لبدء القياس الكمي لمقاييس قطرات الدهون IMAT الملطخة ، افتح مكدسات متحدة البؤر في ImageJ. افتح واجهة مستخدم العتبة عن طريق تحديد صورة، ثم ضبط، ثم عتبة. في واجهة المستخدم ، حدد Intermodes كنوع الحد الأدنى وتأكد من تحديد الخلفية الداكنة.
ثم انقر فوق تطبيق لتشغيل خوارزمية العتبة. قم بتشغيل خوارزمية مستجمعات المياه لفصل لمس قطرات الدهون عن طريق تحديد عملية ، ثم ثنائي ، ومستجمعات المياه. حدد نعم في شاشة لمعالجة كل الصور في الرصة لإضافة خط أسود رفيع يقسم مساحات أكبر من الأبيض الصلب.
لضبط الحد الأقصى والحد الأدنى لأحجام الجسيمات ، افتح الصورة الأصلية وحدد أصغر وأكبر قطرة دهنية في العرض باستخدام الأداة البيضاوية. ثم أضف هذه الأشكال إلى مدير عائد الاستثمار عن طريق كتابة T.Select تحليل ، ثم تعيين القياسات. في مربع الحوار، حدد الإعدادات، وحدد المنطقة فقط، وانقر فوق موافق. ثم حدد قياس من مدير عائد الاستثمار.
استخدم قياسي المساحة من نافذة النتائج هذه كنطاق حجم وقم بتحليل الجسيمات. لتحديد منطقة الاهتمام ، أو عائد الاستثمار ، باستخدام خوارزمية تحليل الجسيمات. حدد تحليل، ثم تحليل الجسيمات.
يفتح مربع حوار لضبط إعدادات التحديد. لإخراج قياسات عائد الاستثمار، حدد تحليل، ثم تعيين القياسات، وحدد المساحة والسنترويد واحتواء القطع الناقص وموضع المكدس. انقر فوق موافق. ثم حدد قياس من مدير عائد الاستثمار.
يمكن تحديد البيانات الموجودة في جدول النتائج ونسخها إلى Excel لمزيد من التحليل. للحصول على تقييم مفصل لمقاييس قطرات الدهون الفردية وتوزيعها ، تم تصوير قطرات الدهون الموسومة بالفلورسنت BODIPY عبر الفحص المجهري متحد البؤر. قدمت العتبة وتجزئة الشكل تمريرة أولى جيدة لتوليد عائد استثمار لكل قطرة دهون.
ومع ذلك ، كانت هناك حاجة إلى تعديلات يدوية لتصحيح الأخطاء. يمكن إضافة قطرات الدهون العميقة ، التي بدت خافتة على الصورة ، يدويا باستخدام الأداة البيضاوية في ImageJ. يمكن أيضا تصحيح مجموعة من قطرات الدهون التي تم تحديدها عن طريق الخطأ على أنها عائد استثمار واحد عن طريق حذف عائد الاستثمار الأصلي واستبداله بعدة عائد استثمار جديد.
عندما تم تحديد قطرة دهنية واحدة على أنها عائد استثمار فريد في شرائح متعددة ، تم دمج عائد الاستثمار المكرر في عائد استثمار واحد.
