الاستعداد للتلطيخ المناعي عن طريق تشريح الأوعية الدموية السطور من الماوس وإضافة الأنسجة إلى لوحة 24 بئر تحتوي على 200 ميكرولتر من 4 ٪ بارافورمالدهيد في 1X PBS. احتضان الأنسجة لمدة 20 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. قم بإجراء غسلتين قصيرتين من 1X PBS على شاكر مداري عند عدد دورات منخفض في الدقيقة.
قم بإزالة PBS ، ثم قم بإجراء النفاذية والحجب لمدة ساعة واحدة على الأقل في درجة حرارة الغرفة في 300 ميكرولتر من محلول PBST. بعد ذلك ، قم بتلطيخ الأنسجة بالجسم المضاد الأساسي طوال الليل عند أربع درجات مئوية. ثم أضف جسما مضادا ثانويا واحتضانه لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة على شاكر مداري عند عدد دورات منخفض في الدقيقة.
قم بتغطية اللوحة لحماية الجسم المضاد الثانوي الموسوم بالفلورسنت من الضوء. بعد ذلك ، قم بإعداد شريحة صغيرة أكبر عن طريق وضع خطين صغيرين من الغراء على طول المحور 25 مم ، أصغر بقليل من انزلاق الغطاء الزجاجي 18 × 18 ملم. ضع قطرة واحدة من كاشف التركيب بين خطوط الغراء.
باستخدام ملقط رقم 55 ، قم بقص أقل قدر ممكن من الأنسجة على أحد طرفي SV ، وانقله من PBS إلى كاشف التثبيت. ضع أحد طرفي انزلاق الغطاء على الشريحة حيث تم وضع خط واحد من الغراء. ثم حرر زلة الغطاء برفق لتجنب تكوين فقاعات هواء.
أغلق الحامل عن طريق وضع قطرة من طلاء الأظافر الشفاف على كل ركن من أركان الحامل. قم بتسمية العينة الموجودة على قسيمة الغطاء الزجاجي ، بعيدا عن حقل التصور. تصور أنسجة SV تحت مجهر التشريح للتأكد من أنها مسطحة وليست بالقرب من أي فقاعات هواء.
إذا لم يتم توجيه نسيج SV بشكل صحيح ، فحاول دفع فقاعات الهواء أو قم بإزالة انزلاق الغطاء الزجاجي الأصغر بعناية وأعد وضع SV. تم إعداد حامل كامل من SV من الماوس P30 وتم إجراء تصوير متحد البؤر. لوحظ تعبير ZsGreen في الخلايا الوسيطة ، والخلايا البطانية المسماة GSIB4 ، و DAPI المسمى النوى.
