Rat Retina Excision and Mounting on Porous Membrane for Calcium Imaging

Please note that all translations are AI generated. Click here for the English version.

335 Views

•

02:42 min

•

August 18th, 2023

DOI :

10.3791/200529-v

August 18th, 2023

•

Marina Cunquero¹, Maria Marsal¹, Gustavo Castro-Olvera¹, Steven T. Walston², F. Taygun Duvan², José Gabriel Macias-Montero³, Carles Puigdengoles³, Mokhtar Chmeissani³, Jose A. Garrido²^,⁴, Pablo Loza-Alvarez¹

¹Institut de Ciències Fotòniques (ICFO), The Barcelona Institute of Science and Technology, ²Catalan Institute of Nanoscience and Nanotechnology (ICN2), CSIC and BIST, Campus UAB, ³Institut de Física d'Altes Energies (IFAE), The Barcelona Institute of Science and Technology, Campus UAB, ⁴Institució Catalana de Recerca i Estudis Avançats (ICREA)

Transcript

قبل أسبوعين إلى ثلاثة أسابيع من التصوير ، يتم حقن الجسم الزجاجي لعين الجرذ المخدرة بالجزيئات الفيروسية التي تحمل مؤشر الكالسيوم المشفر وراثيا. باستخدام تنظير قاع العين و OCT ، يتم فحص بنية الشبكية بحثا عن ردود الفعل السلبية من حقن مؤشر الكالسيوم. بعد أسبوعين من الحقن ، أظهرت طبقة الخلايا العقدية أو GCL انبعاثا مضانا.

ثم يبدأ استئصال شبكية العين من الفئران الرحيم. خذ العينين معبرا عن AAV2-CAG-GCaMP5G وقم بإزالة جميع الأنسجة المحيطة بمقلة العين باستخدام ملقط منحني صغير ومقص زنبركي ناعم. بعد ذلك ، خذ قطعة من ورق الترشيح ثلاثة في ثلاثة سنتيمترات.

ضعه على غلاف طبق طوله 3.5 سم واغمر ورق الترشيح بوسط AIMS. ضع مقلة العين على الورق مع توجيه الجزء الأمامي نحو المشغل. استخدم زوجا من الملقط المستقيم لتثبيت مقلة العين بزاوية 45 درجة تقريبا من سطح الطبق.

استخدم الفجوة بين الملقط المستقيم لتوجيه شق بشفرة. ثم اغمر مقلة العين في وسط AIMS. استخدم ملقط مستقيم ومقص زنبركي ناعم لفصل الأجزاء الأمامية والخلفية من العين.

قم بإزالة العدسة بعناية باستخدام زوجين من الملقط المستقيم وافصل الشبكية عن الصلبة. باستخدام مقص زنبركي ناعم ، قم بعمل شق في الصلبة باتجاه العصب البصري واقطعه حتى يتم فصل الشبكية بنجاح عن كوب العين. انقل القطعة المستأصلة من شبكية العين إلى غشاء التركيب باستخدام ماصة بلاستيكية مقطوعة.

ثم استخدم زوجا من الملقط المستقيم لتركيب شبكية العين بشكل مسطح ، مما يضمن توجيه طبقة الخلايا العقدية لأعلى. بعد ذلك ، استخدم ماصة بلاستيكية مزودة بطرف ماصة سعة 100 ميكرولتر لإزالة الوسائط ، مما يسهل التصاق قطعة الشبكية بالغشاء المسامي. بعد ذلك ، اقلب المجموعة على مصفوفة الأقطاب الكهربائية الدقيقة أو MEA ، مع وضع GCL أعلى الأقطاب الكهربائية.

ثم املأ حمام العينة بوسط AIMS المؤكسج.