تحضير محلول ORO عن طريق إذابة 0.5 جرام من مسحوق ORO في 100 مل من الأيزوبروبانول لتوليد محلول مخزون. قم بإعداد محلول العمل لجميع العضلات من خلال الجمع بين محلول مخزون ORO والماء منزوع الأيونات بنسبة 60 إلى 40. قم بتغطية محلول العمل لمدة 10 دقائق للسماح للجسيمات بالاستقرار.
قم بترشيحه من خلال شبكة 40 ميكرومتر ، متبوعا بمرشح حقنة 0.22 ميكرومتر. بعد ذلك ، قم بإزالة محلول الفورمالديهايد من العضلات المنزوعة الخلايا في صفيحة البئر وغسل العضلات ثلاث مرات بحجم متساو من PBS. ثم ، استبدل PBS بحجم متساو من محلول الأيزوبروبانول بنسبة 60٪ واحتضانه على شاكر هزاز لمدة خمس دقائق.
بمجرد الانتهاء من ذلك ، استبدل محلول الأيزوبروبانول بنسبة 60٪ بمحلول عمل ORO قبل 10 دقائق من الحضانة على شاكر الهزاز. بعد ذلك ، استبدل حل عمل ORO بحجم متساو من 1٪ SDS وافحص حل SDS بشكل دوري. بمجرد أن يصبح الحل ورديا بشكل ملحوظ ، استبدل حل SDS ب 1٪ SDS جديد.
عندما يظل الحل واضحا لمدة 24 ساعة ، استبدل 1٪ SDS ب PBS. تحت مجهر ستيريو عند تكبير أربعة × ، قم بإزالة أي حطام أو جسيمات واضحة عالقة في الجزء الخارجي من العضلات الملطخة. إذا كان التلوين مرضيا ، ويظهر الكرات الحمراء الساطعة العائمة في مصفوفة شفافة ، فاحصل على صور التلوين باستخدام كاميرا متصلة بمجهر الاستريو.
كانت العضلات المنزوعة الخلايا بشكل صحيح بيضاء وشبه شفافة. عندما تم تلطيخ العضلات منزوعة الخلايا ب ORO لتصور الأنسجة الدهنية العضلية ، أو IMAT ، كانت قطرات الدهون IMAT واضحة داخل هياكل العضلات الصافية ككرات حمراء. أظهرت عضلات الأطراف الخلفية للفأر السليمة القليل من IMAT الطبيعي الذي يتضح من القليل من الدهون الحمراء أو الإيجابية مقارنة بعضلات الأطراف الخلفية المحقونة بسم القلب أو الجلسرين.
تم تحديد إزالة الخلايا غير الكاملة مباشرة بعد معالجة SDS الأولية أو بعد غسل تلطيخ ORO كألياف وردية فاتحة شبه معتمة. تم تحديد إزالة ORO غير المكتملة بعد غسل ORO كخلفية موحدة وردية أو حمراء بدلا من خطوط ألياف مميزة.
