ابدأ بإعداد شطيرة جل مبلمرة. قم بإزالة المشابك وطبقات الشريط الورقي ، وقم بإزالة المشط ببطء. شطف جيدا الآبار بالماء المقطر.
ضع شطيرة الجل بشكل صحيح في جهاز الكهربائي العمودي. املأ الخزانات العلوية والسفلية بمخزن TBE المؤقت. قم بتسخين الألواح عن طريق إجراء تشغيل مسبق للرحلان الكهربائي الهلامي لمدة 30 دقيقة على الأقل عند 50 واط.
وفي الوقت نفسه ، أعد تعليق العينات المجففة في خمسة ميكرولترات من المخزن المؤقت لتحميل الجل الذي تم تغيير طبيعته. بعد ذلك ، استخدم حقنة صغيرة مملوءة بمحلول TBE لطرد اليوريا من آبار الجل. الآن قم بتحميل العينات في الآبار النظيفة ، مع ملاحظة رائحة التحميل.
قم بتشغيل الجل لمدة ساعتين عند 50 واط أو حتى تنفد صبغة البروموفينول الزرقاء 2/3 من الجل. بعد الرحلان الكهربائي ، قم بإيقاف تشغيل مصدر الطاقة ، وقم بإزالة الساندويتش الزجاجي بعناية ، وتنظيف الألواح الزجاجية. ضع الجل في جهاز تصوير هلامي للكشف عن مضان نطاقات قليل النوكليوتيد التي تحمل علامة FAM.
بعد ساعة واحدة وأربع و 15 ساعة من الحضانة ، تفاعلت إما خمس أو 50 ميكرومولار Bsep 1 مع عينتين ميكرومولار من G4 TBA ، TBA أحادي الشريط ، و TBA مزدوج تقطعت بهم السبل. تم تحميل عناصر التحكم لكل مجموعة من العينات. أظهرت الركيزة G4 TBA تقريب ألكلة واحد فقط بسبب توفر G8 فقط للألكلة والانقسام اللاحق الذين تقطعت بهم السبل.
لوحظت العديد من المضافات والنطاقات من منتجات الانقسام في TBA مفرد ومزدوج تقطعت بهم السبل ، لأن جميع الجوانين كانت عرضة لتفاعل Bsep. أدى تفاعل التحقيق ومخزن تريس المؤقت إلى رسم خرائط كيميائية غير فعالة بسبب وجود النيوكليوفيليات غير المرغوب فيها ، مما تسبب في انخفاض نشاط الحس العميق. أظهرت عينات G4 TBA فقط تكوين التقريب دون انقسام تقطعت بهم السبل.
بالنسبة ل TBA الفردي والمزدوج الذي تقطعت به السبل ، أدت الحضانة لمدة 24 ساعة فقط إلى تجزئة الحمض النووي ، مقارنة بالتجزئة لمدة 15 ساعة بدون Tris.
