للبدء ، قم بإعداد التخفيف لمصل المريض أو عينات السائل الشوكي الدماغي للاختبار. قم بإعداد المرافق المطلوب بتركيز العمل المناسب عن طريق تخفيفه في برنامج تلفزيوني بنسبة 0.05٪ Evans Blue. بالنسبة لاختبارات الأجسام المضادة الفلورية غير المباشرة ، استرجع العدد المناسب من شرائح المستضد المعدة المطلوبة للفحص.
اترك الشرائح تذوب وتجف تماما. بعد ذلك ، ضع الشرائح في جرة كوبلين مملوءة بالأسيتون وانقلها إلى مجمد بدرجة حرارة 20 درجة مئوية تحت الصفر معتمد للمواد القابلة للاشتعال لمدة ساعتين إلى ليلة وضحاها. بعد ذلك ، قم بإزالة الشرائح من الأسيتون واتركها تجف في الهواء.
الآن ، ضع الشرائح في صندوق غرفة الرطوبة داخل خزانة السلامة البيولوجية. للحفاظ على الرطوبة ، أضف شرائط ماصة مبللة بالماء المقطر إلى الغرفة. ضع 50 ميكرولترا من كل عينة تحكم أو تخفيف عينة أو برنامج تلفزيوني على البئر المحدد مسبقا.
ضع غرفة انزلاق الرطوبة المغلقة عند 37 درجة مئوية ، حاضنة رطوبة ثاني أكسيد الكربون 5٪ لمدة 30 دقيقة. بمجرد الانتهاء من ذلك ، قم بإزالة غرفة شريحة الرطوبة من الحاضنة ونقلها إلى خزانة السلامة الحيوية. باستخدام طرف الشافطة ، قم بشفط المادة الطافية بعناية من كل بئر دون إزعاج الطبقة الأحادية للخلية.
بعد ذلك ، ضع قطرة واحدة من برنامج تلفزيوني على كل بئر باستخدام ماصة قطارة معقمة. قم بشفط PBS بعناية وانقل كل شريحة إلى جرة كوبلين مليئة ب PBS. بعد ذلك ، ضع الشرائح مرة أخرى في صندوق غرفة الرطوبة.
ضع 50 ميكرولترا من الأجسام المضادة المناسبة للإنسان المتقارن على كل بئر واحتضانها لمدة 30 دقيقة في حاضنة رطبة. في نهاية الحضانة ، انقل غرفة الرطوبة إلى خزانة السلامة الحيوية. نضح الطاف باستخدام طرف الشافطة.
بعد ذلك ، ضع قطرة واحدة من برنامج تلفزيوني على كل بئر باستخدام ماصة قطارة معقمة. بعد إزالة PBS ، اغسل الشريحة مرتين في جرة كوبلين من PBS لمدة 15 دقيقة. بمجرد غسلها ، اترك الشرائح تجف في الهواء ، ثم قم بتركيب زلة غطاء مع وسائط التثبيت.
خذ الشرائح واقرأها تحت المجهر الفلوري. صنف العينات من سالب إلى أربعة موجب مع عينات سالبة لا تظهر أي مضان وأربع عينات زائد تظهر مضان أخضر ساطع. قم بتعيين العينات وقيمة نقطة النهاية التي يمثلها عامل التخفيف الذي تعرض عنده العينة درجة زائد واحد إلى اثنين.
بعد التطعيم الأولي ، لوحظت مستويات عالية من كل من الغلوبولين المناعي M و G في عينات المرضى. بعد ستة أشهر تقريبا من التطعيم ، كانت مستويات أقل بكثير من كلا الجسمين المضادين موجودة في عينات المرضى ، لكن مستويات الغلوبولين المناعي M انخفضت بالكامل تقريبا. بعد 18 شهرا من التطعيم ، لم يتم اكتشاف الأجسام المضادة للغلوبولين المناعي M في عينات المرضى.
استمرت مستويات الغلوبولين المناعي G وبقيت مثل تلك التي تم اكتشافها في نقطة زمنية مدتها ستة أشهر بعد الانخفاض الأولي من النقطة الزمنية لمدة أسبوعين.
