في أنبوب طرد مركزي دقيق 1.5 ملليلتر على الجليد ، ادمج 10 ميكرولتر من المستخلص الخالي من الخلايا مع أربعة ميكروغرام من الحمض النووي البلازميد و 25 ميكرولتر من محلول تخليق البروتين الخالي من الخلايا 2X. اصنع ما يصل إلى حجم إجمالي قدره 50 ميكرولتر بالماء المقطر المزدوج لتحضير محلول تخليق البروتين الخالي من الخلايا. تزن 0.75 جرام من الأغاروز وتضاف إلى 100 ملليلتر من محلول الماء المقطر المزدوج لتحضير 0.75٪ أغاروز.
قم بميكروويف الأغاروز بنسبة 0.75٪ في رشقات نارية مدتها 30 ثانية بقوة عالية وماصة 50 ميكرولتر من الأغاروز المنصهر إلى أنابيب طرد مركزي دقيقة سعة 1.5 ملليلتر أو في قوالب بالشكل المطلوب. ضع الأغاروز المنصهر على كتلة حرارية مضبوطة على 50 درجة مئوية واترك الأغاروز يبرد ولكن لا يتبلمر. بعد ذلك ، امزج الأغاروز المنصهر مع محلول تخليق البروتين الخالي من الخلايا عن طريق السحب والتحريك بطرف الماصة.
اترك المواد الهلامية لتبرد إلى درجة حرارة الغرفة وتبلمر لمدة دقيقتين تقريبا. نقل الأغاروز المبلمر إلى أنابيب الطرد المركزي الدقيقة 1.5 ملليلتر مع ملعقة وتجميد فلاش في النيتروجين السائل. ضع الهلاميات المائية المجمدة في تخزين 80 درجة مئوية تحت الصفر لمدة ساعة واحدة.
بعد ذلك ، قم بإزالة أغطية أنابيب الطرد المركزي الدقيقة. قم بتغطية الأنابيب بغشاء شمعي واخترق الفيلم للسماح بتجفيف الرطوبة. اضبط درجة حرارة مجفف التجميد على 20 درجة مئوية تحت الصفر والضغط على 0.1 ملليبار وقم بتجميد أجهزة تخليق البروتين الخالية من الخلايا لمدة 18 ساعة أو طوال الليل.
أعد ترطيب الأجهزة المجففة بالتجميد لمدة 30 دقيقة باستخدام 50 ميكرولترا من الماء المقطر المزدوج بدون سائل زائد ، وانقل المواد الهلامية إلى صفيحة عيار سوداء ذات 384 بئرا باستخدام ملعقة. أخيرا ، ضع لوحة المعايرة الدقيقة على قارئ الألواح واستخدم إعدادات قارئ اللوحة الموضحة على الشاشة للكشف عن التألق وتحليله. يظهر تخليق البروتين الخالي من الخلايا ل eGFP و mCherry في هيدروجيل باستخدام محللات خلايا E.coli في هذا الشكل.
تم تحضير 0.75٪ من جل الأغاروز بدون قالب الحمض النووي بأربعة ميكروجرام من قالب eGFP أو mCherry أو بأربعة ميكروجرام من كل من قالب eGFP و mChere. يتم أيضا عرض تراكب للقناتين ، ويتضمن التراكب صورة تباين التداخل التفاضلي. أكدت النتائج التعبير المشترك لكل من mCherry و eGFP في الأغاروز.
