لإجراء تصوير الخلايا الحية لدماغ اليرقات الثالث ، ابدأ بجمع الأدمغة المقطعة والأجسام الدهنية المعزولة في البئر الأخير من طبق تشريح ثلاثة آبار يحتوي على وسيط التشريح والتصوير. ضع غشاء منفذ للغاز على ظهر الشريحة واضغط على الحلقة المنقسمة في المنتصف. باستخدام ماصة صغيرة سعة 200 ميكرولتر ، قم بنقل ما يصل إلى 10 أدمغة تشريح بأقصى قدر ممكن من الأجسام الدهنية و 130 إلى 140 ميكرولتر من الوسط إلى مركز الغشاء.
قم بتوجيه الأدمغة وفقا لعدد الخلايا الجذعية العصبية المراد تصويرها ونوع المجهر ، مما يضمن أن العينات قريبة من هدف المجهر. على سبيل المثال ، لتصوير الخلايا الجذعية العصبية في فصوص الدماغ المركزية ، تأكد من أن فصوص الدماغ هي الأقرب إلى الهدف. ثم ضع غطاء زجاجي برفق فوق المحلول على الغشاء لنشر المحلول مع أجسام الدماغ والدهون في جميع أنحاء الغشاء.
أمسك الأنسجة المختبرية عند حافة انزلاق الغطاء لمسح المحلول الزائد حتى تلمس الأدمغة انزلاق الغطاء دون أن يتم سحقها. بعد ذلك ، قم بتثبيت انزلاق الغطاء عن طريق وضع هلام البترول المنصهر على طول حوافه باستخدام فرشاة الرسم والسماح للهلام بالتصلب. أضف 400 ميكرولتر من وسيط التصوير إلى بئر في شريحة صغيرة متعددة الآبار.
نقل الأجسام الدهنية تشريح سابقا إلى هذا البئر. ثم ضع ما يصل إلى 10 أدمغة في مجموعة بالقرب من مركز البئر. توجيه الأدمغة وفقا لعدد الخلايا الجذعية العصبية المراد تصويرها ونوع المجهر.
اسمح للأدمغة بالاستقرار في البئر لمدة دقيقتين إلى خمس دقائق. قم بتغطية الشريحة الصغيرة بغطاء الشريحة قبل نقلها إلى المجهر. ابدأ عملية الاستحواذ باستخدام أقل طاقة ليزر ووقت تعرض لتقليل تبييض الصور.
كشف تصوير أدمغة اليرقات التي تعبر عن Cherry-Jupiter المدفوع بالطائرات بدون طيار والدبابيس GFP الموسومة بشكل مخنث باستخدام شرائح تصوير متعددة الآبار وبدون مكملات الجسم الدهنية أن الدبابيس شكلت هلالا قميا واضحا في تقسيم الخلايا العصبية التي تتماشى معها المغازل الانقسامية باستمرار أثناء الانقسام. في تلك العينات ، زاد طول دورة الخلية مع زيادة وقت التصوير. لم تظهر العينات التي تم تصويرها في جسم دهني مكمل بوسط على شريحة مرتبطة بالغشاء زيادة في طول دورة الخلية.
علاوة على ذلك ، لوحظت الخلايا العصبية ذات الأربعة أقسام على الشريحة المرتبطة بالغشاء لمدة 10 ساعات.
