إذابة الخلايا العصبية mDA البشرية المشتقة من iPSC للبذر

لإذابة الخلايا العصبية في يوم البذر ، سخن حمام الماء إلى 37 درجة مئوية. أيضا ، قم بموازنة وسائط الصيانة الكاملة مع درجة حرارة الغرفة مع حمايتها من الضوء. وفي الوقت نفسه ، قم بإزالة القارورة التي تحتوي على الخلايا العصبية المجمدة التي تم الحصول عليها تجاريا من خزان النيتروجين السائل ونقلها إلى الثلج الجاف.

ثم ضع القارورة في حمام مائي عند 37 درجة مئوية لمدة دقيقتين لضمان الذوبان الكامل. بعد ذلك ، تطهير القارورة باستخدام 70 ٪ من الإيثانول. باستخدام ماصة P1000 ، قم بنقل ما يقرب من 370 ميكرولتر من الخلايا العصبية المذابة من القارورة إلى أنبوب طرد مركزي سعة 50 ملليلتر.

شطف القارورة الفارغة مع 630 ميكرولتر من وسط الصيانة الكاملة. وباستخدام ماصة، افردي الوسط بالتنقيط في الأنبوب الذي حجمه 50 ملليلترا بزاوية 45 درجة. بطريقة مماثلة ، باستخدام ماصة P1000 ، أضف ملليلتر واحد من وسيط الصيانة الكاملة إلى أنبوب الطرد المركزي 50 ملليلتر.

ثم أضف ببطء مليلتر إضافيين من وسيط الصيانة الكامل في الأنبوب. بعد ذلك ، امزج 10 ميكرولتر من تريبان الأزرق مع 10 ميكرولتر من تعليق الخلية في أنبوب صغير. ثم أضف 10 ميكرولتر من الخليط إلى شريحة غرفة العد لحساب الخلايا.

بعد عد الخلايا ونقل الخلايا العصبية إلى أنبوب سعة 15 ملليلتر ، يتم استخدام جهاز الطرد المركزي عند 400 جرام لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك ، قم بإزالة الطاف. باستخدام ماصة P1000 ، أعد تعليق حبيبات الخلايا العصبية بعناية في ملليلتر واحد من وسط الصيانة الكامل.

أخيرا ، أضف الحجم اللازم من الوسط لتحقيق التركيز المطلوب لبذر الخلايا العصبية في نفس اليوم.