الأداء ومعالجة FNA من الدهون الأمامية لوحة اميلويد

Summary

الدهون تطلع سادة هو المفضل ، نهج التكلفة مينيملي ، ومنخفضة بالمقارنة مع الطرق الأخرى للكشف عن اميلويد لتشخيص الداء النشواني النظامية. هذه المقالة الفيديو يوضح الخطوط العريضة لتنفيذ الإجرائية الدهون تطلع سادة مع معالجة مناسبة من العينة لنتائج التشخيص الأمثل.

Abstract

تاريخيا ، تم تنفيذها القلب ، الكبد ، والكلى لإثبات الخزعات الودائع اميلويد في الداء النشواني. منذ السريرية لهذا المرض هو متغير جدا وغير محددة ، والمخاطر المرتبطة بها من هذه الخزعات هي كبيرة جدا بالنسبة للمحصول التشخيص. المواقع الأخرى التي لديها مخاطر أقل خزعة ، مثل الجلد أو اللثة ، هي أيضا الغازية نسبيا وباهظة الثمن. بالإضافة إلى ذلك ، قد تكون هذه الخزعات لا نملك دائما الودائع اميلويد كافية لإثبات التشخيص. وقد أثبتت الدهون تطلع منصة علاقة سريرية جيدة مع انخفاض التكلفة والحد الأدنى من الاعتلال. ومع ذلك ، لا توجد بروتوكولات موحدة لتنفيذ هذا الإجراء أو يستنشق تجهيز العينة ، الأمر الذي يؤدي إلى نتائج وnonreproducible متغير. الطريقة الأكثر استخداما للكشف عن اميلويد في الأنسجة هو الانكسار التفاح الأخضر على أبواب الحمراء الكونغو الملون باستخدام المجهر الاستقطاب. هذا الأسلوب يتطلب إعداد الخلية كتلة من المواد يستنشق. للأسف ، المرضى الذين يلتمسون العلاج في مرحلة مبكرة من الداء النشواني وكميات ضئيلة من الأميلويد مما يقلل كثيرا من حساسية الكونغو الحمراء الملطخة المقاطع كتلة خلية aspirates منصة الدهون. لذا ، ينبغي استغلال التقييم التركيبية لوحة aspirates الدهون عن طريق المجهر الإلكتروني ، نظرا لحساسيتها للكشف عن زيادة اميلويد. هذه المقالة يوضح إجراءات بسيطة وقابلة للتكرار لأداء اللوحة الأمامية تطلع الدهون للكشف عن اميلويد باستخدام كلا تلوين أحمر الكونغو أبواب الزنزانات والمجهر الإلكتروني لتحديد التركيبية.

Protocol

مقدمة

الداء النشواني الجهازية هي مرض شديدة التباين الذي يشير إلى ترسب خارج الخلية من البروتينات المختلفة التي يشار إليها باسم اميلويد. ترسب هذه الألياف اميلويد بيتا مع تكوين ثنيات يؤدي إلى العروض سريرية مختلفة اعتمادا على الأجهزة المعنية. يشار إلى أن أكثر مظاهر ذات الصلة سريريا الداء النشواني النظامية عندما يكون هناك تورط الأجهزة الحيوية مثل القلب ، الكبد ، و / أو الكلى. تاريخيا ، سوف تحتاج فحص هذه الأجهزة المعنية لإثبات وجود أميلويد. نفذت هذه الإجراءات الغازية باعتدال على مخاطر كبيرة بما في ذلك النزف. ومنذ ذلك الحين الدهون تطلع لوحة معروضة لتوفير وسيلة موثوقة وموسع للكشف عن الداء النشواني اميلويد في المنهجية ^1. هذا الإجراء غير قابلة للمقارنة أساسا لشفط الدهون من الدهون تحت الجلد في جدار البطن الأمامي تحت تخدير موضعي لاسترداد نسيج ليفي شحمي لتقييم الودائع اميلويد شحيحة في جدران الأوعية الدموية الصغيرة ^2.

الأسلوب الأكثر استخداما لتحديد اميلويد في الأنسجة ما زال سمة نمط الانكسار التفاح الأخضر عندما ينظر الكونغو أقسام حمراء ملطخة هي تصور تحت المجهر الضوء المستقطب ^3. عندما يتم تنفيذ الدهون تطلع لوحة ، يمكن القيام بقع حمراء على الكونغو الشرائح طخت إما مباشرة أو الاستعدادات كتلة خلية من خلايا الأنسجة الدهنية يستنشق. ومع ذلك ، والمرضى في المراحل المبكرة من الداء النشواني والودائع اميلويد ضئيلة ، مما يقلل كثيرا من حساسية الكونغو الحمراء الملطخة المقاطع كتلة الخلية ^4،5. تقييم التركيبية من الدهون عن طريق لوحة aspirates المجهر الإلكتروني وأفضل استنساخ وتحسين الحساسية ^4. ولذلك ، فمن المستحسن أن يقدم كل aspirates منصة الدهون لإعداد كلا من كتلة الخلية لأداء والمجهر الإلكتروني ^2.

الدهون تطلع سادة هو التكلفة المنخفضة نسبيا وطريقة موسع من أجل الحصول على الأنسجة لتشخيص الداء النشواني النظامية. توضح هذه المقالة إجراء الشفط الدهون سادة جنبا إلى جنب مع تفاصيل حول تجهيز العينة لتقديم نموذج لكلا تلوين أحمر الكونغو والتقييم التركيبية بواسطة المجهر الإلكتروني. في هذا الفيديو ، ونظهر هذا الإجراء استنساخه وبسيطة لاسترداد مواد التشخيص الأمثل.

1. أداء FNA من الدهون لوحة الأمامية

ألف التخدير للمنطقة المحلية (الشكل 1 و 2)

1. باستخدام مسحات الكحول أو عامل تنظيف البشرة التي تفضلها مؤسسة معينة ، وتنظيف الجلد في المنطقة السفلى من البطن رباعي الوحشي على خط الوسط وتحت السرة (الشكل 1).
2. العلامة منطقة المعينية الشكل حوالي 2 بوصة × 2 كما هو مبين في الشكل 1 مع قلم الوسم.
3. نضح ما يقرب من 10 مل من 1 ٪ ليدوكائين بإبرة 18G. إرفاق 25G 1 ½ بوصة إلى إبرة المحقنة. إزالة أي الهواء المحبوس من خلال الاستفادة من حقنة تستقيم أثناء الضغط على المكبس حتى يتم الاستغناء عن أي وسائل فقاعات الهواء موجودة.
4. تخدير على طول حدود المنطقة المعينية التي شهدت بالفعل كما هو مبين في الشكل 2. تبدأ بإدخال إبرة 25G فقط تحت الجلد في النقطة (أ) ، ودفع بعناية الإبرة تحت الجلد إلى نقطة عاشرا تنسحب على المكبس حقنة لضمان ان كنت لا داخل السفينة. ثم دفع ببطء الغطاس التسلل الى ما يصل الى 2.5 مل من الليدوكائين (حوالي ربع من يدوكائين في محقنة 10 مل) ، في حين سحب الإبرة إلى النقطة (أ) من دون السماح الإبرة يخرج من الجلد عند النقطة (أ) (الشكل 2a3). مع الإبرة لا تزال تحت الجلد تغيير الاتجاه نحو النقطة Y (الشكل 2a4) ، ودفع الإبرة تحت الجلد إلى النقطة Y (الشكل 2b1). كما كان من قبل ، تأكد من أن الإبرة ليست في وعاء والاستغناء عن ما يقرب من 2.5 مل من الليدوكائين ببطء بينما سحب الإبرة من خلال النقطة (أ) (الشكل من خلال 2b3 2b4) كرر خطوات مماثلة بدءا من النقطة (ب) وصرفها من تحت الجلد يدوكائين B يشير إلى وباء لX Y (من خلال الشكل 2c1 2d4). منع النزف من عذاب ألف وباء بحلول التطبيق الحازم لقياس قطعة معقمة.
5. يمكنك الآن أن تحقق المنطقة تخدير عن طريق لمس برفق الجلد داخل المعيني تخدير بواسطة غيض / زاوية قطعة الشاش والقطن ، وبمقارنة مع الجلد unanesthetized المجاورة.

باء المسرحية الدهون تطلع لوحة (الشكل 3)

(قد تطبيق تخدير موضعي قبل أداء تطلع منصة الدهون يمكن تجاوزه ، اعتمادا على الأفضليات الإقليمية والفردية ، ويمكن استكمال إجراءات FNAB يؤديها بشكل صحيح لتطلع الأمامي وسادة من الدهون في واحد وخز ، ولكن اعتمادا على عتبة الألم من المريض والمناورة من الإبرة 18G ذهابا وإيابا إلى الأنسجة تحت الجلد والدهون نسبيا distresالغناء. وصف أسلوب التخدير هنا يحقق التأثير في عذاب مع اثنين فقط ويحول دون الإصابة 25G إبرة الألم التسامح مع محسنة لهذا الإجراء.)

1. التجمع 18G 1 ½ بوصة على إبرة حقنة 10 مل. تحميل التجمع حقنة ذات إبرة حقنة في قبضة ("FNAB قبضة / بندقية") للتطبيق السليم والإفراج عن فراغ.
2. إدراج غيض من الإبرة في الدهون تحت الجلد داخل منطقة المعيني تطهير وتخدير (الشكل 3A).
3. التراجع الكامل للالمكبس من المحاقن مع إبرة تدخل في النسيج تحت الجلد لتوليد الفراغ (الشكل 3B).
4. المحافظة على الفراغ والمناورة الإبرة ذهابا وإيابا في اتجاهات مختلفة في لالدهون تحت الجلد (الشكل 3C خلال 3I). وينبغي أن يكون كل شوط أطول فترة ممكنة مع طول الإبرة المحدد دون السماح للخروج الإبرة من الجلد. الحد الأقصى لأخذ العينات ويتحقق من خلال تغيير الاتجاه مع كل السكتة الدماغية (الشكل 3I). فمن المهم للحفاظ على اتجاه إبرة عرضية إلى المصلية وموازية لسطح الجلد لتجنب ثقب في التجويف البريتوني.
5. نسيج ليفي شحمي يتراكم في المحاقن. يتم استرداد ما يكفي مرة واحدة شظايا نسيج ليفي شحمي (ما يصل إلى 1 مل من الدم الغني شظايا العينة المختلطة) ، والإفراج عن فراغ تماما ، وإزالة الإبرة (الشكل 3K).
6. والمريض أو مساعد الضغط على المنطقة شركة الداخلي مع لوحة من الشاش لمنع تسرب الدم.

2. تجهيز العينات

1. مكان ما لا يقل عن 5-6 أجزاء من نسيج ليفي شحمي في حل غلوتارالدهيد عن المجهر الإلكتروني (الشكل 4B).
2. اعتمادا على بروتوكول المؤسسية ، قد تكون أعدت مسحات قليل من نسيج ليفي شحمي الشظايا التي نشرها بين شريحتين (الشكل 4A).
3. ولا يسمح للمواد المتبقية لجلطة في المحاقن (وهذا قد يستغرق 5-7 دقائق ، اعتمادا على الوقت تخثر) (الشكل 4C).
4. نضح 10 ٪ في الفورمالين المحقنة بحيث يتم فكها نسيج ليفي شحمي متخدر مواد من جدار المحاقن والتعويم (الشكل 4C2). إزالة المكبس من المحاقن (الشكل 4C3) ونقل الأنسجة ليفي شحمي متخدر في حاوية في الفورمالين 10 ٪ من النهاية المفتوحة للحقنة المعاكس نهاية فوهة الشكل (4C4).
5. التسمية الحاويات بشكل مناسب وتقديم غلوتارالدهيد عن المجهر الإلكتروني والفورمالين للباب H & E والكونغو وصمة عار لتقييم الحمراء تحت المجهر الاستقطاب. إذا كان قد أعد مسحات ، قد يتم معالجتها وفقا لبروتوكول المختبر الفردية.

الشكل 1. تخدير المنطقة المراد لوحة FNAB من الدهون الأمامي.

الشكل 2. تخدير للمنطقة المحلية.

الشكل 3. أداء FNAB من الدهون لوحة الأمامية.

الشكل 4. تجهيز اللوحة الأمامية الدهون نضح لتقديمها إلى مختبر للكشف عن رواسب أميلويد.

3. ممثل النتائج

الشكل 5. اميلويد في جدار الأوعية الدموية الصغيرة في أنسجة شظايا ليفي شحمي. الفورمالين والمجهزة ، جزءا لا يتجزأ من نسيج ليفي شحمي البارافين ملون باللون الأحمر والكونغو ، والتي بحثها الاستقطاب المجهر الضوئي. اميلويد في جدار الأوعية الدموية الصغيرة يظهر التفاح الأخضر الانكسار (أبيض السهم).

الشكل 6. الأنسجة التي تفتقر الداء النشواني. والانكسار التفاح الأخضر غائب في أنسجة المريض مختلفة دون الداء النشواني. الزرقاء الانكسار (أبيض السهم) من ألياف الكولاجين ، وعادة ما تكون موجودة في جميع العينات تقريبا.

الشكل 7. بما يتفق مع اميلويد في الدم جدار الوعاء الدموي ييفات. مجهرية إلكترون من مستقيم ، غير متفرعة ، بطريقة عشوائية متناثرة ييفات قطرها 80-10 نانومتر التي شكلتها أميلويد في الدم جدار الوعاء الدموي.

Discussion

وعادة ما يتحقق تشخيص الداء النشواني مع خزعة من أنسجة الأعضاء المصابة مثل الكلى والكبد ، و / أو القلب. هذا النهج لم تسفر تشخيصية عالية ، ومع ذلك ، والغازية قد تترافق مع مضاعفات منها نزيف ^2. ويفضل المستقيم ، لثوي ، والخزعات نخاع العظم لتشخيص المرض مع اقتراب نسبيا أقل الغازية في 1960s ^6،7،8. وأفيد في البطن تطلع منصة الدهون في عام 1973 باعتبارها آمنة والداخلي ، مينيملي بسيطة ، وأقل تكلفة لتشخيص الداء النشواني أنسجة النظامية ^1. ومع ذلك ، لا تفاصيل للإجراءات ونهج لمعالجة العينة استرجاع ذكرت متماسك. هذا الفيديو ، والمادة ووصف الإجراء خطوة بخطوة.

هذا النهج للكشف عن التطلع لوحة اميلويد في الدهون ، وعلى نحو مماثل ، هي أيضا ليست موحدة تماما مع عدد قليل من الدراسات المقارنة وتقييم المناهج المختلفة ^{1،5،6،7،8.} تقييم الأمامي aspirates منصة الدهون مع تلوين أحمر الكونغو أقل حساسية مع انخفاض استنساخ بين الفاحصين وخاصة في الحالات المبكرة من الداء النشواني مع الودائع اميلويد شحيحة ^5. المناعية على أداء الفورمالين أقسام البارافين جزءا لا يتجزأ من كتلة الخلايا الثابتة وتم الإبلاغ عن مضان أحمر الكونغو التي أجريت على الخلايا مسحات لتحسين حساسية التشخيص ^9،10. المجهر الإلكتروني يحسن من الكشف والتعرف على الألياف اميلويد شحيحة في جدران الأوعية الدموية الصغيرة في أنسجة ليفي شحمي في aspirates منصة الدهون ^{4 ، 5.} استنادا إلى هذه المعلومات ، توضح هذه المقالة تجهيز العينات لإعداد كتل الخلية (لتقييم الكونغو الحمراء الملطخة المقاطع زنزانة تحت المجهر لاستقطاب التشخيص التفاح الأخضر الانكسار ، وكذلك لالمناعية كما هو مبين) والمجهر الإلكتروني. ومع ذلك ، اعتمادا على النهج المحدد لتقييم العينة عن اميلويد ، قد تعرض لتشويه إعداد الخلايا ، الخلية كتلة التحضير والتجهيز للفحص المجهري الإلكترون. بعض المختبرات إجراء اختبارات على مسحات محضرة من نسيج ليفي شحمي شظايا يستنشق وملون بلون أحمر الكونغو لدراسة ¹⁰ مضان.

عموما في وقت متأخر من الداء النشواني ، قد المجهر الضوئي المجهري مع أحمر الكونغو الاستقطاب يكون كافيا ، ولكن في المراحل المبكرة من المرض تلوين أحمر الكونغو مع استقطاب المجهري على أبواب الزنزانات أقل حساسية وموثوقة لوحة aspirates الدهون ^4،5،11 . ويمكن استخدام بقع الخاصة الأخرى بما في ذلك T Thioflavin مع قيود مماثلة. مناهج أخرى للكشف عن اميلويد تشمل تقييم مسحات نضح لاميلويد مع المجهري أحمر الكونغو الاستقطاب ومضان ^10. تجربتنا في هذا الأسلوب هو أقل دقة. تقييم الأوعية الدموية في الدهون لوحة اميلويد بواسطة المجهر الإلكتروني يتغلب على هذه القيود ^4،11. وقد أبلغ توصيف مزيد من اميلويد بواسطة المجهر immunoelectron ¹² ، ولكن هذه الطرق قد لا تكون متاحة على نطاق واسع في وضع الرعاية غير العالي.

ويمكن تصنيف الإبر المستخدمة لتنفيذ الإجراءات وفقا لتطلع على قياس الأحجام في الدقيقة (21 - 25G) ، والمتوسطة (18 20G) ، وكبيرة (على سبيل المثال - 14G) ^11. وقد تم الإبلاغ عن تطلعات الأمامي وسادة من الدهون التي سيتم تنفيذها باستخدام مقاييس متفاوتة تراوحت بين المتوسطة (من 18 إلى 20G) إلى ^2،10 (21 إلى 22G) غرامة. ويستنشق معظم الآفات الشامل مع الإبر قياس أدق (مثل 25G) للحصول على الخلايا مسحات جيدة مع يمر إضافية مع الإبرة أوسع مقياس (مثل 18G) لاسترداد عينة إضافية للكتل الخلية.

خلال اللوحة الأمامية تطلع الدهون والأنسجة ليفي شحمي متماسكة لا نضح جيدا مع الإبر الدقيقة. كتلة الخلية إعداد والمجهر الإلكتروني هامة لتقييم جدران الأوعية الدموية الصغيرة في أنسجة شظايا ليفي شحمي في aspirates الدهون. ينصح الإبر أوسع مقياس (مثل 18G) لانتاج مواد كافية التشخيص ^2،10. وهذا الإجراء هو الذي يضاهي FNAB التقليدية ، ويشار إلى منصة الدهون الطموح كما FNAB حتى ولو يمكن استخدام الإبر أوسع مقياس لأداء ذلك ^5.

Materials