Luciferase Assay for the Detection of Autophagy Protease ATG4B

ابدأ بفتح البرنامج وتهيئة مضخة الحاقن بالنقر فوق التحكم في الموزع ، وحدد Pump 2 ، ثم النقر فوق Init. لشطف الأنبوب بالماء المتأين ، انقر فوق شطف ، ثم اضغط على التالي. حدد Pump 2 واضبط حامل الطرف على الطرف المطلوب.

ثم انقر فوق التالي مرة أخرى. انقر فوق ابدأ لبدء شطف الأنبوب. كرر الشطف بالميثانول.

وفي الوقت نفسه ، قم بإعداد محلول ركيزة عامل عن طريق تخفيف مخزون الركيزة بمقدار 1 إلى 100. أخيرا ، شطف الأنبوب مع تخفيف العمل من مخزون الركيزة في PBS. قم بتحميل اللوحة في قارئ اللوحة.

وبعد ذلك ، في إعدادات القياس ، اختر الفتحة إلى 384 لوحة فتحة تلألؤ أمريكية ، متبوعة بالمسافة بين اللوحة والكاشف إلى 0.6 ملم ، ووقت القياس 0.5 ثانية. بمجرد تسوية إعدادات القياس ، في علامة التبويب إعدادات البروتوكول العام ، حدد نوع اللوحة ك 384 Nunc ، واختر خيار ثنائي الاتجاه حسب الأعمدة كوضع القياس. أدخل 1 في علامة التبويب عدد مرات الفحص.

الآن ، في علامة التبويب الاستغناء ، حدد قياس التوزيع المطلوب. ثم اضبط وقت القياس لكل بئر لمدة ثانية واحدة وحدد المضخة المستخدمة المطلوبة. سرعة الاستغناء 200 ميكرولتر في الثانية.

وحجم الاستغناء إلى 50 ميكرولتر. اختر حجم الاستغناء كحجم تعبئة المحقنة للمضخة 2. ثم اضبط ملف ابدأ الاستغناء عند رقم القياس إلى 1.

في علامة التبويب تحديد البئر ، استخدم القائمة المنسدلة إضافة / إزالة العينات واختر نوع العينة المطلوب ، وحدد الآبار المراد قياسها. بعد ذلك ، ابدأ القياس بالنقر فوق تشغيل. تظهر إشارة التلألؤ القاعدي من DMSO في العمود 1 ، ويظهر انخفاض إشارة التلألؤ على وجود مثبط ATG4B ، FMK-9a ، في العمود 24.