للبدء ، احصل على 80٪ من خلايا الكبد البقري المزروعة واستبدل وسط الاستزراع ب DMEM الذي يحتوي على حمض اللينوليك. احتضان الخلايا عند 37 درجة مئوية في 5٪ ثاني أكسيد الكربون لمدة 24 ساعة لتجميع LDs. ثم قم بإزالة وسط الثقافة وغسل خلايا الالتصاق باستخدام برنامج تلفزيوني.
أضف مسبار الفلورسنت المحايد BODIPY في الخلايا واحتضانه في الظلام لمدة 30 دقيقة. بعد ثلاث غسلات PBS ، أضف DMEM الذي يحتوي على حمض اللينوليك إلى الخلايا. ضع طبق الثقافة في أخدود مجهر محطة الخلية الحية وقم بتشغيل المجهر والكمبيوتر.
قم بتشغيل برنامج NIS-Elements. ابحث عن مجال الرؤية بتكبير 4x. ثم اضبطه على 40x ، وقم بتشغيل PFS ، وأعد التركيز ، وحدد مجال الرؤية المناسب.
للتشغيل التجريبي ، اضبط الوقت والقنوات المناسبة. ثم اضغط على Run Now لتصوير العينات لمدة دقيقة واحدة. بالنسبة للتجربة، في علامة التبويب الوقت، اضبط الفاصل الزمني بخمس دقائق ومدة التصوير بست ساعات، واضبط قنوات الفلورسنت والمجال الساطع، واضغط على تشغيل الآن لتصوير العينات.
ثم اختر ملف متبوعا بتنسيق Save As و AVI Image File لتصدير البيانات إلى مقطع فيديو بتنسيق AVI. تم تشكيل LDs الكبيرة من خلال اندماج LDs الصغيرة. في أول 15 دقيقة ، كان هناك LDs أصغر.
من 20 دقيقة ، بدأوا في الاندماج وتم دمجهم بالكامل في LDS أكبر لمدة 35 دقيقة.