&#x57FA;&#x56E0;&#x4EA7;&#x54C1;&#x3001; &#x75C5;&#x6BD2;&#x6027; DNA &#x590D;&#x5236;&#x548C;&#x665A;&#x671F;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5F53;&#x7CFB;&#x5217;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21; 6 h &#x540E;&#x6DFB;&#x52A0;&#x7684;&#x65F6;&#x4E0D;&#x518D;&#x53D1;&#x73B0; IE &#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F71;&#x54CD;&#x548C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x590D;&#x5236;&#x5F00;&#x59CB;&#x901A;&#x8FC7;&#x540E;&#x671F;&#x9636;&#x6BB5;&#xFF0C;&#x4F46;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6EF4;&#x5EA6;&#x3002;&#x5728;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6EF4;&#x5EA6;&#x51CF;&#x5C11;&#x6709;&#x4EBA;&#x751A;&#x81F3;&#x7CFB;&#x5217;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x6DFB;&#x52A0;&#x65F6;&#x5728; 48 h &#x53D7;&#x6307;&#x793A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x5FC5;&#x9700;&#x5728; IE &#x548C;&#x65F6;&#x4EE3;&#x665A;&#x671F;&#x3002;Flavopiridol&#xFF0C;&#x53E6;&#x4E00;&#x79CD;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x6FC0;&#x9176;&#x4E86;&#x7C7B;&#x4F3C; IE &#x548C;&#x65E9;&#x671F;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x5F3A;&#x8C03;&#x51C6;&#x786E;&#x7684; RNA &#x52A0;&#x5DE5;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#xFF0C;&#x5E76;&#x91CD;&#x7533;&#x4EBA;&#x5DE8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x8C03;&#x8282;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x663E;&#x8457;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x5728;&#x65E9;&#x671F;&#x65F6;&#x95F4;&#x51C6;&#x786E;&#x5904;&#x7406;&#x548C;&#x79EF;&#x7D2F;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x5DE8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x75C5;&#x6BD2; UL122 123 &#x548C; UL37 &#x7ACB;&#x5373;&#x65E9;&#x671F;&#x6210;&#x7EE9;&#x5355;&#x548C;&#x5728;&#x7A0D;&#x540E;&#x65F6;&#x95F4;&#x75C5;&#x6BD2;&#x751F;&#x4EA7;&#x9700;&#x8981;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x86CB;&#x767D;&#x4F9D;&#x8D56;&#x6027;&#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;

Human cytomegalovirus (HCMV) infection leads to dysregulation of multiple cell cycle-regulatory proteins. In this study, we examined the effects of inhibition of cyclin-dependent kinase (cdk) activity on viral replication. With the drug Roscovitine, a specific inhibitor of cyclin-dependent kinases 1, 2, 5, 7, and 9, we have shown that during the first 6 h of infection, cyclin-dependent kinase-dependent events occurred that included the regulated processing and accumulation of the immediate-early (IE) UL122-123 transcripts and UL36-37 transcripts. Altered processing of UL122-123 led to a loss of IE1-72 and an increase in IE2-86. The ratio of spliced to unspliced UL37 transcripts also changed. These effects did not require de novo protein synthesis or degradation of proteins by the proteasome. Addition of Roscovitine at the beginning of the infection was also associated with inhibition of expression of selected viral early gene products, viral DNA replication, and late viral gene expression. When Roscovitine was added after the first 6 h of infection, the effects on IE gene expression were no longer observed and viral replication proceeded through the late phase, but viral titers were reduced. The reduction in viral titer was observed even when Roscovitine was first added at 48 h postinfection, indicating that cyclin-dependent kinase activity is required at both IE and late times. Flavopiridol, another specific inhibitor of cyclin-dependent kinases, had similar effects on IE and early gene expression. These results underscore the importance of accurate RNA processing and reiterate the significant role of cell cycle-regulatory factors in HCMV infection.

Cyclin-dependent kinase activity is required at early times for accurate processing and accumulation of the human cytomegalovirus UL122-123 and UL37 immediate-early transcripts and at later times for virus production.

Infection par le cytom&eacute;galovirus humain (HCMV) conduit &agrave; une dysr&eacute;gulation de plusieurs prot&eacute;ines de cycle cellulaire-r&eacute;gulation. Dans cette &eacute;tude, nous avons examin&eacute; les effets de l&#39;inhibition de l&#39;activit&eacute; des kinases cycline-d&eacute;pendantes (cdk) sur la r&eacute;plication virale. Avec la drogue Roscovitine, un inhibiteur sp&eacute;cifique de la kinase cycline-d&eacute;pendante 1, 2, 5, 7 et 9, nous avons montr&eacute; que durant les 6 premi&egrave;res heures de l&#39;infection, &eacute;v&eacute;nements ax&eacute;s sur la kinase cycline-d&eacute;pendante qui comprenait le traitement r&eacute;glement&eacute;e et l&#39;accumulation des relev&eacute;s de notes (IE) UL122-123 pr&eacute;coces imm&eacute;diats et transcriptions UL36-37. Modifi&eacute; le traitement des UL122-123 a conduit &agrave; une perte de 72 IE1 et IE2-86 une augmentation. Le ratio d&#39;&eacute;piss&eacute; &agrave; unspliced UL37 transcriptions a &eacute;galement chang&eacute;es. Ces effets n&#39;exigeaient pas de synth&egrave;se prot&eacute;ique de novo ou de d&eacute;gradation des prot&eacute;ines par le prot&eacute;asome. Ajout de Roscovitine au d&eacute;but de l&#39;infection &eacute;tait &eacute;galement associ&eacute;e &agrave; l&#39;inhibition de l&#39;expression de certains produits de g&egrave;ne pr&eacute;coce virale, r&eacute;plication de l&#39;ADN virale et expression des g&egrave;nes viraux tardive. Lorsque Roscovitine a &eacute;t&eacute; ajout&eacute; apr&egrave;s les 6 premi&egrave;res heures de l&#39;infection, les effets sur l&#39;expression g&eacute;nique IE n&#39;est plus observ&eacute;s et r&eacute;plication virale s&#39;est rendu &agrave; la fin de la phase, mais les titres virus ont &eacute;t&eacute; r&eacute;duits. La r&eacute;duction du titre viral a &eacute;t&eacute; observ&eacute;e m&ecirc;me quand Roscovitine a &eacute;t&eacute; tout d&#39;abord ajout&eacute; 48 h apr&egrave;s l&#39;infection, ce qui indique que l&#39;activit&eacute; de la kinase cycline-d&eacute;pendante est exig&eacute;e &agrave; IE et la fin de l&#39;&eacute;poque. FLAVOPIRIDOL, un autre inhibiteur sp&eacute;cifique de la kinase cycline-d&eacute;pendante, eut des effets similaires sur IE et l&#39;expression des g&egrave;nes pr&eacute;coces. Ces r&eacute;sultats soulignent l&#39;importance de la maturation de l&#39;ARN pr&eacute;cise et r&eacute;affirmer le r&ocirc;le important des facteurs de r&eacute;gulation-cycle cellulaire &agrave; l&#39;infection &agrave; cytom&eacute;galovirus.

Activit&eacute; de la kinase cycline-d&eacute;pendante est requise au d&eacute;but d&#39;un traitement pr&eacute;cis et l&#39;accumulation des transcriptions cytom&eacute;galovirus humain UL122-123 et UL37 pr&eacute;coces imm&eacute;diates et ulterieurement pour la production de virus.

Cyclin-abh&#xE4;ngige Kinase-Aktivit&#xE4;t wird zu einem fr&#xFC;hen Zeitpunkt f&#xFC;r pr&#xE4;zise Verarbeitung und Akkumulation des humanen Cytomegalovirus UL122-123 und UL37 immediate-early-Transkripte und zu sp&#xE4;teren Zeitpunkten f&#xFC;r die Virusproduktion erforderlich.

Infezione da citomegalovirus umano (HCMV) conduce al dysregulation di pi&ugrave; proteine ciclo cellulare-normative. In questo studio, abbiamo esaminato gli effetti di inibizione dell&#39;attivit&agrave; di chinasi ciclina-dipendenti (cdk) sulla replicazione virale. Con la droga Roscovitine, un inibitore specifico di chinasi ciclina-dipendente 1, 2, 5, 7 e 9, abbiamo dimostrato che durante il primo 6 h di infezione, ciclina-dipendente della chinasi-dipendente eventi si sono verificati che comprendeva l&#39;elaborazione regolamentato e accumulo delle trascrizioni (IE) UL122-123-inizio immediate e trascrizioni UL36-37. Alterata elaborazione del UL122-123 ha portato ad una perdita di IE1-72 e un aumento in IE2-86. Il rapporto di impiombato a unspliced UL37 trascrizioni anche cambiate. Questi effetti non richiedono de novo sintesi proteica o la degradazione delle proteine dal proteasoma. Aggiunta di Roscovitine all&#39;inizio dell&#39;infezione era anche associato con l&#39;inibizione dell&#39;espressione di prodotti genici virali selezionati precoce, la replicazione del DNA virale e tarda espressione del gene virale. Quando Roscovitine &egrave; stato aggiunto dopo il primo 6 h di infezione, non sono stati osservati effetti sull&#39;espressione genica di IE e replicazione virale procedette attraverso la fase tarda, ma titoli virali sono stati ridotti. La riduzione del titolo virale &egrave; stata osservata anche quando Roscovitine &egrave; stato prima aggiunto a postinfection di 48 h, che indica che l&#39;attivit&agrave; della chinasi ciclina-dipendente &egrave; necessaria sia a IE e tempi tardi. Flavopiridol, un altro specifico inibitore delle chinasi ciclina-dipendenti, ha avuto effetti simili su IE e precoce espressione genica. Questi risultati sottolineano l&#39;importanza dell&#39;accurata elaborazione di RNA e ribadire il ruolo significativo di fattori ciclo cellulare-normativi nell&#39;infezione da HCMV.

L&#39;attivit&agrave; della chinasi ciclina-dipendente &egrave; necessaria nei primi istanti per l&#39;accurata lavorazione e l&#39;accumulo di citomegalovirus umano UL122-123 e UL37 immediate inizio trascrizioni e in futuro per la produzione di virus.

&#x30D2;&#x30C8;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30AC;&#x30ED; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; (HCMV) &#x306E;&#x611F;&#x67D3;&#x306F;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x4E0D;&#x5168;&#x306B; &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC; (cdk) &#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x304C;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x8907;&#x88FD;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Roscovitine&#x3001;1&#x3001;2&#x3001;5&#x3001;7&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; 9, &#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x85AC;&#x7269;&#x3068;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E; 6 h &#x4E2D;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x4F9D;&#x5B58;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306F;&#x898F;&#x5236;&#x51E6;&#x7406;&#x3068;&#x306E;&#x5373;&#x6642;&#x521D;&#x671F; (IE) UL122-123 &#x5199;&#x3057;&#x3068; UL36 37 &#x8EE2;&#x5199;&#x7523;&#x7269;&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;UL122 123 IE1 72 &#x3068; IE2 86 &#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;&#x306E;&#x51E6;&#x7406;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6BD4;&#x7387;&#x3082;&#x5909;&#x66F4;&#x7523;&#x7269;&#x306E; UL37 &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3; &#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30D7;&#x30C8;&#x306B;&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306E; de novo &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5408;&#x6210;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5206;&#x89E3;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x4E0D;&#x8981;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Roscovitine &#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x306E;&#x958B;&#x59CB;&#x6642;&#x306E;&#x8FFD;&#x52A0;&#x3082;&#x9078;&#x629E;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7523;&#x7269;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;, &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; DNA &#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x3001;&#x5F8C;&#x534A;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;Roscovitine &#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E; 6 &#x6642;&#x9593;&#x5F8C;&#x306B;&#x8FFD;&#x52A0;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x3001;IE &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x5F71;&#x97FF;&#x306F;&#x3082;&#x306F;&#x3084;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x5F8C;&#x534A;&#x306E;&#x6BB5;&#x968E;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x8907;&#x88FD;&#x3092;&#x9032;&#x3093;&#x3060;&#x304C;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x6297;&#x4F53;&#x4FA1;&#x304C;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x529B;&#x4FA1;&#x306E;&#x524A;&#x6E1B;&#x3082; Roscovitine &#x307E;&#x305A;&#x611F;&#x67D3;&#x5F8C; 48 &#x6642;&#x9593;&#x3067;&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x4F5C;&#x696D;&#x304C;&#x3001;IE &#x3068;&#x9045;&#x3044;&#x6642;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3067;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x8FFD;&#x52A0;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Flavopiridol&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x963B;&#x5BB3;&#x7269;&#x8CEA;&#x5225; IE &#x3068;&#x521D;&#x671F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x540C;&#x3058;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A; RNA &#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3057;&#x3066; HCMV &#x611F;&#x67D3;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x6539;&#x3081;&#x3066;&#x8868;&#x660E;&#x3002;

&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x4F5C;&#x696D;&#x306F;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x51E6;&#x7406;&#x3068;&#x30D2;&#x30C8;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30AC;&#x30ED; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E; UL122 123 &#x3068; UL37 &#x306E;&#x5373;&#x6642;&#x521D;&#x671F;&#x6210;&#x7E3E;&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x6642;&#x4EE3;&#x3068;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5F8C;&#x306E;&#x6642;&#x4EE3;&#x3067;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; (HCMV) &#xAC10;&#xC5FC; dysregulation &#xC5EC;&#xB7EC; &#xADDC;&#xC81C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB9AC;&#xB4DC;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; &#xBCF5;&#xC81C;&#xC5D0; &#xF06C; &#xC885;&#xC18D; &#xD0A4; (cdk) &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC800;&#xD574; &#xD6A8;&#xACFC; &#xAC80;&#xC0AC;. Roscovitine, 1, 2, 5, 7 &#xBC0F; 9, &#xF06C; &#xC885;&#xC18D; kinases&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xC57D;&#xBB3C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; 6 h &#xB3D9;&#xC548; &#xF06C; &#xC885;&#xC18D; &#xD0A4; &#xC885;&#xC18D; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xCC98;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xC989;&#xC2DC; &#xCD08;&#xAE30; (IE) UL122-123 &#xB179;&#xCDE8; &#xB85D;&#xACFC; UL36-37 &#xB179;&#xCDE8; &#xB85D;&#xC758; &#xCD95;&#xC801;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. UL122-123 IE1 72 &#xC190;&#xC2E4; IE2 86 &#xC99D;&#xAC00;&#xB97C; &#xC8FC;&#xB3C4; &#xCC98;&#xB9AC; &#xBCC0;&#xACBD;. &#xBE44;&#xC728; &#xB610;&#xD55C; &#xBCC0;&#xACBD; unspliced UL37 &#xC131;&#xC801;&#xD45C;&#xC5D0; &#xBC30;&#xC120;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xD504;&#xB85C;&#xD14C;&#xC544;&#xC880;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB4DC; &#xB178; &#xBCF4;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD569;&#xC131; &#xC774;&#xB098; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC800;&#xD558; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xC2DC;&#xC791; &#xBD80;&#xBD84;&#xC5D0; Roscovitine&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xB610;&#xD55C; &#xC120;&#xD0DD; &#xB41C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xCD08;&#xAE30; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC81C;&#xD488;, &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; DNA &#xBCF5;&#xC81C;&#xC640; &#xB2A6;&#xAC8C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xC800;&#xD574;&#xC640; &#xAD00;&#xB828;. &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; 6 h &#xD6C4; Roscovitine&#xAC00; &#xCD94;&#xAC00; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; IE &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC5D0; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5; &#xC774;&#xC0C1; &#xAD00;&#xCC30; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xBCF5;&#xC81C; &#xD6C4;&#xBC18; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC9C4;&#xD589; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; titers &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131;&#xAC00; &#xAC10;&#xC18C;&#xB3C4; &#xB54C; Roscovitine &#xCC98;&#xC74C;&#xC5D0; &#xCD94;&#xAC00; &#xB41C; 48 h &#xBC14;&#xB78C;&#xC9C1;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xF06C; &#xC885;&#xC18D; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9; IE&#xC640; &#xB2A6;&#xC740; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. Flavopiridol, &#xF06C; &#xC885;&#xC18D; kinases&#xC758; &#xB610; &#xB2E4;&#xB978; &#xD2B9;&#xC815; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; IE&#xC640; &#xCD08;&#xAE30; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC815;&#xD655;&#xD55C; RNA &#xCC98;&#xB9AC;&#xC758; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xAC15;&#xC870; &#xD558; &#xACE0; HCMV &#xAC10;&#xC5FC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xADDC;&#xC81C; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xB418;&#xD480;&#xC774;.

&#xF06C; &#xC885;&#xC18D; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC774; &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xCC98;&#xB9AC; &#xD558; &#xACE0; &#xC778;&#xAC04; &#xC138;&#xD3EC; UL122-123&#xACFC; UL37 &#xC989;&#xC2DC; &#xCD08;&#xAE30; &#xC131;&#xC801;&#xD45C;&#xC758; &#xCD95;&#xC801;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC774;&#xB978; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0;&#xC640; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xCD5C;&#xC2E0; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La infecci&oacute;n humana del citomegalovirus (HCMV) conduce al dysregulation de m&uacute;ltiples prote&iacute;nas reguladoras ciclo celular. En este estudio, se examinaron los efectos de la inhibici&oacute;n de la actividad de la quinasa dependiente de ciclina (cdk) en la replicaci&oacute;n viral. Con la droga Roscovitine, un inhibidor espec&iacute;fico de Quinasas Ciclina-Dependientes 1, 2, 5, 7 y 9, hemos demostrado que durante las primeras 6 h de la infecci&oacute;n, ocurrieron eventos de quinasa dependiente de ciclina-dependientes que inclu&iacute;a el proceso regulado y acumulaci&oacute;n de las transcripciones de inmediatas y principios (IE) UL122-123 y transcripciones de UL36-37. Alterado el proceso de UL122-123 conducido a una p&eacute;rdida de IE1-72 y un aumento en IE2-86. La relaci&oacute;n de empalma a transcripciones de UL37 unspliced tambi&eacute;n cambiadas. Estos efectos no exigen la s&iacute;ntesis de prote&iacute;nas de novo o degradaci&oacute;n de las prote&iacute;nas por el proteasoma. Adem&aacute;s de Roscovitine al principio de la infecci&oacute;n tambi&eacute;n se asoci&oacute; con la inhibici&oacute;n de la expresi&oacute;n de seleccionados productos del gen viral temprana, replicaci&oacute;n de ADN viral y &uacute;ltima expresi&oacute;n del gen viral. Cuando Roscovitine fue agregado despu&eacute;s de las primeras 6 h de la infecci&oacute;n, no se observaron los efectos sobre la expresi&oacute;n g&eacute;nica de IE y replicaci&oacute;n viral procedi&oacute; a trav&eacute;s de la &uacute;ltima fase, pero t&iacute;tulos virales se redujeron. La reducci&oacute;n en el t&iacute;tulo viral se observ&oacute; incluso cuando Roscovitine fue primero agregado en postinfection de 48 h, indicando que la actividad de la quinasa dependiente de ciclina se requiere en IE y &uacute;ltimas &eacute;pocas. Flavopiridol, otro inhibidor espec&iacute;fico de Quinasas Ciclina-Dependientes, tuvieron efectos similares en IE y temprana expresi&oacute;n g&eacute;nica. Estos resultados subrayan la importancia del proceso exacto de RNA y reiteran la importancia de factores ciclo celular-reguladores en infecci&oacute;n HCMV.

Actividad de la quinasa dependiente de ciclina se requiere en &eacute;pocas tempranas para proceso exacto y acumulaci&oacute;n de las transcripciones del citomegalovirus humano UL122-123 y UL37 inmediatas y principios y en tiempos posteriores para la producci&oacute;n del virus.

&#x57C3;&#x535A;&#x62C9;&#x75C5;&#x6BD2; &#xFF08;EBOV&#xFF09; &#x53D1;&#x75C5;&#x673A;&#x5236;&#x90FD;&#x53EA;&#x662F;&#x90E8;&#x5206;&#x4E86;&#x89E3;&#xFF0C;&#x4F46;&#x6B63;&#x5E38;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94; &#xFF08;&#x5305;&#x62EC;&#x6740;&#x4F24;&#x6027;&#x7684;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x589E;&#x52A0;&#x5FAA;&#x73AF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x6C34;&#x5E73;&#x53CA;&#x51DD;&#x8840;&#x529F;&#x80FD;&#x5F02;&#x5E38;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#xFF09; &#x5931;&#x8C03;&#x601D;&#x60F3;&#x65B9;&#x9762;&#x53D1;&#x6325;&#x4E3B;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x8D8A;&#x6765;&#x8D8A;&#x591A;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x5F88;&#x591A;&#x89C2;&#x5BDF;&#x75C5;&#x7406;&#x4E0D;&#x662F;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6240;&#x81F4;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x6027;&#x635F;&#x4F24;&#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;&#x800C;&#x662F;&#x7531;&#x4E8E;&#x4ECE; EBOV &#x611F;&#x67D3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x91CA;&#x653E;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x514D;&#x75AB;&#x8C03;&#x89E3;&#x5458;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#x8981;&#x4E86;&#x89E3;&#x5982;&#x4F55;&#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x5019;&#x9009;&#x4EBA;&#x53EF;&#x80FD;&#x963B;&#x65AD;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x6216;&#x9488;&#x5BF9;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x6807;&#x8BC6;&#x662F;&#x4FDD;&#x62A4;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7B7E;&#x540D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x4E8E; DNA &#x82AF;&#x7247;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6BD4;&#x8F83; EBOV &#x611F;&#x67D3;&#x975E;&#x4EBA;&#x7075;&#x957F;&#x7C7B;&#x52A8;&#x7269; (NHPs) &#x56DE;&#x5E94;&#x5019;&#x9009;&#x836F;&#x7269;&#x6CBB;&#x7597;&#x5B66;&#x7684;&#x4E3B;&#x673A;&#x5168;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6CE8;&#x610F;&#x5230;&#x867D;&#x7136;&#x6574;&#x4F53;&#x5FAA;&#x73AF;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#x548C;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x51DD;&#x8840;&#x6291;&#x5236;&#x7269;&#x76F8;&#x4F3C;&#xFF0C;&#x5C1A;&#x5B58; NHPs &#x805A;&#x96C6;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#x3002;&#x51DD;&#x8840;&#x529F;&#x80FD;&#x76F8;&#x5173;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x660E;&#x663E;&#x5DEE;&#x5F02;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x4E0E;&#x751F;&#x5B58;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x662F;&#x63ED;&#x793A;&#x7684;&#x660E;&#x663E;&#x5DEE;&#x5F02;&#x8868;&#x8FBE;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x8D8B;&#x5316;&#x56E0;&#x5B50;&#x914D;&#x4F53; 8 &#xFF08;CCL8/MCP-2&#xFF09;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4E3A;&#x65E9;&#x671F;&#x8BCA;&#x65AD;&#x6216;&#x672A;&#x6765;&#x6CBB;&#x7597;&#x5B66;&#x63D0;&#x4F9B;&#x53EF;&#x80FD;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x5B50;&#x96C6;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5206;&#x6790;&#x5C06;&#x5E2E;&#x52A9;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x7406;&#x89E3; EBOV &#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x53D1;&#x75C5;&#x673A;&#x5236;&#x548C;&#x786E;&#x5B9A;&#x6539;&#x8FDB;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x7B56;&#x7565;&#x3002;

&#x57C3;&#x535A;&#x62C9;&#x51FA;&#x8840;&#x70ED;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#xFF1A; &#x5168;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x8F6C;&#x5F55;&#x5206;&#x6790;&#x6210;&#x529F;&#x75BE;&#x75C5;&#x7F13;&#x89E3;&#x3002;

The mechanisms of Ebola (EBOV) pathogenesis are only partially understood, but the dysregulation of normal host immune responses (including destruction of lymphocytes, increases in circulating cytokine levels, and development of coagulation abnormalities) is thought to play a major role. Accumulating evidence suggests that much of the observed pathology is not the direct result of virus-induced structural damage but rather is due to the release of soluble immune mediators from EBOV-infected cells. It is therefore essential to understand how the candidate therapeutic may be interrupting the disease process and/or targeting the infectious agent. To identify genetic signatures that are correlates of protection, we used a DNA microarray-based approach to compare the host genome-wide responses of EBOV-infected nonhuman primates (NHPs) responding to candidate therapeutics. We observed that, although the overall circulating immune response was similar in the presence and absence of coagulation inhibitors, surviving NHPs clustered together. Noticeable differences in coagulation-associated genes appeared to correlate with survival, which revealed a subset of distinctly differentially expressed genes, including chemokine ligand 8 (CCL8/MCP-2), that may provide possible targets for early-stage diagnostics or future therapeutics. These analyses will assist us in understanding the pathogenic mechanisms of EBOV infection and in identifying improved therapeutic strategies.

Therapeutics of Ebola hemorrhagic fever: whole-genome transcriptional analysis of successful disease mitigation.

Les m&#xE9;canismes d&#x26;#39;Ebola (EBOV) pathogen&#xE8;se ne sont que partiellement compris, mais le d&#xE9;r&#xE8;glement des r&#xE9;ponses normales de l&#x26;#39;h&#xF4;te immunitaire (y compris la destruction des lymphocytes, des augmentations de taux circulants de cytokines, et le d&#xE9;veloppement de troubles de la coagulation) est pens&#xE9; pour jouer un r&#xF4;le majeur. L&#x26;#39;accumulation des donn&#xE9;es sugg&#xE8;re qu&#x26;#39;une grande partie de la pathologie observ&#xE9;e n&#x26;#39;est pas le r&#xE9;sultat direct du virus induite par les dommages structurels, mais est plut&#xF4;t due &#xE0; la lib&#xE9;ration de m&#xE9;diateurs immunitaires solubles de EBOV les cellules infect&#xE9;es. Il est donc essentiel de comprendre comment le candidat peut &#xEA;tre th&#xE9;rapeutique interrompre le processus de la maladie et / ou le ciblage de l&#x26;#39;agent infectieux. Pour identifier les signatures g&#xE9;n&#xE9;tiques qui sont les corr&#xE9;lats de protection, nous avons utilis&#xE9; un micror&#xE9;seau d&#x26;#39;ADN approche pour comparer les h&#xF4;tes du g&#xE9;nome entier de r&#xE9;ponses EBOV infect&#xE9;s par les primates non humains (PNH) ont r&#xE9;pondu &#xE0; la th&#xE9;rapeutique candidats. Nous avons observ&#xE9; que, bien que la r&#xE9;ponse globale immuns circulants a &#xE9;t&#xE9; similaire dans la pr&#xE9;sence et l&#x26;#39;absence d&#x26;#39;inhibiteurs de la coagulation, les PSN survivants regroup&#xE9;s. Des diff&#xE9;rences notables dans la coagulation des g&#xE8;nes associ&#xE9;s semblait corr&#xE9;l&#xE9;e &#xE0; la survie, qui a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; un sous-ensemble de g&#xE8;nes diff&#xE9;rentiellement exprim&#xE9;s distinctement, dont 8 ligand des chimiokines (CCL8/MCP-2), qui peuvent fournir des cibles possibles pour le diagnostic &#xE0; un stade pr&#xE9;coce ou th&#xE9;rapeutiques futures. Ces analyses nous aideront &#xE0; comprendre les m&#xE9;canismes pathog&#xE8;nes de l&#x26;#39;infection EBOV et &#xE0; identifier les meilleures strat&#xE9;gies th&#xE9;rapeutiques.

Therapeutics de fi&#xE8;vre h&#xE9;morragique Ebola: g&#xE9;nome entier Analyse transcriptionnelle de l&#x26;#39;att&#xE9;nuation des maladies r&#xE9;ussie

Die Mechanismen der Pathogenese Ebola (EBOV) werden nur teilweise verstanden, aber die Dysregulation normalen Host-Immunantworten (einschlie&szlig;lich Zerst&ouml;rung von Lymphozyten, erh&ouml;ht in zirkulierenden Zytokin Ebenen und die Entwicklung von Koagulation Anomalien) wird angenommen, dass eine wichtige Rolle spielen. Sammeln Beweise legt nahe, dass ein Gro&szlig;teil der beobachteten Pathologie nicht das direkte Ergebnis der Virus-induzierten strukturellen Sch&auml;den ist, sondern durch die Freisetzung von l&ouml;slichen immun Mediatoren aus EBOV-infizierten Zellen ist. Es ist daher wichtig zu verstehen, wie der Kandidat therapeutische unterbrechen den Krankheitsprozess und/oder Platzierung Erreger werden kann. Um genetische Signaturen zu identifizieren, die Schutz korreliert sind, haben wir einen DNA Microarray-Ansatz die Host genomweiten Antworten von EBOV-infizierten nichtmenschlichen Primaten (NHPs) reagieren auf Kandidaten-Therapeutika vergleichen verwendet. Wir beobachteten, dass, obwohl die gesamte zirkulierende Immunantwort in der Anwesenheit und Abwesenheit von Inhibitoren der Gerinnung &auml;hnlich war, &Uuml;berleben NHPs zusammen gruppiert. Deutliche Unterschiede in der Gerinnung-assoziierten Gene Schienen korrelieren mit &uuml;berleben, die offenbart eine Teilmenge der deutlich differentiell exprimierten Genen, einschlie&szlig;lich Chemokine Ligand 8 (CCL8/MCP-2), die m&ouml;gliche Ziele f&uuml;r fr&uuml;he Diagnose oder zuk&uuml;nftige Therapeutika liefern k&ouml;nnen. Diese Analysen helfen uns im Verst&auml;ndnis der pathogenen Mechanismen der EBOV Infektion und verbesserte therapeutische Strategien zu identifizieren.

Therapeutika Ebola h&auml;morrhagisches Fieber: ganz-transkriptionelle Genomanalyse erfolgreiche Krankheit zur Risikominimierung.

I meccanismi della patogenesi Ebola (EBOV) sono solo parzialmente comprensibili, ma la disregolazione della risposta immunitaria ospite normale (comprese distruzione dei linfociti, aumenta a livelli di citochine e di sviluppo di anomalie della coagulazione in circolazione) &egrave; pensato per giocare un ruolo importante. Accumulando prove suggerisce che gran parte della patologia osservata non &egrave; la diretta conseguenza di danni strutturali indotta dal virus ma piuttosto a causa del rilascio di mediatori immuni solubili da EBOV-cellule infette. &Egrave; pertanto essenziale per capire come il candidato terapeutico possa essere interrompendo il processo di malattia o l&#39;agente infettivo di targeting. Per identificare le firme genetiche che sono correlati di protezione, abbiamo utilizzato un approccio basato su microarray del DNA per confrontare le risposte genome-wide host di infezione di EBOV primati (NHPs) risponde a terapie candidato. Abbiamo osservato che, sebbene la risposta immunitaria circolo globale era simile in presenza e in assenza di inibitori della coagulazione, sopravvivendo NHPs raggruppati insieme. Differenze notevoli in geni associati a coagulazione apparvero per correlare con la sopravvivenza, che ha rivelato un sottoinsieme dei geni distintamente differenzialmente espressi, tra cui chemochina ligando 8 (CCL8/MCP-2), che pu&ograve; prevedere possibili obiettivi di fase diagnostica o terapeutica futura. Queste analisi ci aiuter&agrave; a comprendere i meccanismi patogenetici dell&#39;infezione di EBOV e nell&#39;individuazione di strategie terapeutiche migliori.

Terapeutica della febbre emorragica Ebola: whole-genome analisi trascrizionale di mitigazione malattia successo.

&#x30A8;&#x30DC;&#x30E9;&#xFF08;EBOV&#xFF09;&#x767A;&#x75C7;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x3057;&#x304B;&#x7406;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x6B63;&#x5E38;&#x306A;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#xFF08;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x306E;&#x7834;&#x58CA;&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x5FAA;&#x74B0;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3001;&#x51DD;&#x56FA;&#x7570;&#x5E38;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#xFF09;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x4E0D;&#x5168;&#x306F;&#x3001;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x89B3;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x75C5;&#x7406;&#x5B66;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306F;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x8A98;&#x767A;&#x6027;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x640D;&#x50B7;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x7D50;&#x679C;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x3080;&#x3057;&#x308D;EBOV&#x611F;&#x67D3;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x514D;&#x75AB;&#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A8;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x653E;&#x51FA;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x5019;&#x88DC;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306F;&#x3001;&#x75C5;&#x6C17;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x4E2D;&#x65AD;&#x3057;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;/&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x611F;&#x67D3;&#x6027;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x3092;&#x6A19;&#x7684;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x4FDD;&#x8B77;&#x306E;&#x76F8;&#x95A2;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x306E;&#x7F72;&#x540D;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x5019;&#x88DC;&#x6CBB;&#x7642;&#x85AC;&#x3078;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;EBOV&#x611F;&#x67D3;&#x30D2;&#x30C8;&#x4EE5;&#x5916;&#x306E;&#x970A;&#x9577;&#x985E;&#x306E;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x30EF;&#x30A4;&#x30C9;&#x306A;&#x30EC;&#x30B9;&#x30DD;&#x30F3;&#x30B9;&#xFF08;NHPs&#xFF09;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;DNA&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;NHPs&#x3092;&#x5B58;&#x7D9A;&#x3001;&#x5168;&#x4F53;&#x7684;&#x306A;&#x5FAA;&#x74B0;&#x3059;&#x308B;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306F;&#x3001;&#x8840;&#x6DB2;&#x51DD;&#x56FA;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x975E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x540C;&#x69D8;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x51DD;&#x56FA;&#x95A2;&#x9023;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x9855;&#x8457;&#x306A;&#x9055;&#x3044;&#x306F;&#x3001;&#x65E9;&#x671F;&#x8A3A;&#x65AD;&#x3084;&#x5C06;&#x6765;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x85AC;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x30B1;&#x30E2;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;8&#xFF08;CCL8/MCP-2&#xFF09;&#x306A;&#x3069;&#x3001;&#x306F;&#x3063;&#x304D;&#x308A;&#x3068;&#x5DEE;&#x6B21;&#x7684;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x751F;&#x5B58;&#x3068;&#x76F8;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x767B;&#x5834;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;EBOV&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6539;&#x826F;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6CBB;&#x7642;&#x6226;&#x7565;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x79C1;&#x9054;&#x3092;&#x652F;&#x63F4;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6210;&#x529F;&#x3057;&#x305F;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x7DE9;&#x548C;&#x306E;&#x5168;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x8EE2;&#x5199;&#x89E3;&#x6790;&#xFF1A;&#x30A8;&#x200B;&#x200B;&#x30DC;&#x30E9;&#x51FA;&#x8840;&#x71B1;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x6CD5;

&#xC5D0;&#xBCFC;&#xB77C; (EBOV) pathogenesis&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC740; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801; &#xC73C;&#xB85C;&#xB9CC; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC77C;&#xBC18; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751; (&#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xD30C;&#xAD34; cytokine &#xB808;&#xBCA8;&#xACFC; &#xC751;&#xACE0; &#xC774;&#xC0C1;&#xC774; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC21C;&#xD658; &#xC99D;&#xAC00;) dysregulation&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC0DD;&#xAC01; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAD00;&#xCE21;&#xB41C; &#xBCD1;&#xC758; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC740; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;-&#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xC190;&#xC0C1;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xACB0;&#xACFC; &#xC544;&#xB2C8;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC624;&#xD788;&#xB824; EBOV&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC131; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC911;&#xC7AC;&#xC790;&#xC758; &#xCD9C;&#xC2DC; &#xC608;&#xC815; &#xC774;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xCD95;&#xC801; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xBBC0;&#xB85C; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD6C4;&#xBCF4; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xACFC;&#xC815;&#xC744; &#xBC29;&#xD574; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC0F; &#xC804;&#xC5FC; &#xC131; &#xC694;&#xC6D0;&#xC744; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xD574;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4;. &#xBCF4;&#xD638;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD00; &#xC788;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC11C;&#xBA85;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; EBOV&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; nonhuman &#xC601;&#xC7A5;&#xB958;&#xC758; (NHPs) &#xD6C4;&#xBCF4; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD559;&#xC5D0; &#xC751;&#xB2F5; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xAC8C;&#xB188; &#xC804;&#xCCB4; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xBE44;&#xAD50; &#xD558; DNA microarray&#xB97C; &#xAE30;&#xBC18; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xC21C;&#xD658; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751;&#xC774; &#xC874;&#xC7AC;&#xC640; &#xC751;&#xACE0; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xC720;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;, &#xBE44;&#xB85D; &#xD568;&#xAED8; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; NHPs &#xC0B4;&#xC544;&#xB0A8;&#xB294;, &#xAD00;&#xCC30; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC751;&#xACE0; &#xAD00;&#xB828; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xB208;&#xC5D0; &#xB744;&#xB294; &#xCC28;&#xC774; chemokine &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; 8 (2-CCL8/MCP) &#xCD08;&#xAE30; &#xB2E8;&#xACC4; &#xC9C4;&#xB2E8; &#xB610;&#xB294; &#xBBF8;&#xB798;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD559;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xBA85;&#xBC31; &#xD558; &#xAC8C; &#xCC28;&#xB3D9; &#xD45C;&#xD604;&#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC77C;&#xBD80;&#xB97C; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD558;&#xB294; &#xC0DD;&#xC874;&#xC744; &#xC5F0;&#xAD00; &#xC2DC;&#xD0AC; &#xB4F1;&#xC7A5;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBD84;&#xC11D;&#xC740; &#xC6B0;&#xB9AC; EBOV &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC774;&#xD574; &#xD558; &#xACE0; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC804;&#xB7B5;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC774; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC5D0;&#xBCFC;&#xB77C; &#xCD9C;&#xD608; &#xC5F4; &#xBCD1;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD559;: &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC778; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xC644;&#xD654;&#xC758; &#xC804;&#xCCB4; &#xAC8C;&#xB188; transcriptional &#xBD84;&#xC11D;.

Los mecanismos de &#xC9;bola (EBOV) patogenia se entiende s&#xF3;lo parcialmente, pero la desregulaci&#xF3;n de las respuestas normales del hu&#xE9;sped inmune (incluyendo la destrucci&#xF3;n de los linfocitos, los aumentos en los niveles circulantes de citocinas, y el desarrollo de alteraciones de la coagulaci&#xF3;n) se cree que juega un papel importante. La evidencia acumulada sugiere que gran parte de la patolog&#xED;a que no es el resultado directo de la inducida por el virus da&#xF1;o estructural, sino m&#xE1;s bien se debe a la liberaci&#xF3;n de mediadores solubles del sistema inmune de las c&#xE9;lulas infectadas por EBOV. Por tanto, es esencial para entender c&#xF3;mo la terap&#xE9;utica candidato puede ser interrumpir el proceso de la enfermedad y / o la orientaci&#xF3;n del agente infeccioso. Para identificar firmas gen&#xE9;ticas que son factores de protecci&#xF3;n, se utiliz&#xF3; un microarray de ADN enfoque basado en comparar los anfitriones en todo el genoma de las respuestas EBOV infectados por los primates no humanos (NHP) en respuesta a la terap&#xE9;utica candidatos. Hemos observado que, aunque la respuesta global de circulante inmune fue similar en presencia y en ausencia de inhibidores de la coagulaci&#xF3;n, NHPs supervivientes agrupados juntos. Diferencias notables en los genes asociados a la coagulaci&#xF3;n-parece que se correlacionan con la supervivencia, el cual revel&#xF3; un subconjunto de genes expresados &#x200B;&#x200B;diferencialmente claramente, como ligando de quimioquinas 8 (CCL8/MCP-2), que puede proporcionar posibles objetivos para las primeras etapas de diagn&#xF3;stico o terap&#xE9;uticas futuras. Estos an&#xE1;lisis nos ayudar&#xE1; a comprender los mecanismos patog&#xE9;nicos de la infecci&#xF3;n EBOV y en la identificaci&#xF3;n de mejores estrategias terap&#xE9;uticas.

Terap&#xE9;utica de la fiebre hemorr&#xE1;gica del &#xC9;bola: Todo el an&#xE1;lisis del genoma de la transcripci&#xF3;n de la mitigaci&#xF3;n de la enfermedad con &#xE9;xito

Judy Yen

Whitehead Institute for Biomedical Research

MIT - Massachusetts Institute of Technology

Vaccinia Virus Infection & Temporal Analysis of Virus Gene Expression: Part 1

Vaccinia Virus Infection & Temporal Analysis of Virus Gene Expression: Part 2

Vaccinia Virus Infection & Temporal Analysis of Virus Gene Expression: Part 3