ابدأ بغمر شبكية الفأر المنقسمة بأغشية النيتروسليلوز المرفقة في 4٪ بارافورمالدهيد على الجليد لمدة 30 دقيقة. بعد ذلك ، استبدل بارافورمالدهيد ب 5 إلى 10 ملليلتر من درجة حرارة الغرفة PBS لغسل شبكية العين المنقسمة. قبل إزالة الشبكية المنقسمة من النيتروسليلوز ، استخدم قلم حاجز كاره للماء لإعداد آبار دائرية على شريحة مجهرية.
اترك الآبار تجف في الهواء لمدة 5 إلى 10 دقائق. بعد ذلك ، ضع شبكية العين المنقسمة في الآبار المعدة وأضف ما يكفي من PBS لغمرها. تحت مجهر التشريح ، ارفع حواف الأنسجة برفق باستخدام فرشاة رسم دقيقة ودائرة حول الشبكية لفصلها عن الغشاء.
استخدم الملقط وفرشاة الرسم لإزالة الغشاء من تحت القطعة العائمة من شبكية العين. ثم استنشق بعناية بعيدا عن PBS المتبقية ، بحيث تقع أنسجة الشبكية على المجهر شريحة خلية العقدة الجانب لأسفل. أشار وضع العلامات المناعية للمشابك عبر الجزء العلوي من الشبكية المنقسمة إلى أنه تم الاحتفاظ بالأطراف المشبكية المستقبلة للضوء.
ومع ذلك ، كانت نوى المستقبلات الضوئية غائبة ، مما يؤكد انقسام شبكية العين من خلال محاور مستقبلات الضوء. تم تقييم السلامة المتشابكة عن طريق وضع علامات RGS11 في التشعبات ON-BC و CtBP2 في شرائط متشابكة للمستقبلات الضوئية. لم يضر الانقسام بمورفولوجيا المحطات المستقبلة للضوء في الطبقة الضفيرية الخارجية.
تم تقييم صلاحية كرات الدم الحمراء في شبكية العين المنقسمة باستخدام صبغة نووية قريبة من الأشعة تحت الحمراء. لوحظ تباين إقليمي في صلاحية الخلية عبر الأنسجة مع ارتفاع موت الخلايا في بعض المناطق مع بقاء معظم كرات الدم الحمراء قابلة للحياة بعد الانقسام. أظهر وضع العلامات المناعية لكرات الدم الحمراء ضد PKC alpha والخلايا الأفقية ضد Calbindin-D انتشارا سريعا للأجسام المضادة في شبكية العين المنقسمة بعد حضانة ساعة واحدة.
