Digestion of Synovitis Tissue

ابدأ بوضع مفاصل ركبة الفأر المشرحة في طبق ثقافة. نضح وسط الثقافة وإضافة وسط ثقافة جديدة. كرر الغسيل ثلاث أو أربع مرات.

ثم تحت مجهر ستيريو ، قم بخلع جميع المفاصل في وسط الاستزراع عن طريق سحبها باستخدام ملاقط دقيقة. قم بإزالة الساق وأكبر عدد ممكن من الأوعية والأوتار والأربطة ، مع الحرص على عدم كسر العظام. تحضير اثنين من أنابيب 15 ملليلتر لكل عينة.

باستخدام الملقط ، انقل العظام المخلوعة بالأنسجة الرخوة إلى الأنبوب الأول. لكل عينة تم الحصول عليها من كل من الكفوف الخلفية إضافة أربعة ملليلتر من وسط الهضم إلى الأنبوب. لجمع الخلايا المتبقية وشظايا الأنسجة نقل وسط الثقافة من طبق التشريح إلى أنبوب 15 ملليلتر الثاني.

أجهزة الطرد المركزي المتوسطة عند 500 جرام لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. بعد إزالة المادة الطافية ، أعد تعليق الحبيبات بمليلتر واحد من وسط الهضم. ونقل هذا الحل إلى أول أنبوب 15 ملليلتر بحيث يحتوي على جميع الأنسجة تقريبا ، في المجموع خمسة ملليلتر من وسط الهضم.

ثم هضم العينة لمدة 60 إلى 120 دقيقة عند 37 درجة مئوية مع الرج في فرن التهجين. بعد الحضانة ، امزج العينة عن طريق سحب وتصفية محلول الخلية من خلال مصفاة خلية 40 ميكرون في أنبوب 50 ملليلتر. أضف 10 ملليلتر من وسط الثقافة إلى الأنبوب من خلال مصفاة الخلية.

أجهزة الطرد المركزي عند 300 غرام لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة. قم بإزالة المادة الطافية وأعد تعليق حبيبات الخلية ب 10 ملليلتر من وسط الثقافة. كرر الطرد المركزي ، وتخلص من المادة الطافية ، وأعد تعليق الحبيبات بمليلتر من وسط الثقافة.