قياس درجة حرارة الجسم الماوس استخدام الأشعة تحت الحمراء الحرارة خلال تاق الجهازية السلبي وتقييم الحساسية الغذائية

Summary

هنا نقدم طريقة جديدة لقياس دقة الاختلافات في درجة الحرارة الجسم في تاق الجهازية السلبي (PSA) والحساسية الغذائية الماوس نماذج استخدام حرارة الأشعة تحت حمراء. تم تكرار هذا الإجراء بدقة في السابق بي إس أية نتائج.

Abstract

قياس درجة حرارة الجسم الماوس من الأهمية بالنسبة للتحقيق في الحساسية وأعراض تحسسي. المسابر المستقيم لقراءات درجة الحرارة الشائعة، وأنها قد أثبتت أن تكون دقيقة ولا تقدر بثمن في هذا الصدد. ومع ذلك، يتطلب هذا الأسلوب لقياس درجة الحرارة الفئران أن تخديره من أجل إدراج التحقيق دون أذى للحيوان. وهذا يحد من القدرة على مراقبة أخرى تعمل الماوس في وقت واحد. من أجل التحقيق الأخرى تعمل أثناء قياس درجات الحرارة، المسابر المستقيم ليست مثالية، والمطلوب هو أسلوب آخر. هنا، علينا الأخذ بأسلوب موسع لقياس درجة الحرارة التي التعويضي الشرط للتخدير الماوس مع الحفاظ على موثوقية متساوية لتحقيقات المستقيم في قياس درجة حرارة الجسم. ونحن نستخدم حرارة الأشعة تحت حمراء التي يكشف الجسم درجات الحرارة السطحية في يتراوح بين 2 و 150 مم. هذا الأسلوب لقياس درجة حرارة الجسم النجاح في تكرار موثوق اتجاهات تغير درجة الحرارة أثناء تجارب الحساسية المفرطة نظام سلبي في الفئران. ونحن تبين أن درجات الحرارة السطحية في الجسم حوالي 2.0 درجة مئوية أقل من قياسات مسبار المستقيم، ولكن درجة انخفاض درجة الحرارة ويتبع نفس الاتجاه. وعلاوة على ذلك، يمكننا استخدام نفس الأسلوب لمراقبة الفئران في نموذج الحساسية غذائية لتقييم مستويات درجة الحرارة والنشاط في نفس الوقت.

Introduction

تم قياس درجة حرارة الجسم جزءا أساسيا من رصد آثار أعراض تحسسي في الحيوان نماذج^1،2. الاختلافات في درجة الحرارة قيست تقليديا بالحرارة المسبار المستقيمي في الفئران^3،4. مع هذه القياسات، محققين موثوق قد يصور الاختلافات في درجة الحرارة بين المتغيرات؛ ومع ذلك، هذا الأسلوب هو إجراء يستغرق وقتاً طويلاً ويسبب الضيق للفئران، التي يمكن أن تزيد من درجة حرارة الجسم الأساسية. سبر المستقيم يمكن أيضا أن يسبب الإصابة وتمزق الأغشية المخاطية³. وعلاوة على ذلك، ينبغي أن تخديره الفئران من أجل إدراج معاملة إنسانية المسبار المستقيمي لقياس درجة الحرارة³. هذه عملية بطيئة، ويحظر بقياس درجات الحرارة المتعاقبة خلال فترة قصيرة من الزمن. وعلاوة على ذلك، لا يمكن ملاحظة تعمل نشاط الفئران خلال هذا الوقت حتى المخدر هو تماما بليت، وهي عملية تستغرق وقتاً طويلاً آخر. في الآونة الأخيرة، استخدمت أساليب أخرى يمكن الاعتماد عليها لقياس درجة حرارة الجسم العلامات مرسل الأشعة تحت الحمراء السلبية مزروع تحت الجلد أو أجهزة البث الإذاعي التي تشمل درجة حرارة استشعار^3،،من⁵⁶. على الرغم من أنها مقبولة كممارسة مثالية ببعض الباحثين، لا يتم استخدام هذه الأساليب على نطاق واسع بسبب ارتفاع التكاليف الأولية والشدة للفئران، بسبب العمليات الجراحية زرع جهاز استشعار درجة الحرارة تحت الجلد أو جزء آخر من الجسم.

من أجل إثبات أن فرق في درجة حرارة انعكاس دقيق للأعراض في مرض نموذج^1،2، الفئران يجب أن تكون مستيقظا أثناء قياس درجة الحرارة وتكون قادرة على العودة إلى نشاطهم المظهرية العادية مباشرة قبل وبعد القياس. وتحقيقا لهذه الغاية، سعينا لأسلوب الذي يمكن أن يتحقق هذا.

وكان هدفنا دقة وبتكلفة زهيدة قياس درجة حرارة الجسم الماوس، دون الحاجة للتخدير ودون فرض قيود على النشاط، لتمكين المراقبة السلوكية تعمل أثناء وبعد الوقت لقياس درجة الحرارة. ولتحقيق هذا الهدف، كان من الواضح أن تقنية أقل الغازية من يسبر درجة حرارة المستقيم القياسية المطلوبة. استخدمت الأشعة تحت الحمراء الحرارة لعدة عقود في الطب السريري، لا سيما في طب الأطفال، للحصول على قراءات دقيقة درجة الحرارة. وكان أسلوب بديل التي سمحت للأطباء بسرعة ودقة الحصول على قياسات درجات الحرارة عند الرضع والأطفال صعب أن نشاط متحركة. تنفيذ هذا الأسلوب نفسه في الفئران، وقد تطورت طريقة ناجحة للحصول على درجات حرارة دون تخدير. الأهم من ذلك، نحن تبين أن هذه الطريقة قادرة على تكرار نتائج تاق المنهجية السلبية الراسخة فيما يتعلق بالتغيرات في درجات الحرارة، في حين يجري أيضا قادرة على مراقبة نشاط الماوس في جميع أنحاء القياس. وعلاوة على ذلك، يمكننا استخدام نفس الأسلوب لتقييم درجات حرارة الجسم من الفئران حساسية الغذاء، أثناء التحقيق في نفس الوقت الأعراض الأخرى، لإثبات أن درجة حرارة الجسم هو في الواقع انعكاسا دقيقا لمستوى النشاط والنمط الظاهري عموما من الماوس.

Protocol

بموافقة جميع التجارب على الحيوانات بالعناية بالحيوان واستخدام اللجنة للمعهد لاخويا للحساسية وعلم المناعة.

1-الماوس قياس درجة حرارة الجسم أثناء أنيسثيتيزاتيون

1. ضع الماوس في مربع تحريض تخدير. تخدير باستخدام التدفق 1 لتر في الدقيقة للأوكسجين مع إيسوفلوراني 5%.
   ملاحظة: أنيسثيتيزيشن هو تأكيد عند الماوس يتوقف عن الحركة الطوعية وكانت غير متحركة لأكثر من 30 س. بدلاً من ذلك، رصد معدل التنفس، ومجرد التنفس الفئران في التنفس 1 لكل 2 s أو لم يعد، هو تأكيد أنيسثيتيزيشن.
2. أمسك الماوس بمؤخر العنق بالسبابة والإبهام وعقد الذيل مع إصبع الخنصر من أجل فضح أسفل البطن.
3. ضع جهاز استشعار الأشعة تحت الحمراء الحرارة أسفل أسفل البطن أثناء الضغط بالماوس مع الهيئة موازية للأرض.
   ملاحظة: يجب أن يكون شقة السطح الخارجي للحرارة (لا على سطح جهاز الاستشعار) حوالي 2 – 5 ملم بعيداً عن سطح البطن. قياس هذه النتائج نسخ متماثل لدرجات الحرارة في حين لم يتم تخديره الفئران (كما هو موضح في القسم 2). من المهم تحديد موقع الهدف من البطن. هدف بين اثنين حلمات العليا يسمح لنتائج متسقة.
4. اضغط على الزناد لقياس درجة الحرارة. ضمان إجراء الماوس والحرارة مستقرة.

2. الماوس قياس درجة حرارة الجسم دون مخدر

1. التقاط الماوس في منتصف الذيل.
2. تعرض البطن للماوس.
   1. تسمح الماوس إلى التمسك بسطح مستقيم الحافة، مثل الشفة قفص مفتوحة أو أعلى القفص مع فوريباوس به.
      ملاحظة: هذا يسمح الماوس لتمتد في الجزء العلوي من الجسم، وتعرض في البطن.
   2. بدلاً من ذلك، السماح للماوس على الإبقاء على التوالي-الحافة العلوية من الحرارة وجعل الماوس الجلوس على السطح الخارجي للحرارة مع البطن شقة فقط على مدى استشعار الأشعة تحت الحمراء.
      ملاحظة: أي وقت يستريح آثار أقدام هند على سطح الحرارة، ضمان أن القدمين هي عدم عرقلة المجس من سطح البطن. الحرارة مع عرقلة القدم سيتم قياس درجة حرارة أقل من البطن.
3. اضغط على الزناد لقياس درجة الحرارة.
   ملاحظة: الفئران تميل إلى التحرك؛ العناية في قياس نفس الموقع من الجسم دائماً بأخذ قياسات درجات الحرارة عند الفئران نسبيا أقل المتنقلة.

3. تاق النظامية السلبي⁷

1. اليوم 0: توعية مع الغلوبولين المناعي ه (IgE).
   1. إعداد 200 ميليلتر (للماوس) لمكافحة--دينيتروفينيل (DNP) فريق الخبراء الحكومي الدولي بتركيز 100 ميكروغرام/مل في برنامج تلفزيوني.
   2. إينترابيريتونيلي حقن 200 ميليلتر لفريق الخبراء الحكومي الدولي مكافحة--دينيتروفينيل (DNP) أعد الخطوة 3.1.1 أو برنامج تلفزيوني فقط (برنامج تلفزيوني فقط التحكم بسلبية). استخدام إبرة ز 26 للحقن. إجراء الحقن الأفقي فقط إلى خط الوسط، تقريبا بين حلمات أقل شأنا آخر اثنين.
2. اليوم الأول: الحث على الحساسية المفرطة مع إدارة التخطيط الوطني يمتلكهما.
   1. إعداد 100 ميليلتر (للماوس) من يمتلكهما التثقيف بتركيز 10 ملغ/مل في 0.9% كلوريد الصوديوم.
   2. تخدير الفئران كما هو موضح في الخطوة 1، 1.
   3. قياس درجة حرارة الجسم باستخدام الأسلوب الموصوفة في الخطوة 1.
   4. حقن الوريد 100 ميليلتر من إدارة التخطيط الوطني-يمتلكهما إعدادها في الخطوة 3.2.1. استخدام إبرة 30 غم للحقن. إجراء الحقن في الجيوب الوريدية ريتروربيتال. أدخل الإبرة على الجانب الآنسي للعين بزاوية ضحلة، تسعى وراء العين.
   5. بعد الحقن، وضع الفئران في أقفاص فردية. ضمان أن الفئران التعافي من التخدير. نلاحظ أن توقظ وتصبح متحركة طوعا.
   6. قياس درجة حرارة الجسم باستخدام الأشعة تحت الحمراء الحرارة ومراقبة نشاطهم كل 10 دقائق لمدة 70 دقيقة.

4-نموذج الماوس للغذاء الحساسية^8،9

ملاحظة: يظهر التخطيطي في الشكل 2.

1. اليوم 0: توعية الفئران مع البويضات/الشب.
   1. إعداد 100 ميليلتر (للماوس) من البويضات (0.5 ملغ/مل) والألمنيوم (10 مغ/مل) معا في برنامج تلفزيوني. دوامة في الإعداد منخفضة لمدة 30 دقيقة.
   2. تخدير الفئران كما هو موضح في الخطوة 1، 1.
   3. باستخدام إبرة ز 26، إينترابيريتونيلي بحقن كل الماوس مع 100 ميليلتر من خليط البويضات/الشب إعدادها في الخطوة 4.1.1.
      ملاحظة: دوامة الخليط البويضات/الشب مرة أخرى، بإيجاز قبل كل حقنه، لأفضل ضمان مخلوط المتجانس. راجع الخطوة 3.1.3 للحصول على التفاصيل في موقع الحقن.
   4. بعد الحقن، وضع الفئران في اقفاصها الأصلية. ضمان أن الفئران التعافي من التخدير. نلاحظ أن توقظ وتصبح متحركة طوعا.
2. اليوم 14: القيام توعية ثانية مع البويضات/الشب.
   1. كرر الخطوات 4.1.1 و 4.1.2 4.1.3.
3. أيام 28-46: تحدي الفئران مع البويضات كل يوم.
   1. إعداد 100 ميليلتر (للماوس) من البويضات بتركيز 250 ملغ/مل في برنامج تلفزيوني.
      ملاحظة: الخليط ينبغي أن تدلي بها هزاز جيئة وذهابا برفق باليد بدلاً من دوامة للتقليل من تشكيل فقاعة.
      1. في حالة استخدام مثبطات الحساسية الغذائية، تعد مثبطات⁹. إعداد 100 ميليلتر (للماوس) للمانع بتركيز 1 ملغ/مل في برنامج تلفزيوني. وهذا ما يسمح تسليم 100 ميكروغرام من مثبط لكل الماوس.
         ملاحظة: لا تتجاوز 100 ميليلتر من مثبط للماوس، كما الفئران فقط قادرة على التعامل مع 200 ميليلتر من حجم تزقيمية مدتها الإجمالية خلال يوم واحد التحديات. ما يلزم للبويضات والتحدي، فضلا عن 100 ميليلتر، 100 ميليلتر هو الحد الأقصى الموصى بها وحدة التخزين لاستخدام المانع.
   2. تخدير الفئران كما هو موضح في الخطوة 1، 1.
   3. شفويا تزقيمية كل الماوس مع 100 ميليلتر من البويضات الحل (25 ملغ البويضات في 100 ميليلتر من برنامج تلفزيوني جافاجيد الواحدة والماوس) التي تم إعدادها في الخطوة 4.3.1.
      1. في حالة استخدام مثبطات، تستخدم نفس التقنيات الموضحة في الخطوات التالية من أجل تزقيمية المانع (أو مراقبة برنامج تلفزيوني) أعد الخطوة 4.3.1.1 30 دقيقة قبل التحدي البويضات. بعد 30 دقيقة، انتقل إلى الخطوة التالية.
      2. استخدام إبرة تزقيمية مع حقنه 1 مل. يستغرق 100 ميليلتر من البويضات في المحاقن.
      3. أدخل الإبرة في الفم. تشير الإبرة نحو اليسار أو الجانب الأيمن من الحلق، الشريحة، ثم بلطف الإبرة عن طريق المريء. حقن 100 ميليلتر من البويضات.
         ملاحظة: للتأكد من أن الإبرة ليس في القصبة الهوائية، مراقبة نشطة التنفس قبل حقن البويضات. كما ستلقى مقاومة إدخال الإبرة مبكرا إذا كان قد دخل القصبة الهوائية بدلاً من المريء.
   4. وضع الفئران في اقفاصها الفردية. لسهولة مراقبة نوعية البراز، استخدام الأقفاص دون فراش.
   5. ضمان التعافي من التخدير. ويلاحظ أن الفئران توقظ وتصبح متحركة طوعا.
   6. قياس درجات حرارة الجسم من الفئران في تيميبوينتس 10 و 20, 40، و 60 دقيقة باستخدام الأسلوب الموصوفة في المقطع 2.

النتائج

تاق الجهازية السلبي: لحقن رابعا، أسبوع 10 القديمة من الإناث بالب/ج الفئران تم تخديره. قبل الحقن، قمنا بقياس على درجة حرارة الجسم (فيديو 1) كما هو موضح في الخطوة 1. ويبين الشكل 1 الاتجاه درجة الحرارة لكل السكان بعد حقن الرابع. فريق الخبراء الحكومي الدو...

Discussion

بروتوكول وصف أنشئت بهدف قياس درجة حرارة الجسم دون استخدام التخدير. وعلى الرغم من سهولة نسبية مع درجة الحرارة التي يمكن الحصول على قراءات، هناك العديد من المحاذير التي تستوعب هذه التقنية، بالإضافة إلى آثار أكثر وضوحاً مثل التعامل مع الإجهاد ودرجات الحرارة المحيطة مختلفة.

أ?...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Non-contact infrared thermometer	SinoPie	DT-8861
Anti-dinitrophenyl (DNP) IgE	Sigma Aldrich	D8406-.2MG
PrecisionGlide 30 G needle	BD	305128
PrecisionGlide 26 G needle	BD	305111
1 mL syringe	BD	309659
Dinitrophenyl - human serum albumin	Biosearch Technologies	D-5059-10
Ovalbumin from chicken egg white	Sigma Aldrich	A5503-50G
Imject Alum	ThermoFisher Scientific	77161
Animal Feeding Needles, disposable	Fisher Scientific	01-208-87