للبدء ، ارتد معدات الحماية الشخصية ، بما في ذلك حماية العين والقناع الجراحي والقفازات غير المطاطية. تحضير 20 ملليلتر من الورم الأرومي العصبي للفأر أو خلايا BHK-21 بتركيز 3.0 مرات 10 إلى الخلايا الخامسة لكل مليلتر في EGM. حافظ على الخلايا المحضرة باردة حتى تصبح جاهزة للاستخدام.
بعد ذلك ، قم بإعداد فيروس CVS-11 عن طريق تخفيفه في EGM. تأكد من إبقاء الفيروس المحضر باردا حتى يتم استخدامه. قم بتنظيف حجرة منزلقة الرطوبة وشرائح مجهر البئر المطلي بالبولي تترافلوروإيثيلين بنسبة 70٪ إيثانول واتركها تجف في الهواء في خزانة السلامة الحيوية.
بعد التنظيف ، أضف الماء المقطر إلى شرائط الورق الماص في غرفة الشريحة لضمان رطوبة ثابتة طوال العملية. باستخدام ملصق قلم رصاص ، كل شريحة تحتوي على معلومات التعريف المطلوبة ، مثل رقم الدفعة والتاريخ ونوع الخلية. ضع الشرائح المسماة في حجرة الشرائح للتخزين.
ثم ضع 50 ميكرولترا من تخفيف الفيروس على الآبار على شرائح المجهر باستخدام ماصة متكررة. ضع 50 ميكرولترا من تخفيف الخلايا على كل بئر احرص على عدم تلويث طرف الماصة بالفيروس الموجود بالفعل في البئر. بعد ذلك ، أغلق حجرة منزلق الرطوبة وضعها في الحاضنة الرطبة بين 34 و 36 درجة مئوية.
بعد ذلك ، قم بإزالة الشريحة من غرفة الرطوبة واستنشاق المادة الطافية بدقة. اغسل الشريحة لمدة دقيقتين في وعاء كوبلين مملوء ببرنامج تلفزيوني ، ثم اتركه يجف في الهواء. ضع الشريحة في جرة كوبلين مملوءة بالأسيتون البارد لإصلاح العينة.
ضع البرطمان في مجمد بدرجة حرارة 20 درجة مئوية تحت الصفر معتمد للمواد القابلة للاشتعال لمدة ساعة على الأقل. بمجرد أن يتبخر الأسيتون وتجف الشريحة ، ضع الأجسام المضادة الفلورية المباشرة المتقارنة بداء على آبار الشريحة واحتضان الشريحة لمدة 30 دقيقة في حاضنة رطبة من 34 إلى 36 درجة مئوية. ثم اغسل الشريحة مرتين في جرة كوبلين من PBS لمدة دقيقتين لكل منهما.
جفف الشريحة في الهواء وقم بتركيب انزلاق الغطاء باستخدام 0.05 مولار تريس ، 0.15 مولار كلوريد الصوديوم في 20٪ حامل جلسرين. استخدم مجهر الفلورسنت بتكبير 200 مرة لتقييم عدوى الخلية. بعد ذلك ، قم بإزالة الشرائح المتبقية من الحاضنة وغرفة الرطوبة.
نضح طاف من كل بئر بعناية. ثم ضع الشرائح في جرة كوبلين مع برنامج تلفزيوني لمدة دقيقة إلى دقيقتين. اترك الشرائح تجف في الهواء لمدة 30 دقيقة تقريبا ثم قم بتخزينها في درجة حرارة 80 درجة مئوية تحت الصفر حتى الاستخدام.
