لقياس شدة التألق لخلايا HeLa المنقولة في برنامج ImageJ، انقر فوق ملف وحدد فتح. في مربع الحوار، حدد ملفات التصوير للتجربة وانقر فوق موافق. بمجرد ظهور نافذة خيارات استيراد التنسيقات الحيوية ، حدد تقسيم القنوات وانقر فوق موافق.
في تجارب رباعي ميثيل رودامين أو إستر الإيثيل أو البيركلورات أو TMRE ، YFP هي القناة الأولى ، MitoTracker هي القناة الثانية و TMRE هي القناة الثالثة. اضبط السطوع عن طريق تحديد الصورة ، ثم اضبط ثم السطوع. بعد ذلك ، قم بتحميل منطقة الاهتمام المحفوظة أو عائد الاستثمار بالنقر فوق تحليل ، ثم أدوات ، ثم مدير عائد الاستثمار.
في مدير عائد الاستثمار، انقر على المزيد، ثم افتح من القائمة وحدد عائد الاستثمار المحفوظ. ثم قم بقياس شدة الفلورسنت لخمس مناطق عشوائية في خلية واحدة عن طريق تحديد عائد الاستثمار المحفوظ من مدير عائد الاستثمار ونقل عائد الاستثمار إلى موقع عشوائي داخل الخلية. لقياس شدة التألق ، اضغط على M على لوحة المفاتيح وكرر ذلك مع أربع مناطق إضافية غير متداخلة.
عند ظهور مربع حوار يحتوي على المنطقة والقيم الرمادية المتوسطة، انسخ القيم والصقها في جدول بيانات لتحليلها. أظهرت نتائج شدة مضان TMRE و MitoSOX أن معالجتهم بعامل الفصل المعروف CCCP قلل من شدة مضان TMRE مقارنة بظروف التحكم. بالإضافة إلى ذلك ، أدى 20 ميكرومولار معالجة CCCP إلى إنتاج الأكسيد الفائق وزيادة شدة مضان MitoSOX.
في ظروف إجهاد CCCP الخفيفة أو الخمسة ميكرومولار ، أدى التعبير عن نوع Parkin البري و Parkin T240R إلى كثافة TMRE أعلى مقارنة بناقل التحكم YFP الفارغ. كانت شدة MitoSOX أقل في الخلايا التي تعبر عن نوع Parkin البري و Parkin T240R مقارنة بالخلايا التي تعبر عن ناقل التحكم YFP مما يشير إلى أن تعبير وقوف السيارات يساعد في الحفاظ على صحة شبكة الميتوكوندريا من خلال الحفاظ على إمكانات غشاء الميتوكوندريا الأعلى ومستويات الأكسيد الفائق المنخفضة.
