JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Protocol
  • النتائج
  • Discussion
  • Disclosures
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

أصبح صغيرا زرع الأمعاء خيار العلاج المقبولة لمرضى الفشل المعوية لا رجعة فيه. نموذجنا التجريبي لزرع مثلي الأمعاء الدقيقة في الفئران بمثابة أداة موثوقة لمعالجة المناعية الأساسية والعمليات الالتهابية التي تعقد زرع الأمعاء.

Abstract

أصبح صغيرا زرع الأمعاء خيارا مقبولا السريرية للمرضى الذين يعانون متلازمة الأمعاء القصيرة وفشل التغذية الوريدية (فشل معوي لا رجعة فيه). في مراكز متخصصة واستراتيجيات تحسين إدارة المنطوق أدت إلى المريض القصيرة والمتوسطة الأجل وبقاء ممتازة الكسب غير المشروع مع توفير نوعية عالية من الحياة 1،3. وخلافا للزرع أكثر شيوعا من أجهزة صلبة أخرى (أي القلب والكبد) الآليات الكامنة وظيفة العديد من الكسب غير المشروع والتعديلات المناعية الناجمة عن زرع الأمعاء ليست معروفة تماما 6،7. حلقات الرفض الحاد، والمزمن الفشل الإنتان الكسب غير المشروع هي العقبات الرئيسية التي تسهم نتائج لا تزال مواتية على المدى الطويل أقل وعرقلة لعمل أكثر على نطاق واسع على الرغم من إجراء عدد متزايد من المرضى على التغذية الوريدية الرئيسية التي ستستفيد من المحتمل زرع من هذا القبيل. الأمعاء الدقيقة يحتوي علىعدد كبير من الركاب وكوسيتيس يشار إلى جزء من القناة الهضمية نظام اللمفاوية المرتبطة (GALT) هذا الجزء من كونها السبب في immunogenity عالية من الكسب غير المشروع المعوية. وجود وبالقرب من العديد من commensals ومسببات الأمراض في الأمعاء يفسر شدة الإنتان الحلقات مرة واحدة للخطر سلامة الغشاء المخاطي الكسب غير المشروع (على سبيل المثال، رفض). للمضي قدما في مجال البيانات وزرع الأمعاء multiorgan أكثر المتولدة من النماذج الحيوانية موثوقة ومجدية هو مطلوب. تقديم نموذج يجمع بين كل من الموثوقية وهنا الجدوى متى تم انشاؤه بطريقة موحدة ويمكن أن توفر معلومات قيمة في مجمع آليات الكامنة، الجزيئية الخلوية والوظيفية التي يتم تشغيلها بواسطة زرع الأمعاء. وقد استخدمنا بنجاح وصقل الإجراءات الموصوفة على مدى أكثر من 5 سنوات في مختبرنا 8-11. وإن الرب القائم على الفيديو الشكل هو مفيدة بشكل خاص للتدليل على اإلجراءات المعقدةوتجنب المزالق dure الأولية للجماعات تخطط لإنشاء نموذج القوارض مثلي التحقيق زرع الأمعاء.

Protocol

1. عملية المانحة

  1. يجب أن تبقى الفئران المانحة الصوم لمدة 24 ساعة (حرية الوصول إلى المياه / الجلوكوز الحل).
  2. للحث على Isoflurane التخدير عن طريق الاستنشاق، وتبدأ مع 2٪ على مستوى رذاذ، ومن ثم خفض إلى 1٪ بعد تنفيذ البطن. أداء قليل إصبع القدم للتحقق من التخدير.
  3. حلق البطن وتنظيف الجلد مع الإعدادية 3 مرات (Kodan). ثم إجراء شق تحت الجلد بعد إعطاء متوسط ​​للمسكن.
  4. بعد ملفوفة في شاش الكسب غير المشروع غارقة المالحة، فصل الالتصاقات الفسيولوجية بين البنكرياس والقولون الصاعد بلطف مع Q-تلميح (تحت المجهر الجراحي مع التكبير 6X).
  5. Ligate وتقسيم السفن مغص اللفائفية والحق والشرق باستخدام الحرير 7-0. بعد نشر القولون الصاعد إلى الجانب الأيمن من الوريد المساريقي العلوي (SMV)، يمكن تحديد الأوعية مغص اللفائفية والأيمن والأوسط لربط وتقسيم باستخدام 7-0 العلاقات بين البلدين.
  6. سحب المعدة إلى أعلى، بحيث يتم تقويمها على SMV بأكملها وعرضة للخطر. استخدام المشبك البعوض لتراجع. وعقد المشبك من الكتلة البلاستيسين شكلت في شكل حسب الحاجة.
  7. Ligate وتقسيم الأوردة البنكرياس الإثنى عشر القادمة من SMV. يجب على كل صغيرة البنكرياس الإثنى عشر القادمة من الأوردة التي تم تحديدها بعناية SMV، ligated مع الحرير و7-0 مقسمة قبل أن يتم إزالة الأنسجة البنكرياس من الكسب غير المشروع.
  8. Ligate وتقسيم النسيج الضام تفقد بما في ذلك جميع الأوعية اللمفاوية بين SMV والشريان الأورطي البطني. مع الكسب غير المشروع لا يزال في الجانب الأيمن من البطن، وفقدان النسيج الضام بما في ذلك جميع الأوعية اللمفاوية بين SMV والشريان الأورطي البطني يمكن الوصول إليها. يجب ligated هذا النسيج الضام باستخدام الحرير 7-0 وينقسم إلى تجنب ثر اللمف بعد الجراحة من الكسب غير المشروع المعوية.
  9. Ligate وتقسيم الشريان الكلوي الحق. بعد تقسيم النسيج الضام، الشريان الكلوي يصبح الحق ميسرةوligated ه وتقسيم واستخدام 7-0 الحرير.
  10. heparinise للنظام الفئران باستخدام 200 وحدة من الهيبارين الرابع عن طريق الوريد القضيب.
  11. Ligate الشرايين الهامشية، وتقسيم الأمعاء الدقيقة عند تقاطع الإثناعشري صائمية وعلى محطة الدقاق.
  12. والشريان الأورطي ligated بشكل قريب إلى أصل SMA. ومقطوع الوريد البابي عند التقاء مع الوريد الطحالي. ثم يتم حصادها الكسب غير المشروع مع يتألف من عنيق الأوعية الدموية في الجزء SMA مع الأبهر.

2. Backtable الداخلي

  1. يروي الكسب غير المشروع باستخدام 3 مل من جامعة ويسكونسن الحل (UW) في 4 درجات مئوية عبر قناة ري الأبهر وتجويف الأمعاء من نهاية صائمية مع 30 مل من محلول N-Nebacetin البولية عند 4 ° C (التجويف الري إلزامي) .

مباشرة بعد استخراج الكسب غير المشروع، يتم استخدام قناة الأبهر لنضح مع 3 مل حل UW مبردة. لهذا، 20 قسطرة الرابع G علىيتم استخدام حقنة 10 مل. وجوب مراعاة سائل الإرواء بالتدفق بحرية من الوريد البابي المقسمة. للري المعوية مع Nebacetin، يتم استخدام حقنة 50 مل.

  1. تخزين الكسب غير المشروع في حل UW في C ° 4 أثناء إعداد المتلقي.

3. المتلقي عملية

  1. يجب أن تبقى الفئران المتلقية صيام 24 ساعة (حرية الوصول إلى المياه / الجلوكوز الحل).
  2. للحث على Isoflurane التخدير عن طريق الاستنشاق، وتبدأ مع 2٪ على مستوى رذاذ، ومن ثم خفض إلى 1٪ بعد تنفيذ البطن. أداء قليل إصبع القدم للتحقق من التخدير.
  3. حلق البطن وتنظيف الجلد مع الإعدادية 3 مرات (Kodan). ثم إجراء شق متوسط ​​من تحت الجلد بعد إعطاء SC كاربروفين ملغ / كغ (5) لتسكين أثناء العملية.
  4. التفاف الأمعاء المتلقي العادي في الشاش غارقة المالحة ووضعه على صدره المستلم.
  5. فتح خلف البريتوان بصراحة مع Q-نصائح، وفضح abdomiونال الأبهر الوريد الأجوف السفلي أقل بقليل من السفن الكلوي وصولا الى مستوى الأوعية الحرقفية، إذا لزم الأمر أيضا استخدام microscissors. Ligate في tribuaries صغيرة أسفل الظهر والعمود الفقري من الشريان الأورطي والوريد الأجوف باستخدام الحرير 7-0 لتجنب فقدان الدم. (للقيام بذلك، قم بتغيير تكبير الميكروسكوب الجراحي لل16X).
  6. عبر المشبك الشريان الأورطي وIVC أدناه السفن الكلوي الأيسر قريب وفوق التشعب الحرقفي باستخدام مقاطع microvessel بشكل أقصى. يتم استخدام واحد فقط المشبك قريب وكذلك بشكل أقصى للقضاء على حد سواء سفن في وقت واحد. شق كل السفن التي تستخدم الأمامية لmicroknife وتغسل الدم المتبقية.
  7. إنشاء مفاغرة نهاية إلى الجانب بين الجزء الأبهر والشريان الأبهر الكسب غير المشروع المستلم infrarenal باستخدام المستمر خياطة البرولين 10-0 .. في البداية، يتم وضع الكسب غير المشروع على الجانب الأيمن من البطن (رئيس الفئران وضعه عند الساعة 12 ظهرا) لتنفيذ غرز الجدار الخلفي للمفاغرة شريانية وتعادل للخياطة أقل الإقامة. الEN، يتم تشغيل الكسب غير المشروع إلى الجانب الأيسر من البطن (رئيس الفئران وضعه في الساعة 9 صباحا) لفضح وخياطة الجدار الأمامي للمفاغرة.
  8. يتم إجراء مفاغرة نهاية إلى الجانب بين الوريد البابي والكسب غير المشروع IVC المستلم أيضا عن طريق تشغيل الغرز باستخدام 10-0 البرولين. مع الفئران جانبية لا يزال الكذب (الرأس في موضع الساعة 9)، يتم وضع الكسب غير المشروع على الجانب الأيسر من البطن ويتم وضع خياطة أقل الإقامة. بدء تشغيل مفاغرة مع الجدار الخلفي من داخل السفينة. بعد ربط الخيط أقل الإقامة، يمكن إجراء غرز الجدار الأمامي من الخارج.
  9. إزالة المشابك البعيدة الأولى، تليها المشابك العليا. يتم التحكم من قبل أي نزيف تفاغري الضغط المباشر باستخدام Q-نصائح. يجب فحص الكسب غير المشروع لضخه متساوية وسريعة.
  10. يقطع الأمعاء المتلقي الصغير كامل بعد ربط الأوعية المساريقي. المجموع الفرعي المتلقين الخضوع اقتطاع الأمعاء، والحفاظ على 2-3 سم من بروximal الصائم واللفائفي من 1 سم البعيدة.
  11. استعادة استمرارية المعوية عن طريق الداني (jejuno-فغر الصائم) والبعيدة (فغر اللفائفي اللفائفي) من طرف الى طرف anastomoses المعوية باستخدام طبقة واحدة توقف خياطة مع Monocryl 6-0. وهناك حاجة إلى نحو 16 خيوط لإكمال anastomoses.
  12. ري التجويف البريتوني بمحلول ملحي طبيعي حتى نظيفة. 2 مل من إدارة الغشاء البريتونى المالحة العادية لاستبدال السوائل. ثم أغلق البطن باستخدام الخيط المستمر مع 3-0 Vicryl للطبقة العضلات بالإضافة إلى خياطة الجلد المستمر.
  13. وينبغي في فترة ما بعد الجراحة أن تبقى الفئران الصيام (مع إمكانية الحصول على المياه ومحلول الجلوكوز) لآخر على مدار 24 ساعة ثم إعادة تشغيل على مستوى تشاو الجرذان والمياه libitum الإعلانية. ينبغي أن تدار مع تسكين كاربروفين لمدة 3 أيام (انظر أدناه الجرعة).

النتائج

بعد العملية الجراحية الاعتيادية

ينبغي أن الحيوانات المزروعة التعافي سريعا من الإجراء تحت مصباح الحرارة لحوالي 1 ساعة. انخفاض حرارة الجسم هو أحد الأسباب الرئيسية لوفيات ما بعد الجراحة وينبغي تجنب بعناية داخل وبعد العمل الجراحي. يج...

Discussion

في حين وصفت نماذج زرع الأمعاء في الفئران في وقت مبكر كما هو الحال في ال 5 1970ies معظم النماذج المستخدمة مؤخرا تنطوي على زرع الأمعاء منتبذ باستخدام تقنيات مختلفة 13. في حين أن الإجراءات منتبذ بشكل عام لديها ميزة التقنيات المجهرية أسهل وأسهل الوصول إلى الكسب غي?...

Disclosures

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
اسم كاشف شركة كتالوج رقم التعليقات (اختياري)
جامعة ويسكونسن (UW) الحل (ViaSpan) بريستول مايرز سكويب
البولية-N Nebacetin الحل NYCOMED 6967855
الأمبيسلين راتيوفارم
كاربروفين (Rimadyl) شركة فايزر
البرولين 10-0 خياطة unresorbable Ethicon
Monocryl 6-0 خياطة resorbable Ethicon
Vicryl 3-0 خياطة resorbable Ethicon
رابعا قسطرة G 20 مم 1.1x33 براون
رابعا قسطرة مجموعة ال 22 مم 0.9x25 براون
Kodan بالبشرة الإعدادية Schülke
كلوريد الصوديوم 0.9٪ حل تسريب براون
ملقط المنحني الصغيرة FineScienceTools 11009-13
ملقط المنحني الصغيرة AESCULAP BD 333
ملقط المنحني الصغيرة AESCULAP FD281R
ملقط الدقيقة على التوالي 1 WPI 5
ملقط الدقيقة على التوالي 2 WPI 2
الدقيقة إبرة حامل WPI 14081
مقص الصغيرة FineScienceTools 15006-09
الدقيقة مشرط MANI العيون سكين
المشابك الصغيرة AESCULAP FB329R

References

  1. Abu-Elmagd, K. M., et al. Five Hundred Intestinal and Multivisceral Transplantations at a Single Center: Major Advances With New Challenges. Ann. Surg. 250 (4), 567-56 (2009).
  2. Berney, T., et al. Portal versus systemic drainage of small bowel allografts: comparative assessment of survival, function, rejection, and bacterial translocation. J. Am. Coll. Surg. 195 (6), 804 (2002).
  3. Fishbein, T. M. Intestinal transplantation. N. Engl. J. Med. 361 (10), 998 (2009).
  4. Hernandez, F., et al. Is portal venous outflow better than systemic venous outflow in small bowel transplantation? Experimental study in syngeneic rats. J. Pediatr. Surg. 40 (2), 336 (2005).
  5. Monchik, G. J., Russell, P. S. Transplantation of small bowel in the rat: technical and immunological considerations. Surgery. 70 (5), 693 (1971).
  6. Murase, N., et al. Graft-versus-host disease after brown Norway-to-Lewis and Lewis-to-Brown Norway rat intestinal transplantation under FK506. Transplantation. 55 (1), 1 (1993).
  7. Murase, N., et al. Immunomodulation of intestinal transplant with allograft irradiation and simultaneous donor bone marrow infusion. Transplant Proc. 31 (1-2), 565 (1999).
  8. Pech, T., et al. Perioperative infliximab application ameliorates acute rejection associated inflammation after intestinal transplantation. Am. J. Transplant. 10 (11), 2431 (2010).
  9. Schaefer, N., et al. Resident macrophages are involved in intestinal transplantation-associated inflammation and motoric dysfunction of the graft muscularis. Am J Transplant. 7 (5), 1062 (2007).
  10. Schaefer, N., et al. Mechanism and impact of organ harvesting and ischemia-reperfusion injury within the graft muscularis in rat small bowel transplantation. Transplant. Proc. 38 (6), 1821 (2006).
  11. Schaefer, N., et al. Acute rejection and the muscularis propria after intestinal transplantation: the alloresponse, inflammation, and smooth muscle function. Transplantation. 85 (10), 1465 (2008).
  12. Xue, L., et al. Surgical experience of refined 3-cuff technique for orthotopic small-bowel transplantation in rat: a report of 270 cases. Am. J. Surg. 198 (1), 110 (2009).
  13. Zhang, X. Q., et al. Simplified techniques in rat heterotopic small bowel transplantation. Transplant. Proc. 38 (6), 1840 (2006).
  14. Zhao, Y., et al. The establishment of a new en bloc combined liver-small bowel transplantation model in rats. Transplant. Proc. 39 (1), 278 (2007).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

69 orthotopic

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved