قياس المعرفي التناقصات التي تحدثها العلاج الإشعاعي القحف

Summary

ضعف الإدراك الناتج عن إدارة radiotherapeutic من أورام المخ يمثل حالة مستعصية سريريا أن يؤثر سلبا نوعية الحياة. القدرة على تقييم نقدي لتخفيف التدخلات المحتملة التي يسببها الإشعاع المعرفي التناقصات يعتمد في النهاية على القدرة على إجراء تقييمات كمية دقيق للمعرفة.

Abstract

باستثناء بقاء وضعف الإدراك الناجمة عن التدبير السريري للسرطان هو أحد العوامل الرئيسية يملي نتائج علاجية. للكثير من المرضى المصابين CNS والأورام الخبيثة غير CNS، العلاج الإشعاعي والعلاج الكيميائي تقديم أفضل الخيارات المتاحة لمكافحة المرض. تأتي هذه العلاجات لكن بتكلفة، والناجيات من سرطان تقريبا كل (~ 11 مليون في الولايات المتحدة وحدها اعتبارا من 2006) تكبد بعض المخاطر لتطوير المعرفية اختلال وظيفي، مع معظم الحالات الشديدة وجدت في المرضى يتعرضون للعلاج بالأشعة في الجمجمة (~ 200،000 / سنة ) من أجل السيطرة على أورام الدماغ الأولية والمتنقل ^1. إشكالية خاصة هي الحالات التي تصيب الأطفال، الذين البقاء على المدى الطويل تعاني من نتائج ملحوظة في التناقصات المعرفية أعباء اجتماعية واقتصادية كبيرة ^2. حتى الآن، لا تزال هناك أي حلول مرضية لهذه المشكلة السريرية الهامة.

وقد تناولنا هذا القلق الصحية الخطيرة باستخدام المزروعة الجذعية مLLS لمكافحة الإشعاع الناجم عن التدهور المعرفي لدى الجرذان يتعرضون للأشعة athymic الجمجمة ^3. تفاصيل تشعيع التجسيمي ويمكن العثور على زراعة في المختبر وزرع الخلايا الجذعية العصبية البشرية (hNSCs) في ورقة رفيقنا (أشاريا وآخرون، إن الرب المرجع). بعد التشعيع وجراحة الزرع، ويتم تقييم ثم الفئران لإجراء تغييرات في الإدراك، المطعمة بقاء الخلية والتعبير التمايز علامات محددة 1 و 4 أشهر بعد التشعيع. لتقييم نقدي لنجاح أو فشل أي تدخل محتمل مصممة لتحسين الناجمة عن الاشعاع المعرفي عقابيل، سلسلة من المهام الإدراكية صارمة الكمية يجب إجراء. لتحقيق ذلك، ونحن لدينا لإخضاع الحيوانات مجموعة من نماذج اختبار المعرفية بما في ذلك الاعتراف مكان الرواية، متاهة مائية، بالإضافة إلى ارتفاع متاهة الخوف وتكييف، وذلك لتحديد التعلم قرن آمون وغير الحصين والذاكرة. لقد أثبتنا فائدةتستخدم هذه الاختبارات لقياس أنواع معينة من الحيوانات في التناقصات المعرفية المشع، ولهم لإظهار أن الحيوانات المغروسة مع hNSCs يحمل تحسينات كبيرة في وظيفة الادراك ^3.

فوائد المعرفية المستمدة من الخلايا الجذعية البشرية المغروسة تشير إلى أن استراتيجيات مماثلة قد تقدم يوم واحد اللجوء السريرية التي تشتد الحاجة إليها للناجين من السرطان يعانون من ضعف الادراك. وفقا لذلك، قدمنا ​​الوثائق المكتوبة والمرئية من الخطوات الهامة المستخدمة في النماذج المعرفية لدينا اختبار لتسهيل ترجمة نتائج واعدة لدينا في العيادة.

Protocol

وتخطيطي تخطيطي لدينا نماذج الاختبار المعرفي في الشكل 1. يبدأ الاختبار المعرفي بعد شهر واحد يتم تنفيذ الإشعاع والعمليات الجراحية.

إجراء الاعتراف مكان رواية (NPR) العمل

1. ويستند الاعتراف مكان رواية (NPR) المهمة على الإجراءات التي وصفها Mumby وزملاؤه (2002)، والذاكرة هي الاعتراف المكانية المهمة التي تعتمد على الحصين ^4.
2. واطلع 1 الفئران مع سياق الاختبار عن طريق وضعها في الساحات اختبار (حسب الطلب، والاكريليك بيضاء، وفتح صناديق رأس، X 70CM 70CM 40CM X عالية) لمدة 20 دقيقة مرة واحدة يوميا لمدة ثلاثة أيام. توضع الأشياء التي لن يتم استخدامها لاختبار في وقت لاحق في الساحات خلال هذه الدورات التعود.
3. للمرحلة التعود، تجدر الإشارة الملاحظات دليل استكشافية من السلوك، في حين تم تسجيل وتتبع السلوك ليست ضرورية.
4. لجميع مراحل مهمة NPR، يتم تنظيف الساحات بدقة بين الحيوانات باستخدام الايثانول 70٪ من أجل تقليل الاشارات الرائحة التباس. لجميع المحاكمات والحيوانات المجربون مكان في وسط الساحات اختبار في اتجاه ثابت لتقليل فرصة أن الحيوانات سوف تستكشف ببساطة أن كتلة حدوثها لتوضع بجوار.
5. تدار المرحلة التعريف و 5 دقائق مرحلة الاختبار في اليوم الرابع.
6. للمرحلة التعريف، يتم وضع كتل اثنين من البلاستيك مطابقة (8CM X 10CM X 3CM عالية) التي تم تنظيفها مع الايثانول 70٪ على مواقع محددة داخل ساحات الاختبار. يتم وضع حيوانا واحدا في كل الساحة لمدة 5 دقائق ويترك لاستكشاف بحرية.
7. وسجل استكشاف الموقفين المكانية على قدم المساواة مألوفة باستخدام نظام التتبع الآلي. لجميع المراحل، ويعرف التنقيب كنقطة حيوان انف يجري داخل دائرة نصف قطرها 4cm من والموجهة نحو الكتل.
8. FOالنماذج التالية مرحلة التعريف، يتم وضع الحيوانات في قفص صغير لإجراء التأخير الفاصلة 5 دقائق بالسيارة. خلال هذا الوقت، يتم تنظيف الساحات اختبار مع الايثانول 70٪، ويتم إضافة نسخة متطابقة من القطع واحدة في ظل وضع المكاني متطابقة وخلال مرحلة التعريف، واحدة في موقف المكانية الرواية. إذا فأر يتذكر الترتيب المكاني للكتل من مرحلة التعريف، وسوف تنفق المزيد من الوقت لاستكشاف كتلة وتقع في موقع المكانية الرواية.
9. بعد الفاصل الزمني تأخير 5 دقائق بالسيارة، يتم إرجاع الحيوانات لاختبار الساحات للمرحلة الاختبار 5 دقائق بالسيارة. أنها تستكشف بحرية لمدة 3 دقائق.
10. بعد 24 ساعة من نهاية المرحلة التعريف، يتم إرجاع الحيوانات لاختبار مرة أخرى الساحات للمرحلة الاختبار على مدار 24 ساعة. في هذه المرحلة، كتلة واحدة لا تزال في نفس الموقف خلال مراحل الاختبار والتعريف 5 دقائق بالسيارة، ويتم وضع كتلة أخرى في وظيفة جديدة، رواية المكانية. مرة أخرى، إذا فأر إعادةأعضاء هذا الترتيب المكاني للكتل من التعرف المرحلة في اليوم السابق، وقال انه قضاء المزيد من الوقت لاستكشاف كتلة وتقع في موقع المكانية الرواية.
11. الآن، يتم جمع كمية الوقت الذي يقضيه استكشاف الكتل في مواقف مختلفة المكانية باستخدام برنامج تتبع الآلي، ويمكن تحليلها إحصائيا لفروق بين المجموعات التجريبية.
12. ويحسب للمرحلة التعريف، إجمالي الوقت للبقاء كلا الموقعين استكشاف المكانية عبر المحاكمة بأكملها. ينبغي أن يكون هناك أي اختلاف في الوقت الذي يقضيه استكشاف موقعين المكاني وخلال هذه المرحلة كما هي مألوفة بنفس القدر / غير مألوف بالنسبة الى الحيوانات (الشكل 2A). قد مزيد من اختلافات كبيرة في استكشاف الكلي بين المجموعات التجريبية تشير إلى الاختلافات في مجموعة الدافع للاستكشاف أو مستويات القلق ويجب أخذها في الاعتبار عند تفسير النتائج المكانية الذاكرة الاعتراف من مراحل اختبار اثنين.
13. لكل من5 دقائق بالسيارة ومراحل الاختبار على مدار 24 ساعة، ويتم احتساب نسبة التنقيب على النحو التالي: الوقت الذي يقضيه استكشاف موقف الرواية - الوقت الذي يقضيه استكشاف موقف مألوف / إجمالي الوقت المنفق استكشاف (الشكل 2B). وبهذه الطريقة، يتم أخذ التغييرات الفردية في الدافع لاستكشاف الكائنات بعين الاعتبار. حيوانات طبيعية قضاء بعض الوقت أكثر بكثير استكشاف موقف الرواية المكانية مما كان متوقعا عن طريق الصدفة (المشار إليها بواسطة خط متقطع) بعد فترات تأخير 5 دقائق بالسيارة و 24 ساعة (الشكل 2B).
14. ويحسب عادة نسبة التنقيب عن أول 60 ثانية من الاختبارات الدقيقة 5-و 24 ^ساعة-4. هذا هو لأنه، كما اختبار التجارب التقدم، فإن الموقف يصبح أكثر الرواية المكانية مألوفة لدى الحيوانات. وهكذا، فإن الدقيقة الاولى من التجارب اختبار يوفر التقييم الأكثر دقة من الذاكرة الاعتراف المكانية.

2. إجراء المتاهة زائد المرتفعة (EPM) العمل

1. ومرتفعةبالإضافة إلى ويستند المتاهة (EPM) المهمة على إجراءات من Walf وفري، 2007 ^5.
2. يستخدم المهمة EPM لتقييم القلق لدى القوارض. جهاز EPM هي متاهة 4-الذراع (45 "X 4") رفعت 45 "من مستوى أدنى، مع الأسلحة مرتبة في شكل زائد. ذراعين هي المغلقة وهما مفتوحة. يتم تصنيعها جهاز أبدته شركة ميد شركاه .
3. السلوك أثناء هذه المهمة يعكس الصراع بين الدافع الفئران الطبيعية لاستكشاف بيئات رواية (الوقت الذي يقضيه في بأذرع مفتوحة) وتفضيل البقاء في المناطق المحمية (الأسلحة مغلقة).
4. مضاءة الزاهية الغرفة التجريبية مع الأضواء وأشار في متاهة لضمان الدافع الكافي لتفضل المغلقة، أكثر مضاءة بشكل خافت الأسلحة.
5. يتم تنظيف المتاهة جيدا قبل يتم اختبار أول حيوان، وبين كل محاكمة.
6. يتم وضع الحيوانات في الجهاز من خلال عقد تحت الأمامية ووضعه في مركز الجزء من المتاهة، التي تواجه الذراع المفتوحة التي هي بعيدا عنالمجرب. كل محاكمة يستمر لمدة 5 دقائق.
7. يتم تعقب مسار الحيوان باستخدام برنامج تتبع الآلي بحيث عدد الإدخالات ومقدار الوقت الذي يقضيه في أحضان المفتوحة والمغلقة ويمكن حساب. يمكن رصد السلوكيات إضافية مثل الانخفاضات تربية، والاستمالة ورئيس لأكثر من الجانب الجهاز. يتم حساب عند إدخال نقطة المركز للحيوان يعبر إلى الذراع.
8. إذا فأر المتاهة يقع قبالة، يتم وضع بسرعة مرة أخرى على الذراع مفتوح من التي وقع فيها، ويتم تسجيل الحدث في دفتر المراقبة. إذا فأر تجمد لفترة طويلة من الزمن، السلوك، جنبا إلى جنب مع أي من الأسباب المحتملة (مثل المفاجئ، والضوضاء الصاخبة خارج الغرفة الاختبار) لاحظت و، واختبار يستمر حتى يتسنى لجميع حيوانات التجارب على أوقات التعرض مماثلة.
9. يتم استخدام الوقت الذي يقضيه في مقابل بأذرع مفتوحة مغلقة لحساب النسبة: الوقت في الأسلحة المفتوحة / الوقت الإجمالي للأسلحة. وبالمثل، فإن نسبة مقالات لفتح الأسلحة مقابل إجمالييتم احتساب مقالات الذراع. باستخدام برنامج تتبع الآلي، وسافر المسافة الإجمالية ويمكن أيضا أن تقاس سرعة من أجل تقييم أي اختلافات في وظيفة الحركة بين المجموعات التجريبية.
10. ويرتبط القلق انخفضت مع زيادة نسبة الوقت الذي يقضيه في بأذرع مفتوحة، في حين ترتبط زيادة القلق والخوف مع مزيد من الوقت في أحضان مغلقة. حيوانات طبيعية قضاء بعض الوقت أقل بكثير في بأذرع مفتوحة من المتوقع عن طريق الصدفة (المشار إليها بواسطة خط متقطع، الشكل 3). وسوف الحيوانات أكثر حرصا قضاء بعض الوقت أقل نسبيا في بأذرع مفتوحة، في حين الحيوانات أقل قلقا وسوف تنفق المزيد من الوقت في بأذرع مفتوحة (على سبيل المثال، بعد التعرض لأخطار متعددة إلى متاهة أو العلاج من تعاطي المخدرات التالي مزيل القلق).

3. إجراء تكييف الخوف السياقية وملقن (FC) العمل

1. وتستند السياقية وملقن الخوف أوصاف تكييف المهام (FC) على إجراءات من Schafه آخرون، 1999، Winocur وآخرون، 2006 و ماكلويد وآخرون، 2007 ^6-8.
2. الخوف تكييف (FC) هو نموذج المهمة السلوكية التي حيوانات تعلم للخوف من التحفيز محايدة سابقا (أ السياق، الضوء أو نغمة، والمثير الشرطي) من الاقتران مع التحفيز الضارة (عادة footshock خفيفة، والمثير غير الشرطي ). التعلم هو سريع وقوية وطويلة الأمد، وبالتالي يتم استخدام المهمة FC غالبا لدراسة الدوائر العصبية الحيوية من التعلم والذاكرة في القوارض.
3. جهاز FC X 30CM هو 30CM 40CM X غرفة مغلقة عالية (Phenotyper، الموديل 3000، Noldus تكنولوجيا المعلومات). أرضية القاعة عبارة عن شبكة الفولاذ المقاوم للصدأ والذي يستخدم لتقديم الحافز الصدمة. تم تجهيز Phenotyper مع اللغة التي تنبعث من 2300Hz، لهجة 90dB على الطلب، بوصفها المثير الشرطي.
4. يتم تسليم صدمة صدمة عبر مولد (ميد شركاه المحدودة). الصدمة هي لحظة الانزعاج الذي لا ينتج لاستينغ الألم أو تلف الأنسجة. للمحاكمات التدريب والاختبار على حد سواء، هو الوقت المناسب تسليم الصدمة والمحفزات لهجة والتحكم فيها آليا باستخدام XT Ethovision إضافة على المحاكمة والأجهزة وحدة التحكم (الإصدار 7.0؛ Noldus تكنولوجيا المعلومات).
5. في اليوم الأول، ويجري FC التدريب. يتم تنظيف Phenotyper تماما مع الايثانول 70٪، ويتم وضعها حيوان واحد في الغرفة. المحاكمة تدريب يتكون من ثلاث مراحل: (1) مرحلة الأساس، وعندما يدار أي صدمة أو لهجة، (2) مرحلة التدريب، وعندما يتم عرض لهجة الصدمة عمليات الاقتران، و (3) مرحلة ما بعد التدريب، وعندما لا إدارة صدمة أو لهجة. كل مرحلة تستغرق حوالي 5 دقائق لفترة التدريب محاكمة مجموعه 15 دقيقة لكل حيوان.
6. خلال مرحلة التدريب، وإدارة نغمة لمدة 30 ثانية وتتزامن مع نهاية هجة، ويتم تسليم صدمة 1mA إلى الشبكة لمدة 1 ثانية. ويتكرر هذا الاقتران لهجة صدمة ما مجموعه 5 مرات، مع SECO 10 حتي 60 متغيرالثانية تباعد الفترة الزمنية الفاصلة بين كل عملية الاقتران.
7. يقاس من مرحلة التدريب، والنسبة المئوية للوقت تنفق كل حيوان بلا حراك، أو تجميد، من 60 ثانية الأخيرة من المرحلة الأساسية الأولى (إنشاء تجميد عفوية قبل التزاوج لهجة الصدمة) ومن 60 ثانية الأخيرة من آخر تدريب المرحلة (إنشاء السلوك تجميد ردا على عمليات التزاوج لهجة الصدمة). عرض حيوانات طبيعية مستويات منخفضة جدا من تجميد خلال المرحلة الأساسية وعالية جدا (~ 95٪) خلال تجميد مستويات مرحلة ما بعد التدريب (الشكل 4).
8. بعد 24 ساعة، يتم إرجاع الحيوان إلى سياق مماثل، ولاحظ لاختبار FC السياقية 5 دقائق. يتم تسليم أي صدمة أو نغمة خلال هذه المرحلة، ويتم احتساب النسبة المئوية للتجميد الوقت الذي يقضيه للمحاكمة بأكملها. لاحظ أهمية الحفاظ على سياق مستمر من التدريب لاختبار السياق. في الواقع، بعد أن المجرب نفسه التعامل معها واختبار الحيوانات على حد سواء الأيام هو شمال شرقcessary. حيوانات طبيعية تنفق ما يقرب من 70٪ من المشاركين في المحاكمة سياق السلوك تجميد (الشكل 4).
9. إدارة اختبار FC ملقن ساعة واحدة في وقت لاحق. يتم تغيير السياق من الغرفة عن طريق إزالة الطابق الشبكة، إضافة إلى لوحات خارج الغرفة، وتنظيف الأرض مع نظافة منزلية المعطرة. ويلاحظ سلوك الحيوان لتجميد الدقيقة الأولى، ومستويات منخفضة جدا تجميد إذا تم تغيير سياق بما فيه الكفاية (الشكل 4). ثم لعبت لهجة لمدة 3 دقائق، تليها الدقيقة الاخيرة من الصمت، ويتم احتساب النسبة المئوية تجميد الوقت الذي تستغرقه. حيوانات طبيعية تظهر مستويات عالية من تجميد خلال هذه الفترة (الشكل 4).
10. في المجموع، يتم جمع 5 تدابير منفصلة من السلوك التجميد؛ (1) خط الأساس؛ (2) بعد التدريب، (3) اختبار السياق؛ (4) قبل جديلة الاختبار؛ اختبار جديلة جديلة وآخر، (5).
11. غياب تجميد خلال مرحلة خط الأساس العادي مستويات القلق، في حين substanتجميد قيمه خلال مرحلة ما بعد التدريب تقترح سليمة القدرة الحسية والحركية. تجميد أثناء الاختبار السياق يؤسس على مدار 24 ساعة الذاكرة لسياق التدريب، الذي يعتمد على وظيفة قرن آمون سليمة واللوزة ^9. وعدم وجود تجميد اختبار ما قبل جديلة يوحي كافية لتغيير سياق التدريب الأولي. جديلة جديلة وآخر للتجميد يؤسس على مدار 24 ساعة الذاكرة لتحفيز لهجة، والذي يعتمد على وظيفة اللوزة سليمة ^9.

4. إجراء المتاهة المائية موريس (MWM) العمل

1. وتستند إجراءات موريس مهمة المياه المتاهة على الأوصاف السابقة ^10،11.
2. متاهة موريس المائية (MWM) هو اختبار مهمة للتعلم المكانية للقوارض التي تتطلب استخدام الإشارات البعيدة لتحديد موقع منصة الهروب المغمورة في بركة كبيرة من المياه مبهمة. توضع، متميزة كبيرة الإشارات البصرية حول حوض السباحة في مواقع محددة وثابتة. حيوانات تعلم على استخدام هذه العظة للانتقال إلى سوbmerged منصة. يتم مراقبة الحيوانات وإزالتها من الماء إذا كانوا غير قادرين على السباحة.
3. ويتم تقييم التعلم المكاني عبر التجارب المتكررة ويتم تحديد مرجعية الذاكرة من خلال تقييم تفضيل لمنطقة منصة منصة عندما تغيب. المحاكمات عكس تعزيز الكشف عن العاهات المكانية، وربما فرض الضرائب على مناطق الدماغ إضافية مثل القشرة الأمامية ^10.
4. إدارة المهام MWM أكثر من 8 أيام ويتكون من 4 مراحل؛ اختبار ملقن، مرحلة اكتساب، وهو اختبار التحقيق 24hr والاختبار التحصيلي عكس
5. التجمع بيضاء مصنوعة خصيصا، خزان البولي ايثيلين، وقطرها 200cm 60CM عالية. وملأها الماء لحوالي 30CM عميق وجعلت مبهمة مع الطلاء الأبيض غير سامة. يتم الاحتفاظ درجة حرارة الماء بين 20 و 22 ° C (68 ° F و 72). منصة الهروب هو العرف الصنع، والوقوف البلاستيك الشفاف مع 10CM الأعلى دائرية قياس في القطر. يجلس حوالي 1.5cm تحت سطح واتص.
6. الاختبار يتكون من 4 ملقن المحاكمات التي تعطى في اليوم 1. لهذه التجارب، يتم وضع علامة مميزة بالأبيض والأسود في منتصف المنصة حتى أن موقع الفرار من الواضح للحيوانات. للحد من استخدام المعلومات المكانية وخلال هذه المرحلة، يتم إزالة الجدار والعظة وتتنوع المنصة والمواقع بداية من المحاكمة للمحاكمة. هذه المرحلة يساعد استبعاد أي خلافات الحسية والحركية المتصلة بين المجموعات التجريبية قبل مرحلة اكتساب يبدأ.
7. لجميع مراحل مهمة MWM، وتعقد تحت الأمامية الحيوانات ووضعها برفق في الماء في بداية الموقف المعين، ووجهه إلى الحائط من حوض السباحة. ويتم اختبار الحيوانات في مثل هذه الأفواج من 8 أن هناك 8 حتي 10 دقيقة بين كل محاكمة الفاصلة بين التجارب 4 يوميا. خلال فترات ما بين المحاكمة، يتم الاحتفاظ الحيوانات في أقفاص لتجنب الاحترار انخفاض حرارة الجسم.
8. ملقن للاختبار، يسمح وقت السباحة أقصى 30 ثانية للحيوان لتسلق علىمنصة. إذا تم التوصل إلى الحد الأقصى للوقت قبل هروب الحيوانات، توجه المجرب إلى منصة باليد ووضعه على المنصة. الحيوان لا يزال على منصة لمدة 20 ثانية بقية قبل أن يتم وضعها في قفص الاحترار.
9. لكل اختبار محاكمة ملقن، يتم تشغيل هذا الحيوان من مختلف والموقع بداية محددة سلفا في محيط المجمع، ويتم نقل أيضا منصة لكل من شغل 4 مناصب رباعي مختلفة.
10. المرحلة اكتساب يبدأ في اليوم التالي ويتكون من 4 محاكمات في اليوم لمدة 5 أيام متتالية. خلال هذه المرحلة، ومنصة المخفية يبقى في نفس الموقع وحيوانات تعلم للانتقال إلى ذلك باستخدام الاشارات غرفة البعيدة.
11. مرة أخرى، لكل من المحاكمات 4، يوضع الحيوان في حوض السباحة في مختلفة، نقطة بداية محددة سلفا. كل يوم، وهما من نقطة البداية هي إلى اليسار واثنين من نقاط بداية هي على يمين المنصة، في ترتيب عشوائي، لتجنب وضع egocاستراتيجيات المكانية entric لحل المهمة.
12. الوقت السباحة الأقصى لكل محاكمة الصفقة هي 60 ثانية، وبعد ذلك يتم توجيه الحيوان إلى وضعها على منصة من قبل المجرب. الحيوان لا يزال على منصة لمدة 20 ثانية بعد الهروب.
13. في يوم 7، 24hr بعد المحاكمة النهائية التدريب، إدارة التحقيق في محاكمة 60-الثانية التي تتم إزالة المنصة. هذه المرحلة يحدد تفضيل الحيوان للرباعي التي كانت تحتوي على منصة ويستخدم كمقياس للذاكرة المكانية إشارة ^10. بعد المحاكمة التحقيق، يتم إرجاع النظام الأساسي إلى نفس المربع وتدار 3 المحاكمات اكتساب العادية.
14. لاختبار انعكاس التعلم في يوم 8، يتم نقل منصة لموقع جديد من أجل تقييم قدرة انعكاس التعلم. قياس كمية الوقت الذي يقضيه الحيوانات بالبحث عن منصة في موقعه السابق مقابل موقعه الجديد يقدم تقييما من الاجتهاد، أو الائتلاف الوطني العراقيتم نقل بيليتي لقمع الاستجابة إلى الموقع السابق مرة واحدة في منصة ^10. أما بالنسبة لاقتناء ومراحل التحقيق، وتدار 4 60 الثانية والمحاكمات.
15. لملقن الكمون، اختبار لمعرفة تستخدم منصة وسرعة وتدابير البصرية وظيفة الحركة، على التوالي. يجب أن تؤخذ الفروق بين المجموعات التجريبية خلال هذه المرحلة في الاعتبار في تفسير النتائج واكتساب الذاكرة عن الاختلافات في الحسية والحركية وظيفة بين الجماعات قد تكون موجودة.
16. للمرحلة الاستحواذ، يعني الكمون للعثور على منصة و / أو طول مسار تستخدم كمقاييس للتعلم المكانية. في الحيوانات العادية، هربا من الكمون يقلل تدريجيا خلال الأيام اقتناء مثل هذه يعني 5 مرة هروب حوالي 15 إلى 20 ثانية في يوم 5 (الشكل 5A).
17. للمرحلة التحقيق، يعني المسافة إلى منصة (الشكل 5B) و / أو الكمون للوصول إلى أول موقع للمنبر السابقة (الشكل 5C ) وتستخدم كمقاييس للذاكرة مرجعية المكانية.
18. للمرحلة الانعكاس، قضى وقتا في المئة في الربع القديمة مقابل الجديدة التي تحتوي على استخدام منصة كمقياس للالاجتهاد. خلال التجارب الأربعة، ينبغي تفضيل للموقع القديم منصة خفض نحو ما تنص تفضيل لموقع المنصة الجديدة (الشكل 5D).

5. ممثل النتائج:

الشكل 1. تمثيل تخطيطي من نماذجنا المعرفية الاختبار.

الشكل 2. نتائج ممثلة من الحيوانات السيطرة على المهمة المكان الاعتراف الرواية. A) يجب أن إجمالي الوقت للبقاء استكشاف الموقفين المكانية تكون متساوية تقريبا خلال مرحلة التعريف. B) نسبة الاستكشاف (الوقت الذي يقضيه استكشاف الرواية صsition / الوقت الذي يقضيه استكشاف كل المواقف) يظهر تفضيل واضح لموقف المكانية الرواية بعد فترات تأخير 5 دقائق بالسيارة و 24 ساعة. خط متقطع يدل على الأداء فرصة.

الشكل 3. نتائج ممثلة من السيطرة على الحيوانات متاهة زائد مرتفعة. حيوانات طبيعية قضاء وقت أقل مما كان متوقعا عن طريق الصدفة في بأذرع مفتوحة (المشار إليها بواسطة خط متقطع). والحيوانات حريصة قضاء بعض الوقت أقل نسبيا في بأذرع مفتوحة مقارنة بالمجموعة الضابطة، بينما التعرض لأخطار متعددة إلى متاهة أو العلاج مع وكلاء مزيل القلق سيزيد الوقت الذي يقضيه في بأذرع مفتوحة.

الشكل 4. نتائج ممثلة من الحيوانات السيطرة على الخوف مهمة تكييف. ويلاحظ انخفاض مستويات تجميد أثناء التعرض إلى الدائرة الأولي (خط الأساس)، وعندما يتم تبديل سياق قبل إجراء الاختبار جديلة (جديلة قبل الاختبار). على النقيض من ذلك، حيوانات طبيعية يقضون معظم فترة ما بعد التدريب العاملة في مجال السلوك التجميد. إذا الحيوانات نتذكر السياق الذي وقعت عقب التدريب تأخير 24hr، وسوف ينخرطون في سلوك تجميد لحوالي 70٪ من المحاكمة السياق 5 دقائق بالسيارة. وبالمثل، إذا الحيوانات تذكر لهجة، وأنها تظهر مستويات عالية من خلال تجميد جديلة وجديلة اختبار ما بعد.

الشكل 5. نتائج ممثلة من الحيوانات السيطرة على متاهة موريس المائية المهمة. A) الكمون الهروب يتناقص مع التدريب التدريجي خلال المرحلة الاستحواذ. B) وC) متوسط ​​المسافة من الكمون وعبور أول موقع منصة السابقة أثناء الاختبار التحقيق 24hr تستخدم كمقاييس للذاكرة مرجعية المكانية. D) ويتم تقييم التعلم عن طريق تغيير عكس موقع المنصة في اليوم الأخير من قسم التدريب والامتحاناتتينغ. خلال محاكمات 4، حيوانات طبيعية بشكل تدريجي وقف البحث في رباعي القديمة وتعلم أن النظام الأساسي هو في موقع جديد.

Discussion

هناك حاجة ملحة لاستراتيجيات طويلة الأجل تهدف إلى قطع الطريق على تطوير الخلل المعرفي الذي أصبح شائعا بشكل متزايد في الناجيات من سرطان ^12،13. العلاج بالخلايا الجذعية قد توفر وسيلة لتخفيف مجموعة من عقابيل الأنسجة الطبيعية في الجهاز العصبي المركزي، كما أنها توفر الفرصة لاستبدال الخلايا المفقودة أو التالفة من علاجات السرطان السامة للخلايا ^14. للتعجيل في تحقيق هذه الجهود، اتخذنا سلسلة من التجارب الإثبات الرئيسي التي أكدت قدرة hNSCs المغروسة cranially لاستعادة الإدراك وظيفيا داخل الأنسجة السرير المشع من الجهاز العصبي المركزي ^3. كان حاسما في هذا المسعى القدرة على إجراء موثوق سلسلة من الاختبارات المعرفية تسيطر عليها بعناية بطريقة استنساخه. وقد فصلنا هذه الإجراءات الحاسمة في الجهود الرامية إلى الإسراع في إمكانية متعدية من العلاج بالخلايا الجذعية في العيادة. مزيد من الاعتبارات التيويسلط الضوء المرجح أن يكون لها تأثير كبير على نوعية البيانات أدناه.

اختبار المعرفي يتطلب عناية فائقة بالتفاصيل والالتزام ممارسات قياسية معينة يمكن أن تساعد في تقليل الآثار التي تعقد في تفسير النتائج. استخدام مخصص غرف منفصلة من التجارب السلوكية غرف القابضة الحيوانية والمجربون هو الأفضل. بل هو أيضا من الحكمة استخدام "الضوضاء البيضاء" الذي يمنع الضوضاء الخارجية في منشأة الحيوانية التي قد يصرف من الحيوانات المهمة في متناول اليد. لتقليل الضغط على الحيوانات المخصصة للاختبار المعرفي، من المهم بالنسبة لهم أن يكون على دراية المجربون من شأنها أن تؤدي الاختبارات السلوكية قبل الإدارة المهمة. بشكل عام، إذا اختبار الإناث والذكور، فمن المستحسن لاختبار الإناث الأول لأنها تميل إلى أن تكون أكثر حرصا أثناء اختبار إذا العظة رائحة الذكور البقاء في الساحات الاختبار. عندما بالإدارة بطارية المسلسل من المهام، من المهم أن تعرض الحيوانات للياالمهام المجهدة الحادي والعشرين (مثل EPM، NPR) وأكثر المهام المجهدة الأخيرة (مثل FC، MWM).