خذ قرص ياقوت معالج ب HPF و FSF معد مسبقا يحتوي على خلايا هيلا مستقرة ، واغسله بمحلول PBS-A لمدة خمس دقائق ، وكرر هذه العملية ثلاث مرات. انقل أقراص الياقوت إلى طبق استزراع 35 ملم يحتوي على ملليلتر واحد من المخزن المؤقت PBS-A في درجة حرارة الغرفة. استبدل المخزن المؤقت PBS-A في طبق الاستزراع بمليلتر واحد من محلول الاختزال واحتضانه لمدة ساعة في درجة حرارة الغرفة.
تحضير السلائف الذهبية في ملليلتر واحد من محلول الاختزال وتخلط على الفور عن طريق الدوامة. أضف 80 ميكرولترا من 500 مليمول D-Penicillamine في ماء مقطر مزدوج إلى محلول سلائف الذهب. وعلى الفور دوامة.
استبدل المحلول في الطبق المستزرع بمليلتر واحد من محلول السلائف الذهبية واحتضانه لمدة ساعتين عند أربع درجات مئوية. أضف 20 إلى 100 ميكرولتر من محلول بوروهيدريد الصوديوم الطازج إلى محلول سلائف الذهب ، ثم رجه على الفور لخلط جيدا ، واحتضانه لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة. استبدل المحلول بملليلتر من المخزن المؤقت PBS-A لإيقاف التفاعل.
ثم قم بإعداد خليط راتنجات الايبوكسي وفقا لتعليمات الشركة الصانعة ، ونقل أقراص الياقوت إلى كبسولات تضمين مسطحة القاع ، والتسلل بالراتنج لمدة 30 دقيقة على الأقل في درجة حرارة الغرفة. بلمرة العينة عند 60 درجة مئوية في فرن لمدة 18 ساعة على الأقل. قم بإعداد أقسام رقيقة جدا من العينة المبلمرة عن طريق تقليم كتل العينة بعناية باستخدام ماكينة حلاقة لكشف أقراص الياقوت.
اغمس أطراف الكتلة بأقراص الياقوت في النيتروجين السائل لعدة ثوان وقم بإذابة درجة حرارة الغرفة. كرر إجراء التجميد والذوبان عدة مرات لفصل الأقراص عن الكتل. ظهر بروتين EGFP-MTn-KDEL كجسيمات نانوية ذهبية بحجم 2 إلى 5 نانومتر موزعة حصريا في تجويف ER المحيطي وفي الفضاء حول النواة للغلاف النووي.
مكنت البنية الفائقة المحفوظة جيدا من تحديد جزيء واحد للبروتينات الموسومة وسهلت تحليل تفاعلات العضيات ، مثل تفاعلات الميتوكوندريا ER. حددت الجسيمات النانوية لبروتين Ost4-EGFP-MTn غشاء ER في الغشاء الخارجي للغلاف النووي. وبالمثل ، أظهرت الخلايا المعبرة عن Mito-acGFP-MTn علامات محددة في مصفوفة الميتوكوندريا.
