Assessing Acinetobacter Biofilm Viability Count

ابدأ بإضافة ملليلتر واحد من اللقاح البكتيري إلى كل بئر من صفيحة بئر البوليسترين المعقمة 12. احتضان اللوحة عند 25 درجة مئوية لمدة 24 ساعة. ثم قم بإزالة المادة الطافية باستخدام ماصة.

أضف بعناية 1.5 ملليلتر من محلول ملحي مخزن من الفوسفات المعقم أو PBS إلى كل بئر ، ومرة أخرى ، قم بإزالة المادة الطافية باستخدام الماصة. بعد إضافة ملليلتر واحد من PBS المعقم إلى كل بئر مرة أخرى ، استخدم كاشطات الخلايا المجهزة لكشط الأسطح السفلية والجدران للآبار. انقل معلق الخلية المحصودة إلى أنبوب بلاستيكي معقم يحمل علامة 10 إلى الأنبوب السالب الذي يحتوي على تسعة ملليلتر من المحلول الملحي و 10 إلى 20 حبة زجاجية.

دوامة الأنبوب لمدة 60 ثانية بأقصى سرعة. بعد ذلك ، قم بإجراء تخفيف تسلسلي بمقدار عشرة أضعاف عن طريق نقل ملليلتر واحد من تعليق الخلية من الأنبوب السابق إلى أنبوب معقم آخر يحمل علامة 10 إلى سالب اثنين يحتوي على تسعة ملليلتر من المحلول الملحي. استمر في عملية التخفيف التسلسلي هذه حتى الأنبوب 10 إلى سالب سبعة.

انشر 100 ميكرولتر من كل تخفيف على ألواح أجار acinetobacter منفصلة. احتضان لوحات أجار عند 30 درجة مئوية لمدة 24 إلى 42 ساعة. ثم احسب عدد المستعمرات الحمراء النموذجية على كل لوحة يدويا ، مع الأخذ في الاعتبار تلك الموجودة في النطاق بين 10 و 250.

تحتوي جميع عزلات الراكدة باستثناء A.bouvetii على خلايا تعادل سبعة إلى ثمانية لوغاريتم CFU لكل بئر في الأغشية الحيوية الخاصة بها. بينما كان لدى A.bouvetii رقم خلية أقل بكثير عند 4.4 Log CFU.