Mounting the Mouse on the Live Imaging Insert for Intravital Imaging

قبل وضع الماوس المخدر على ملحق التصوير المباشر المثبت على مرحلة المجهر المقلوب ، قم بربط أنبوب الأيزوفلوران بمخروط الأنف المرفق من خلال قوس أنبوب الزاوية على الإدخال. بعد توصيل لوحة الحرارة بوحدة التحكم التي تحتوي على مسبار مقياس حرارة شرجي متصل وتشغيله ، انقل الماوس المخدر من غرفة الحث إلى لوحة الحرارة. ثم قم بتثبيت مخروط الأنف على الماوس.

أدخل المسبار الشرجي في الحيوان واضبط وحدة التحكم للحفاظ على درجة حرارة ثابتة للجسم تبلغ حوالي 36 درجة مئوية. قم بتغطية الماوس في وضع صحيح بغلاف بلاستيكي لاحتجاز حرارة الجسم ورفع درجة حرارة الجسم. ضع الماوس بحيث يحاذي رأسه قرص انزلاق الغطاء وشل حركة أذنه على وسط انزلاق الغطاء الزجاجي باستخدام مشبك أذن معدني أو شريط.

بعد الانتهاء من التصوير ، حدد خيار التدفق المنخفض على المرذاذ الإلكتروني لإيقاف توصيل الأيزوفلوران. انقل الماوس إلى وسادة التدفئة حتى يصبح متنقلا. بعد إزالة القرص المنزلق للغطاء، امسحه بورق العدسة ومحلول العدسة.

قم بتخزينه بشكل صحيح لتجنب الخدوش لإعادة الاستخدام. بعد ذلك ، افصل أنبوب التخدير عن قوس الإدخال وفك الملحق من مرحلة المجهر. أظهرت مداخن Z المكتسبة من أنسجة أذن الفأر الحية ذات العلامات الفلورية الحد الأدنى من الانجراف في محاور x و y و z بمرور الوقت ، مما يؤكد صحة إدخالات التصوير المباشر المطبوعة 3D المخصصة.

كشفت النقاط الزمنية من فيلم الفاصل الزمني لمدة ثلاث ساعات لخلايا البشرة ذات أذن الفأر الإيجابية mCherry لفأر ذكر بالغ عن مستوى z واحد ظل في التركيز على مدار الوقت الممتد. تم إجراء ملاحظات مماثلة من فيلم آخر بفاصل زمني مدته ثلاث ساعات للخلايا الليفية الجلدية الإيجابية للأذن GFP لأنثى فأر بالغة.