ابدأ بتعقيم الشرائح المطلية بالبولي تترافلوروإيثيلين ، أو الشرائح المطلية ب PTFE عن طريق غمرها في 70٪ من الإيثانول لمدة 10 دقائق في خزانة السلامة الحيوية. اترك الشرائح تجف في الهواء في طبق زراعة خلية معقم بحجم 100 ملم. ضع كل شريحة في 1 طبق جديد لزراعة الخلايا 100 ملم وأضف 200 ميكرولتر من وسط زراعة الخلايا المحتوي على المصل في كل مستطيل.
ثم ضع ضوء الأشعة فوق البنفسجية المحمول باليد 254 نانومتر على طبق زراعة الخلايا 100 ملم مع مواجهة المصباح مباشرة للشريحة لمدة 20 دقيقة. قم بإذابة القسامات المجمدة للأجزاء الخارجية ، أو OS ، في حمام مائي بدرجة حرارة 37 درجة مئوية. ثم قم بتدوير نظام التشغيل عند 2،400G لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة.
قم على الفور بشفط المادة الطافية في خزانة السلامة البيولوجية باستخدام ماصة وأعد تعليق نظام التشغيل في PBS. الآن ، قم باستنشاق الوسيط من الشرائح ووضع ما يصل إلى 500 ميكرولتر من 2 × 10 إلى نظام التشغيل الثامن لكل مليلتر حل PBS من 2 × 10 إلى 8th OS لكل مليلتر حل PBS على كل مستطيل شريحة. ضع ضوء الأشعة فوق البنفسجية المحمول باليد 254 نانومتر فوق طبق زراعة الخلايا بحيث تواجه اللمبة نظام التشغيل مباشرة لمدة 40 دقيقة.
اجمع محلول OS-PBS في أنبوب سعة 1.5 ملليلتر. اغسل مستطيل الشريحة المطلية ب 200 إلى 500 ميكرولتر من PBS واجمع كل غسلة في أنبوب الطرد المركزي الدقيق. ثم قم بتدوير حل OS-PBS عند 2،400G لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة.
نضح PBS في خزانة السلامة البيولوجية باستخدام أنبوب وإعادة تعليق الحبيبات في 500 ميكرولتر من الوسط القياسي لاستخدامها في ظهارة صبغة الشبكية ، أو مزارع RPE. ضع 10 ميكرولتر من التعليق في أنبوب طرد مركزي جديد. تمييع 50 إلى 100 مرة مع المزيد من وسط زراعة الخلايا ، وحساب نظام التشغيل مع مقياس الدم.
قم بتخفيف نظام التشغيل المؤكسد بالصور ، أو تعليق OxOS ، عند تركيز 5.6 × 10 إلى نظام التشغيل السابع لكل مليلتر في وسيط RPE قياسي. أضف روابط سد البلعمة ، والتي تسهل امتصاص نظام التشغيل وتراكم الليبوفوسين. ثم قم بقسمة OxOS في مخزون يستخدم مرة واحدة وتجمد مفاجئ في النيتروجين السائل.
قم بإذابة حصص OxOS عن طريق تخفيف القسمة المجمدة في 45 ميكرولتر من وسائط زراعة الخلايا قبل إضافتها إلى عمليات نقل RPE للحث على تراكم الليبوفوسين. ثم قم بتوصيف نظام التشغيل المؤكسد عن طريق قياس طيف انبعاث OxOS باستخدام مسح Lambda على مجهر متحد البؤر. أظهر التصوير البؤري أن نظام التشغيل المعالج قد زاد من التألق الذاتي مقارنة بنظام التشغيل غير المعالج.
