للبدء ، سحق المواد الطبية Pheretima و Periplaneta americana و Hirudo باستخدام مطحنة عشبية. نخل المسحوق الطبي من خلال المناخل المخدرات القياسية من رقم اثنين ورقم أربعة. اجمع المسحوق بين المناخل للحصول على مسحوق العينة المطلوب.
خذ جراما واحدا من المسحوق في أنبوب طرد مركزي بلاستيكي سعة 50 ملليلتر. أضف 20 ملليلتر من محلول حمض ثلاثي كلورو الخليك 5٪ وقم بالتجانس عند 1،000 دورة في الدقيقة لمدة دقيقة واحدة باستخدام خالط تشتت عالي السرعة. بعد التجانس ، يقوم جهاز الطرد المركزي بتجانس 1،717 جم لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة وتصفية المادة الطافية من خلال قمع زجاجي ماص مغموس بالقطن في دورق حجمي سعة 50 ملليلتر.
بعد تكرار عملية الاستخراج مرتين مع 15 و 10 ملليلتر من محلول حمض ثلاثي كلورو الخليك 5٪ ، ادمج الترشيحات وشكل الحجم إلى 50 ملليلتر بمحلول حمض ثلاثي كلورو أسيتيك 5٪. بعد ذلك ، أضف بدقة ملليلتر من محلول هيدروكسيد الصوديوم و 0.5 جرام من البارافين الصلب في قارورة 20 ملليلتر من الرأس. ثم ضعيها في فرن على حرارة 70 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة تقريبا.
أخرج القوارير واتركها تبرد إلى درجة حرارة الغرفة حتى يصلب البارافين. لمعالجة فراغ رأس العينة، أضف ملليلتر من كل محلول لاستخراج العينة إلى القوارير المحتوية على البارافين الصلب. اضغط على الغطاء وأغلق القارورة.
ضع قوارير فراغ الرأس المختومة على GCMS للقياس. للحصول على المنحنى القياسي ، قم بنضح سلسلة من ملليلتر من محلول ثلاثي ميثيل أمين القياسي أعلى طبقة البارافين الصلبة. ضع قوارير فراغ الرأس المختومة على الجهاز لقياس ثلاثي ميثيل أمين.
لإجراء اختبار الدقة ، قم بنضح ملليلتر من 0.1 ميكروغرام لكل مليلتر من محلول ثلاثي ميثيل أمين القياسي أعلى طبقة البارافين الصلبة. قم بإجراء ستة اختبارات متوازية في الجهاز باتباع تعليمات الشركة المصنعة. لتجربة معدل الاسترداد ، اخبز عدة دفعات من مسحوق العينة في الفرن حتى لا يتم اكتشاف ثلاثي إيثيل أمين في GCMS كما هو موضح سابقا.
بعد ذلك ، خذ كل جرام واحد من المسحوق المخبوز في الفرن والمسحوق القابل للصقل في أنابيب طرد مركزي بلاستيكية منفصلة سعة 50 ملليلتر. أضف 50 ميكرولترا من محلول ثلاثي ميثيل أمين القياسي إلى جميع الأنابيب واستخلصه بمحلول حمض ثلاثي كلورو الخليك بنسبة 5٪ كما هو موضح سابقا. تم العثور على وقت الاحتفاظ من ثلاثي ميثيل أمين ليكون 2.3 دقيقة مع ذروة حادة وعدم وجود تداخل من الشوائب الأخرى.
أظهرت عينات Pheretima و Periplaneta americana و Hirudo التي خضعت لاختبارات استرداد مسننة عن طريق التجفيف لتقليل ثلاثي إيثيل أمين في الأعشاب متوسط معدلات استرداد 84.49 و 94.66 و 85.67٪ على التوالي. تم الكشف عن ثلاثي إيثيل أمين في تسع دفعات من الأعشاب بتركيزات تتراوح من 13.23 إلى 271.63 ملليغرام لكل كيلوغرام.
