بعد تثبيت مقلة العين المنزوعة للفأر الرحيم ، قم بنقلها إلى شريحة زجاجية وضعها تحت مجهر تشريح. باستخدام الملقط ، قم بتثبيت هامش القرنية لمنع حركة مقلة العين. باستخدام مقص التشريح ، قم بقطع القرنية على عمق ملليمتر واحد تقريبا من خلال طرف القرنية الصلبة ، ثم قم بإزالة العدسة والجسم الزجاجي.
أمسك القرص البصري في المركز ، وقطع شبكية العين شعاعيا على طول الأرباع الأربعة ، لتصل إلى ما يقرب من 2/3 من نصف قطر شبكية العين. المشبك واحدة من حواف الصلبة باستخدام ملقط مسنن. أمسك حافة الصلبة بالملقط غير المسنن وانتقل من الملقط المسنن نحو قاعدة الصلبة.
قشر بعناية شبكية العين. بلل شبكية العين ب 200 ميكرولتر من برنامج تلفزيوني باستخدام ماصة. قم بإزالة PBS الزائد باستخدام ورق ماص ، وقم بتسطيح شبكية العين بفرشاة صغيرة إذا لزم الأمر.
أضف ببطء الميثانول البارد قطرة قطرة على السطح الداخلي للشبكية حتى يغطي تماما. بمجرد أن تتحول شبكية العين إلى اللون الأبيض وتطور مثابرة متزايدة ، قم بتسطيح الشبكية برفق وإزالة الشوائب ، مثل الأغشية الصبغية المتبقية والجسم الزجاجي ، باستخدام فرشاة شعيرات صغيرة. بعد قلب شبكية العين ، تعامل مع الميثانول كما هو موضح سابقا ، وانقله إلى بئر من 24 صفيحة بئر ، انقعها في الميثانول وقم بتخزينها عند 20 درجة مئوية لمدة ساعة إلى ساعتين للتلطيخ المناعي الفوري.
ثم شطف شبكية العين مع برنامج تلفزيوني بعد إزالة الميثانول من اللوحة. تم تصور خلايا عقدة الريتينول في شبكية العين قبل وبعد علاج الميثانول باستخدام الفحص المجهري متحد البؤر ، مما يشير إلى أن 12 شهرا من الحفاظ على الميثانول لم تؤثر على التلوين المناعي RGC.
