لإعداد نظام ثقافة التدفق متعدد القنوات الجديد الخالي من المضخة ، بعد تجميع وحدة خزان الوسائط أو MRM ، أدخل مجموعات الأنابيب فيه وضع MRM في السخان. بعد تثبيت السخان في مكانه ، تابع إدخال مجموعات غرفة الأنسجة أو TCAs في وحدة غرفة التروية أو PCM. باستخدام أداة إدراج TCA ، أدخل كل من TCAs الثمانية واحدا تلو الآخر في فتحات PCM.
تأكد من الضغط بقوة على المحول باستخدام الأداة حتى يلامس الجزء العلوي من غلاف الأنبوب حول كل غرفة السطح الذي يحيط بالثقوب الموجودة في PCM. ضع PCM المجمع جزئيا جانبا مع دعامة PCM وستة مسامير. بعد 30 دقيقة من تجميع العلبة وبعد وصول MRM إلى درجة الحرارة المطلوبة ، باستخدام ماصة 50 ملليلتر ، قم بنقل perfusate المتوازن مسبقا إلى ملحق MRM المسخن مسبقا عن طريق تشتيت السائل برفق أسفل الجانبين.
بعد ذلك ، لوضع PCM على MRM ، أدخل أنابيب مقاومة TCA المنبثقة من أسفل PCM في إدخالات MRM ، أربعة على كل جانب من مقسم MRM. قم بتوجيه الوحدة بحيث تستقر غرف الأنسجة على كاشف الأكسجين بمجرد وضعها. قم بتثبيت PCM بدعامة الدعم باستخدام ستة براغي ومفك البراغي الكهربائي.
ثم قم بتثبيت TCAs داخل زعانف دعم PCM باستخدام الشريط المطاطي المقدم ، وقم بتمديده حول الزعانف على مستوى الحشيات المطاطية. ضع كاشف الأكسجين على حامل الكاشف لضمان وضع وجهه على زعانف PCM. قم بمحاذاة أزواج الكاشف الضوئي LED مع الصبغة الحساسة للأكسجين في غرف الأنسجة عن طريق فك البراغي الموضوعة على جانب حامل الكاشف وضبط الأدلة الجانبية للكاشف إذا لزم الأمر.
أخيرا ، ضع الغطاء أعلى العلبة. لتحميل الأنسجة في الغرف ، انتظر حتى يصبح مستوى الوسائط 0.5 بوصة من الأعلى. لتحميل شبكية العين المحصودة أو الصلبة المشيمية RPE ، باستخدام ملقط نقطة دقيقة ، ضع الشبكية برفق دون طيها في كل غرفة.
في هذه الأثناء ، استخدم مناديل لمنع سائل حجرة الأنسجة من التنقيط على مستشعر الأكسجين. دع المنديل يغرق نحو الحنق وعليه. لتحميل خلايا RPE على أغشية Transwell ، بعد تمرير الخلايا المحضرة بنسبة 0.25٪ من التربسين EDTA ، قم بزرعها على مرشحات محفورة بمسار البولي إيثيلين تيريفثاليت بحجم مسام 0.4 ملم.
في يوم التجربة ، قم بتقطيع الأغشية إلى ثلاثة شرائط متساوية العرض وتحميلها في غرف الأنسجة باستخدام ملقط. كان معدل استهلاك الأكسجين ، أو OCR ، لشبكية العين ثابتا خلال الوقت الذي تم فيه حقن مركبات الاختبار ، مما يشير إلى صحة ووظيفة الأنسجة المستقرة ويدعم صحة الطريقة. تمشيا مع البيانات التي تم الحصول عليها باستخدام طرق التروية التقليدية لكل من شبكية العين والصلبة المشيمية RPE ، انخفض التعرف الضوئي على الحروف استجابة ل oligomycin وزاد استجابة ل FCCP.
كانت التغيرات في معدل إنتاج اللاكتات أو LPR التي لوحظت عكس تلك التي لوحظت ل OCR. استجابت خلايا RPE ، التي لم يتم تحليلها مسبقا باستخدام أنظمة التدفق ، بشكل مشابه لالصلبة المشيمية RPE باستخدام هذه الطريقة.
