قم بتثبيت مجموعة التروية في الوحدة وفقا لبروتوكول الشركة المصنعة. داخل غطاء المحرك ، قم بتوصيل شريحة سائلة فارغة به وأضف السيتوكين المكمل SFM-34 لملء كلا الخزانين في ظل ظروف معقمة. نقل الوحدة السائلة إلى الحاضنة ، وتوصيلها بالمضخة لإزالة الفقاعة والمعايرة.
قم بإزالة الوحدة السائلة بعناية مع المجموعة المتصلة من الحاضنة ونقلها إلى غطاء المحرك مع الرقائق التي تحتوي على الخلايا. ثبت الأنبوب على جانبي شريحة الاختبار. قم بإزالة الأنبوب المثبت من شريحة الاختبار وقم بتوصيل الشريحة التي تحتوي على الخلايا بالأنبوب.
بعد إزالة المشابك أو فتحها ، انقل النظام إلى الحاضنة وقم بتوصيل مضخة الهواء بالوحدة السائلة. قم بإزالة الوحدة السائلة من المضخة وانقلها إلى الغطاء. ثبت الأنبوب على جانبي الشريحة وقم بإزالة الأنبوب من الخزانات الموجودة على الشريحة.
بعد إزالة الوسط برفق من الرقاقة ، اغسل الخلايا بمحلول ملحي مخزن بالفوسفات من Dulbecco أو DPBS. أضف 150 ميكرولتر من المخزن المؤقت للتفكك واحتضانه لمدة ثلاث دقائق عند 37 درجة مئوية. عندما يتم فصل الخلايا ، اجمع المخزن المؤقت للتفكك من خزان واحد واغسل القناة مرة واحدة باستخدام DPBS.
اغسل الخزان بمخزن الغسيل المؤقت لجمع الخلايا المتبقية من الشريحة. أخيرا ، أضف ملليلترا واحدا من المخزن المؤقت للغسيل إلى الخلايا المجمعة قبل استخدام 10 ميكرولتر منه لحساب الخلايا. قبل التحفيز ، أظهرت الخلايا اتجاها عشوائيا ، ولكن مع التحفيز ، تم إعادة توجيهها بالتوازي مع اتجاه التدفق.
أظهر ملف تعريف تعبير CD34 للخلايا المزروعة تحت التدفق لمدة خمسة أيام والنسبة المئوية للخلايا الإيجابية CD34 المسترجعة من القناة السائلة فعالية البروتوكول.
