الحفاظ على التبرع بالخنازير بعد الموت أثناء الدورة الدموية (DCD) الكبد عن طريق التروية وزراعة الكبد بتقويم العظام

Summary

يحدد هذا البروتوكول منهجية إنشاء نموذج خنزير باستخدام التروية الآلية التي يتم التحكم فيها بدرجة حرارتها المتغيرة (MP) للحفاظ على الكبد المتبرع ، متبوعا بزراعة الكبد تقويم العظام (OLTx). يهدف إلى تعزيز معدل نجاح OLTx باستخدام كبد التبرع من المتبرع بعد موت الدورة الدموية (DCD) وإنشاء نموذج مستقر.

Abstract

يؤدي التخزين البارد التقليدي الثابت (SCS) إلى تفاقم الإصابة الإقفارية في كبد DCD ، مما يؤدي إلى مضاعفات خطيرة لمتلقي الزرع. لمعالجة هذه المشكلة ، يجري التطبيق السريري لتقنية MP للحفاظ على كبد المتبرع. في الوقت نفسه ، تتركز الجهود على تطوير أدوات MP المختلفة ، والتي تم التحقق من صحتها من خلال تجارب النماذج الحيوانية ذات الصلة. تلعب التجارب الكبيرة الفعالة على دورا محوريا في التطبيقات السريرية. ومع ذلك ، لا تزال هناك تحديات في الحفاظ على كبد DCD خارج الجسم الحي وإجراء الزرع في الخنازير. تشمل هذه العقبات معالجة الحفاظ على كبد المتبرع لفترات طويلة ، وإجراء اختبارات الجدوى ، والتخفيف من الإصابات الإقفارية ، وتقصير مرحلة انعدام الكبد. يسهل استخدام جهاز MP متغير يتم التحكم في درجة حرارته الحفاظ على كبد DCD لفترات طويلة من خلال أوضاع التروية المزدوجة المؤكسجة منخفضة الحرارة (DHOPE) وأنماط التروية الآلية الطبيعية (NMP). يعزز هذا البروتوكول نموذج OLTx الخنازير من خلال تحسين جودة كبد DCD ، وتحسين تقنية مفاغرة ، وتقليل مدة مرحلة انعدام الكبد.

Introduction

تظل زراعة الكبد هي العلاج العلاجي الوحيد لأمراض الكبد في مراحله النهائية وسرطانات الكبد المختارة. على الرغم من التقدم الكبير في المشتريات والحفظ والتقنيات الجراحية وتثبيط المناعة بعد الزرع ، لا يزال معدل الوفيات ملحوظا قائما بين المرضى المدرجين في قائمة الانتظار بسبب نقص أعضاء المتبرعين المناسبة. يكمن التحدي الأساسي في الحفاظ على الكبد الذي تم شراؤه من DCD ، حيث تتطلب هذه الأعضاء رعاية متخصصة للتخفيف من الإصابات الإقفارية¹. يوفر نضح آلة الكبد خارج الجسم الحي طريقة فريدة للحفاظ على وتقييم ترقيع الكبد DCD قبل الزرع². أكدت التجارب السريرية جدوى وسلامة نضح آلة الكبد خارج الجسم ا....

Protocol

أجريت جميع التجارب على وفقا لقانون الإدارة التجريبية للحيوانات (وزارة العلوم والتكنولوجيا في جمهورية الصين الشعبية ، 2017). تم استخدام إناث خنازير باما المصغرة (40-45 كجم). تمت الموافقة على بروتوكول الدراسة من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدامها التابعة للمستشفى العام لقيادة المسرح الجنوبي في جيش التحرير الشعبي الصيني ، الصين. تم إيواء الخنازير في منشأة البحث لمدة أسبوع واحد قبل الزرع ثم صائمت ولكن مع حرية الوصول إلى الماء لمدة 12 ساعة قبل التجربة. تفاصيل الكواشف والمعدات المستخدمة في الدراسة مدرجة في جدول المواد.

1. اكتساب المانحين

1. تحريض التخدير والتسكين الألم:....

النتائج

خضعت كبد DCD لإجراء DHOPE-NMP كإجراء وقائي قبل زرعها في الخنازير المتلقية. كان إجراء DHOPE-NMP على النحو التالي: تم الحفاظ على كبد DCD (ن = 8) مع 30 دقيقة WIT في DHOPE لمدة 8 ساعات في المرحلة الأولى ، متبوعا بالنقل إلى وضع NMP لمدة 6 ساعات أخرى. بعد ذلك ، تم استخدام هذه الطعوم ل LT في متلقي الخنازي?.......

Discussion

يتم استخدام Liver MP حاليا على نطاق واسع في التجارب السريرية ، ولكن لا يزال من الضروري إجراء مزيد من الأبحاث قبل السريرية باستخدام نماذج حيوانية كبيرة^5،6. يمثل لحم الخنزير OLTx تحديات كبيرة تؤدي إلى انخفاض معدلات النجاح. تشمل هذه التحديات نقص ال.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Anesthesia respirator	Mindray,Shenzhen	WATO EX-20
Automatic biochemical analyzer	MNCHIP, China	Celercare V5
Bama female miniature pigs	Pearl Lab Animal Sci & Tech Co,Ltd (Guangdong, China).		40-45 kg
Blood gas analyzer	Abbott	i-STAT300
ECG monitor	Shenzhen Ericon Medical Equipment Co., LTD China	M-9000S
Fully automatic snowflake ice	Changshu Shenghai Electric Co., Ltd. China
Perfusate in NMP			5% Human serum albumin 100-150 mL, Whole blood 1.2-1.5 L, 2.5% NaHCO3 21 mL, 10% CaCL2 7mL , Heparin 5000 U , Cefoxltin 1 g, Metronidazole 500 mg, Sodium taurocholate 5 g, Short acting insulin 72 U, Total parenteral nutrition solution 250-500 mL.
Potal catheter	Jinxin technology,Shunde,China		Portal vein catheter for custom cannula of varying internal diameter (6-8.5 mm)
Refrigeration centrifuge	hermo Fisher Scientific - CN
The CG8/CG4 blood gas test card	Abbott
The CHEM 8 test card	Abbott
The ex vivo liver machine perfuion device	Devocean Medical Instrument Co., Ltd, Guangdong, China	DEVOCEAN-LIVER 2000	This is a multi-mode, temperature-controlled, biomimetic ex vivo liver machine perfusion device, capable of preserving the liver outside the body for 24 h
UW Cold Storage solution	Bridge to Life, Ltd., USA	Belzer UW	Liver in SCS group were preserved in UW Cold Storage solution
UW Machine Perfusion Solution	Bridge to Life, Ltd., USA	Belzer MPS	Adenine (free base) 0.68 g, Calcium Chloride (dihydrate) 0.068 g, Dextrose (+) 1.80 g, Glutathione (reduced) 0.92 g, HEPES (free acid) 2.38 g, Hydroxyethyl Starch 50.0 g, Magnesium Gluconate 1.13 g, Mannitol 5.4 g, Potassium Phosphate (monobasic) 3.4 g, Ribose, D(-) 0.75 g, Sodium Gluconate 17.45 g, Sodium Hydroxide 0.70 g, Sterile Water for Injection To 1000 mL Volume
Vacuum extractor	SMAF	DYX-2A