فلاش التجميد وCryosectioning E12.5 مخ الفأر

Summary

تظاهر في هذا الفيديو هي تقنيات الفلاش تجميد وsectioning الجنينية أنسجة المخ من الماوس. يتم إعطاء نصائح مفيدة لاستخدام ناظم البرد ، بما في ذلك الطرق لحل المشاكل التي يمكن استخدامها في حين قطع لضمان أن ينجم عنها من الأنسجة المقاطع خالية من الشقوق والتشوهات الأخرى.

Abstract

Protocol

1. إصلاح الأنسجة في بارافورمالدهيد 4 ٪ في برنامج تلفزيوني عن الوقت المطلوب.
2. السكروز لبث الأنسجة (cryoprotection)
   1. جعل 30 ٪ في محلول السكروز ث PBS / V 2059 في الأنبوب.
   2. شطف الأنسجة 3X في برنامج تلفزيوني (~ 5 دقائق مع هزاز).
   3. النسيج في محلول السكروز مكان 30 ٪. سوف الأنسجة لا تغرق.
   4. مكان النسيج في 4 درجات مئوية خلال الليل ، أو حتى قد غرقت.
3. cryomold التسمية المناسبة مع حجم المعلومات والتوجيه.
4. ملء مع cryomold أكتوبر (تجنب فقاعات).
5. نقل الأنسجة لحمام أكتوبر وذلك مع معطف أكتوبر
6. نقل الأنسجة لفي أكتوبر cryomold.
7. توجيه النسيج تحت المجهر.
8. صب النيتروجين السائل في طبق بتري بلاستيكية.
9. بسرعة وبدقة أقل من الأنسجة في cryomold في النيتروجين. (لا يغرق في أعلى cryomold).
10. عندما أكتوبر صلبة بيضاء ، ضع الأنسجة المجمدة في الثلاجة -80 درجة مئوية للتخزين.
11. يوازن الأنسجة ل~ 20 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة على الأقل. قبل sectioning.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Tissue-Tek Cryomold	Ted Pella, Inc.	27181
O.C.T.	Ted Pella, Inc.	27050
Sucrose solution			30% sucrose solution in PBS w/v
paraformaldehyde			4% paraformaldehyde in PBS