لإجراء إصابة العضل بالتبريد على أسماك الزرد ، استخدم مسبارا بالتبريد من الفولاذ المقاوم للصدأ مصنعا خصيصا. لتجنب قضمة الصقيع أثناء التعامل مع المسبار أثناء الإجراء ، أدخل مقبض المسبار في طرف ماصة وقم بتثبيته عن طريق لفه بشريط لاصق. قبل البدء في إجراء الإصابة بالتبريد ، قم بإعداد دورق لمحلول عمل التخدير ، وملعقة للتعامل مع الأسماك ، وإسفنجة رطبة ، وخزان به ماء نظام لاستعادة الأسماك بعد الإجراء.
قم بإعداد محلول مخزون التخدير باتباع الخطوات الموضحة على الشاشة. ثم أضف أربعة ملليلتر من محلول المرق المحضر إلى 100 ملليلتر من ماء النظام في دورق لتحضير محلول عمل التريكائين. لبدء إجراء الإصابة بالتبريد ، اغمر المسبار في النيتروجين السائل لمدة لا تقل عن ثلاث دقائق.
بلل الاسفنجة في ماء النظام وضعها على سطح مستو. ثم بعد دقيقة إلى دقيقتين من نقل سمكة الزرد البالغة إلى محلول عمل التريكائين ، تأكد من عدم استجابتها عن طريق لمس السمكة برفق بالملعقة. ضع السمك المخدر على الإسفنجة المبللة.
حدد موقع السويقة الذيلية الخلفية للزعنفة الشرجية والأمامية للزعنفة الذيلية. في هذه المرحلة ، قم بإزالة cryoprobe من النيتروجين السائل. هز المسبار برفق لضمان عدم بقاء النيتروجين السائل المتبقي على الطرف.
ضع حافة الملعقة عموديا على الجسم على السويقة الذيلية. احتفظ بالمسبار في هذا الوضع لمدة ست ثوان دون الضغط ، قبل تحرير المسبار بالتبريد من الأنسجة. ثم نقل الأسماك إلى ماء النظام في خزان الاسترداد.
راقب الأسماك أثناء استئنافها التنفس والسباحة بعد الاستيقاظ من التخدير. إذا لم تحدث حركات دائرية بعد 30 ثانية ، فقم بتحفيز الأسماك عن طريق سحب ماء النظام في الخياشيم حتى يبدأ الحيوان في التنفس بنفسه. كشف تسجيل الفيديو للأسماك الضابطة والمصابة بالتبريد في يوم واحد بعد الإصابة أو DPCI أنه على الرغم من أن الأسماك المصابة بالتبريد سبحت بشكل أقل نشاطا ، إلا أنها لم تظهر أي حركات غير طبيعية ، مثل الدوران أو الالتفاف أو انخفاض التوازن.
في نظام التربية ، كان وضعهم في الخزان وتناول الطعام مشابها لمواقع الأسماك غير المصابة. كما لوحظ في 5 DPCI ، كان السلوك الطبيعي لا يزال مستمرا مما يشير إلى أن إجراء الإصابة بالتبريد لم يؤثر بشدة على رفاهية الحيوانات.
