A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Method Article
هذا هو أسلوب لتوليد اجنة gynogenetic الزرد مضاعفا (الأجنة التي الوراثية فقط المساهمة يأتي من الأم) من خلال منع الانتصافي الدرجة الثانية مباشرة بعد التسميد مع الحيوانات المنوية للضوء فوق البنفسجي المعطل. EP الأجنة ليست متماثلة اللواقح تماما بسبب إعادة التركيب خلال تقسيم الانتصافي الأولى ، ومع ذلك فهي متماثل في جميع مواضع التي لم يتم فصلها عن السنترومير من خلال إعادة التركيب.
تغاير الزيجوت في حقيقيات النوى مضاعفا كثيرا ما يجعل الدراسات الجينية مرهقة. الأساليب التي تنتج ذرية صالحة ضعفاني متماثل مباشرة من الإناث متخالف يسمح فحص الإناث mutagenized F1 مباشرة عن الطفرات الضارة في الشاشة تسارع الوراثية إلى الأمام. Streisinger وآخرون.
نظرة عامة على الضغط المبكر
ملاحظة : وصفات للعديد من الكواشف المستخدمة في هذا البروتوكول مثل tricaine ، أسماك المياه المالحة ، وهانكس على شبكة الإنترنت في الفصل 10 من كتاب اسماك الزرد 3 ( http://zfin.org/zf_info/zfbook/zfbk.html )
إجراءات تفصيلية الضغط المبكر
ملاحظة : الاسطوانة سوف يعقد ما يصل الى 3 قوارير في وقت واحد ، لذا قد تحتاج إلى تأخير تلقيح البيض بضع دقائق لمعرفة ما إذا كان بالفعل الأخريات في tricaine إعطاء البيض. وهذا سيساعد على تسريع الأمور أكثر من خلال معالجة دفعات في وقت واحد. أيضا ، تذكر مرة واحدة يتم استخدام الصحافة لا تضع أي المزيد من السمك في tricaine حتى يتم الانتهاء من العلاج. السماح الأسماك على البقاء في التخدير وقتا طويلا ويمكن قتلهم. ثانيا ، إذا كنت ضغط الأسماك في حين يتم استخدام الصحافة ، والحصول على البيض ، فإنها قد تكون جافة جدا لتكون مجدية في الوقت الذي يمكن استخدامه للصحافة مرة أخرى.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
فمن المهم للتأكد من أن الأجنة التي تنتجها هذه الطريقة هي diploids gynogenetic صحيحا. والضوابط ، وتوليد مخلب مضاعفا من البيض العادي (عن طريق الحفاظ على ادخار بعض الحيوانات المنوية دون تعطيل الأشعة فوق البنفسجية) ومجموعة من الأجنة فرداني (عن طريق الحفاظ على مخلب جانبا من البويضا...
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
تم تطوير أساليب التخصيب في المختبر وdiploids gynogenetic لالزرد ووكر Charline في مختبر جورج Streisinger في جامعة اوريجون في 1970s و 1980s. الطريقة الموضحة هنا هي من دون تغيير بروتوكولات Charline والتي تتوفر في كتاب الكامل في اسماك الزرد 3.
تم تطوير أساليب التخصيب في المختبر وdiploids gynogenetic لالزرد ووكر Charline في مختبر جورج Streisinger في جامعة اوريجون في 1970s و 1980s. الطريقة الموضحة هنا هي من دون تغيير بروتوكولات Charline والتي تتوفر في كتاب الكامل في اسماك الزرد 3.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Tricaine | Sigma-Aldrich | ||
Watch glass | |||
French Press | |||
Pressure cylinder | |||
Instant ocean | |||
Pasteur pipettes | Cut off the narrow end, fire polish | ||
UV cross-linker | |||
microcapillaries |
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved